摘 要：目的 研究（順）-3-（氯代亞甲基）-6-氟-硫色滿-4-酮（（z）-3-（chloromethylene）-6-fluorothiochroman-4-one，CMFT）體外抗BGC-823腫瘤細胞機理。方法 采用流式細胞儀檢測BGC-823腫瘤細胞周期和凋亡。結論 CMFT能夠抑制BGC-823細胞周期并誘導細胞發(fā)生凋亡。

關鍵詞：（順）-3-（氯代亞甲基）-6-氟-硫色滿-4-酮 凋亡 周期

中圖分類號：TQ46 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2012）12（b）-0248-01

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

RPMI1640（索萊寶科技有限公司，北京）；胰蛋白酶（Amersco，美國）；新生牛血清（天杭生物科技有限公司，浙江）；二甲基亞砜（DMSO）（索萊寶科技有限公司，北京）；Annexin V-FITC試劑盒（BD，美國）。

1.2 流式細胞儀檢測CMFT對BGC-823細胞凋亡的影響

取5×106個細胞接種于6孔板，培養(yǎng)12h后加入終濃度分別為40，20μmol·L-1的CMFT，DMSO為陰性對照，加藥24h后收集細胞，冷PBS洗滌2次，每組細胞不少于105個，按照Annexin V-FITC試劑盒操作說明處理細胞，用流式細胞儀FACSC Calibur（BD，美國）檢測凋亡。

1.3 流式細胞儀檢測CMFT對BGC-823細胞周期的影響

取對數(shù)生長期細胞5×106個接種于6孔板中，培養(yǎng)12h，設DMSO為溶劑對照組，實驗組加入CMFT使其終濃度為20 μmol·L-1。培養(yǎng)24h后收集細胞，冷PBS洗2次：每組細胞不少于106個，加預冷75%的乙醇固定24h，過濾，洗滌，PBS重懸，依次加入核糖核酸酶（RNase A）和碘化丙啶（propidium iodide，PI），避光孵育30 min，用流式細胞儀檢測周期。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計學分析

數(shù)據(jù)用±s表示，進行統(tǒng)計學t檢驗。*p <0.05為顯著性差異，**p <0.01為極顯著性差異：細胞周期數(shù)據(jù)用ModFit LTTM分析軟件（Verity Software House，美國）處理：凋亡數(shù)據(jù)用Cell Quest/Pro（BD，美國）進行分析。

2 結果

2.1 CMFT對BGC-823細胞凋亡的影響

BGC-823細胞經(jīng)CMFT作用24h后，對照組細胞凋亡8%，20 μmol·L-1CMFT組細胞凋亡11%，40 μmol·L-1CMFT組細胞凋亡40%（圖1）。

左上（UL），右上（UR），左下（LL）和右下 （LR）分別表示細胞損傷，壞死，存活和凋亡比例。A DMSO；B CMFT（20 μmol·L-1）；CCMFT（40 μmol·L-1）

2.2 CMFT對BGC-823細胞周期的影響

作用細胞24 h后，流式細胞儀分析顯示空白對照組和加入DMSO的陰性對照組無顯著性差異，實驗組G0/G1期細胞減少，S期和G2/M期細胞增加，且有顯著性差異（圖2）。

3 討論

近年來硫色滿酮類化合物的抗腫瘤活性受到人們的關注，楊更亮等根據(jù)硫色滿酮活性化合物的結構特征，通過結構修飾及改造，在3位、5位、6位和7位引入活性基團，設計合成了一系列新型硫色滿酮衍生物[3]。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，CMFT誘導了人胃癌BGC-823細胞凋亡，流式細胞儀檢測顯示S期和G2/M期細胞比例增加，在腫瘤細胞分裂周期中S+G2期比例升高意味著生長分數(shù)增高，細胞生長迅速。但造成細胞周期G2檢測點的失活的各種因素也可能造成同樣的現(xiàn)象。關于CMFT的抗腫瘤機理有待進一步研究。

參考文獻

[1] 祝士國，楊更亮，馬正月，等.氯代硫色烯并[4，3-c]吡唑啉衍生物的合成及其抗真菌活性[J].中國新藥雜志，2008，17（12）：1034-1036.

[2] 楊更亮，馬正月，田偉.新型抗菌、抗癌化合物及其衍生物的制備和用途[P].中國專利，專利號：PTC/CN/2010/000471.