李海龍，張俊清，賴偉勇，符乃光，譚銀豐

黃燈籠椒(Capsicum chinense Jacquin)為茄科辣椒屬多年生草本植物，起源于南美亞馬遜流域，成熟果實(shí)亮黃色，又叫黃帝椒;其味極辣并有奇香，營(yíng)養(yǎng)豐富，是海南特有的地方珍稀辣椒品種，在海南有著悠久的栽培和食用歷史。黃燈籠椒氣味芳香，能增加人的食欲，開發(fā)出的黃燈籠辣椒醬也是目前海南最熱銷的旅游產(chǎn)品之一，是海南最具開發(fā)潛力得特色農(nóng)作物之一［1，2］。由于黃燈籠辣椒的栽培技術(shù)要求較高，其抗病毒病和疫病的能力較差，使得黃燈籠椒的種植面積、產(chǎn)量和品質(zhì)都明顯減少，海南黃燈籠辣椒的產(chǎn)業(yè)發(fā)展受到了很大影響［2，3］。黃燈籠辣椒中的辣味成分也主要是辣椒素類物質(zhì)，辣椒素類物質(zhì)不僅鎮(zhèn)痛止癢、調(diào)節(jié)食欲及抗炎消腫，還在醫(yī)藥工業(yè)里具有廣泛應(yīng)用，在食品添加劑和生物農(nóng)藥等方面也具有廣闊的開發(fā)前景，因此，高含量辣椒素的辣椒品種也具有較高的附加值［4］。國(guó)內(nèi)有關(guān)黃燈籠椒的研究，也只有很少量報(bào)道，關(guān)于海南黃燈籠椒辣椒素含量方面的還未見報(bào)道。本文將進(jìn)行海南黃燈籠椒辣椒素含量測(cè)定，并與海南紅米椒、海南朝天椒等一些特有辣椒品種的辣椒素含量進(jìn)行比較，為海南黃燈籠辣椒的綜合開發(fā)利用提供依據(jù)，也為海南黃燈籠辣椒更好的進(jìn)行質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters515液相色譜系統(tǒng)(Waters 515泵，2996PDA檢測(cè)器)，美國(guó)Pall公司CascadeⅨ超純水器，SK5200LHC型超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 海南黃燈籠辣椒、海南米辣椒樣品分別購(gòu)買于?？凇⒘晁叭f寧菜市場(chǎng)的新鮮辣椒，海南雜交種黃燈籠椒購(gòu)于?？谑欣铣寝r(nóng)科院種植基地的新鮮辣椒;四川辣椒和貴州辣椒樣品購(gòu)買于?？诓耸袌?chǎng);辣椒素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)、甲醇(色譜純)、95%乙醇(分析純)，超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－水(體積比70∶30);流速:1.0 mL/min;UV檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:20μL;此條件下，樣品中辣椒素峰與雜質(zhì)峰分離度良好，見圖 1、2。

圖1 辣椒素對(duì)照品HPLC圖譜

圖2 海南黃燈籠椒HPLC圖譜

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取辣椒素對(duì)照品，加甲醇制成1 mg/mL的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。精密量取1 mL對(duì)照品儲(chǔ)備溶液于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，即得濃度為0.1 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

將洗凈后的辣椒去梗后，于50℃干燥6 h，粉碎，過60目篩，置于干燥器中保存?zhèn)溆谩７Q取辣椒粉約2.0 g，置于碘量瓶中，再加入精密量取的70%乙醇溶液100 mL，稱重，超聲處理60 min后，冷卻，稱重后，用70%乙醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，即得供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察

取2.2對(duì)照品溶液，精密量取0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 mL，加甲醇定容至 10 mL，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣2次，測(cè)定辣椒素峰面積，以峰面積平均值和辣椒素濃度進(jìn)行回歸處理，得回歸方程:Y=15077X+36677，r=0.9990。結(jié)果表明，辣椒素在2.0μg/mL～20.0μg/mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

取2.2對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定辣椒素峰面積，RSD=0.66%。表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取海南黃燈籠椒粉末，按2.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，分別于 0、4、8、16、24、48 h 各進(jìn)樣 1次，測(cè)定辣椒素峰面積，RSD=1.3%。表明供試品溶液在48 h之內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取海南黃燈籠椒粉末6份，按2.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定辣椒素平均含量為0.7344%，，RSD=1.7%。表明本法有良好的重復(fù)性。

2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn)

取海南黃燈籠椒粉末約1 g，精密稱定，按2.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定其辣椒素濃度。而后精密量取9份供試品溶液1 mL分置于標(biāo)號(hào)1～9號(hào)的10 mL容量瓶中，精密加入1.0 mL對(duì)照品溶液于1～3號(hào)容量瓶，精密加入1.5 mL對(duì)照品溶液于4～6號(hào)容量瓶，精密