馬 麗，李銀川，孫起夢(mèng)，劉興劍，李維林

〔江蘇省·中國(guó)科學(xué)院植物研究所(南京中山植物園)，江蘇南京210014〕

蕨類植物現(xiàn)存約12 000種，以熱帶、亞熱帶地區(qū)分布最廣。中國(guó)有蕨類植物61科223屬約2 600種，其中可供藥用的有300余種，以華南及西南地區(qū)分布較多［1］。據(jù)報(bào)道，藥用蕨類植物具有舒筋活血、除濕鎮(zhèn)痛、清熱滑腸、止咳化痰、利尿安神、止血、驅(qū)蟲、解毒、抗菌、抗癌和抗 HIV 等功效［2－7］，其化學(xué)成分主要包含酚類、黃酮類、生物堿類、甾體及三萜類等化合物，其中黃酮類化合物是蕨類植物中廣泛存在的一類成分，具有一定的分類學(xué)意義，且多具有松弛血管痙攣、抗心肌缺血、降血脂、抗腫瘤、抑菌和保肝等生理活性［8－9］。

南京紫金山共有蕨類植物25科36屬79種［10］，資源較豐富。為了明確紫金山藥用蕨類植物的資源現(xiàn)狀，為其進(jìn)一步深入開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，作者對(duì)采自紫金山的2科3屬4種蕨類植物地上和地下部分的總黃酮含量進(jìn)行了分析比較。

1 材料和方法

1.1 材料

供試的4種蕨類植物于2010年4月份采自南京紫金山，分別為鳳尾蕨科(Pteridaceae)鳳尾蕨屬(Pteris L.)種類井欄邊草(P.multifida Poir.)、鱗毛蕨科(Dryopteridaceae)鱗毛蕨屬(Dryopteris Adanson)種類紅蓋鱗毛蕨〔D.erythrosora(Eaton)O.Ktze〕和闊鱗鱗毛蕨〔D.championii(Benth.)C.Chr.〕以及貫眾屬(Cyrtomium Presl)種類貫眾(C.fortunei J.Smith)，原植物經(jīng)江蘇省·中國(guó)科學(xué)院植物研究所孫起夢(mèng)鑒定。

使用的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98%，生產(chǎn)批號(hào)R－100105)購自西安旭煌生物技術(shù)有限公司，其他試劑均為AR級(jí)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制參照文獻(xiàn)［1］的方法并略有改進(jìn)。用體積分?jǐn)?shù)70%乙醇配制質(zhì)量濃度0.1 g·L－1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液;分別精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.00、0.50、1.00、2.00、4.00 和 5.00 mL，用體積分?jǐn)?shù) 70% 乙醇定容至5.00 mL;分別加入質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)5%的NaNO2溶液0.25 mL，搖勻后靜置6 min;加入質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)10%的Al(NO3)3溶液0.325 mL，搖勻后靜置6 min;加入質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)4%的NaOH溶液2.00 mL，并用體積分?jǐn)?shù)70%乙醇定容至10.00 mL，搖勻后靜置12 min;以體積分?jǐn)?shù)70%乙醇為空白，于波長(zhǎng)510 nm處測(cè)定吸光值。以蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)x、吸光值為縱坐標(biāo)y擬合得到蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的回歸方程 y=12.530 0x－0.002 7(R2=0.999 2)，在蘆丁質(zhì)量濃度 0.000 0 ～0.050 0 g·L－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.2.2 樣品溶液的制備及總黃酮含量的測(cè)定 分別將4種植物的地上和地下部分分開，洗凈后于50℃烘干，粉碎;取50 g樣品粉末，用400 mL體積分?jǐn)?shù)70%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，過濾并減壓蒸干，所得浸膏于50℃真空干燥48 h，用體積分?jǐn)?shù)70%乙醇超聲波(功率100 W)處理10 min溶解并配制成 0.1 g·L－1待測(cè)樣品溶液，用0.45 μm 微孔濾膜過濾后待測(cè)。精密吸取1 mL待測(cè)樣品溶液，按照上述標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定方法于波長(zhǎng)510 mm處測(cè)定各樣品溶液的吸光值，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中總黃酮的含量(以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì))。

1.2.3 方法學(xué)考察

1.2.3.1 精密度實(shí)驗(yàn) 取貫眾地上部分的樣品溶液，按照上述標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定方法測(cè)定吸光值，連續(xù)測(cè)定5次，RSD值為0.27%，明顯小于0.50%，說明儀器的精密度符合測(cè)量要求。

1.2.3.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取貫眾地上部分樣品粉末5份，按上述方法制備待測(cè)樣品溶液并按照標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定方法測(cè)定吸光值，RSD值為2.20%，顯示本方法的重現(xiàn)性較好。

1.2.3.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 分別取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液1 mL和貫眾地上部分待測(cè)樣品溶液 1 mL，分別于 0、10、30、60、90、120、150和180 min按照上述標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定方法測(cè)定吸光值。在0～180 min內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品溶液和待測(cè)樣品溶液的RSD值分別為0.21%和0.60%，表明蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液和待測(cè)樣品溶液在3 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.2.3.4 回收率實(shí)驗(yàn) 精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.20 mL，精密加入貫眾地上部分待測(cè)樣品溶液2 mL，按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定方法測(cè)定吸光值?；厥章蕿?8.21% ～101.90%，平均加標(biāo)回收率為100.06%，RSD值為1.27%。

2 結(jié)果和討論

同一時(shí)期南京紫金山4種蕨類植物地上及地下部分的總黃酮含量見表1。由表1可見:井欄邊草的地上及地下部分總黃酮含量均最低，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別僅為0.31%和0.38%;地下部分的總黃酮含量以貫眾為最高，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.41%;地上部分的總黃酮含量以闊鱗鱗毛蕨為最高，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.05%。4種蕨類植物地下部分的總黃酮含量均高于其地上部分。

研究結(jié)果顯示:春季采收的紅蓋鱗毛蕨和貫眾地上和地下部分的總黃酮含量差異較大，其中，紅蓋鱗毛蕨地下部分的總黃酮含量為其地上部分的2.95倍，貫眾地下部分總黃酮含量為其地上部分的2.77倍，因此，以這2種蕨類植物春季植株為材料進(jìn)行總黃酮提取時(shí)，以收集地下部分為宜。闊鱗鱗毛蕨的地上和地下部分的總黃酮含量差異不大，其地上部位總黃酮含量在供試的4個(gè)種類中最高，因而，若要提取闊鱗鱗毛蕨的總黃酮?jiǎng)t可采集其地上部位。井欄邊草地上和地下部分的總黃酮含量均比較低。供試4種蕨類植物的總黃酮含量與方云山等［1］的測(cè)定結(jié)果有一定差異，推測(cè)這可能與樣品的采收季節(jié)以及取樣部位不同有關(guān)。

表1 南京紫金山4種蕨類植物不同部位總黃酮含量的比較Table 1 Comparison of total flavonoids content in different parts of four fern plants in Zijin Mountain of Nanjing

［1］方云山，楊雪瓊，劉勁蕓，等.32種云南蕨類植物中的總黃酮測(cè)定［J］.云南大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2008，30(4):401－404.

［2］董麗娜，孫起夢(mèng)，劉興劍，等.南京紫金山國(guó)家森林公園蕨類植物資源調(diào)查及區(qū)系分析［J］.南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2010，34(3):107－112.

［3］何春霞，蘇力坦·阿巴白克力.蕨類植物生物活性成分研究進(jìn)展［J］.中成藥，2007，29(5):736－740.

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［10］高增平，李瑞峰，王寶華，等.鱗毛蕨屬植物化學(xué)成分研究進(jìn)展［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2003，9(3):50－55.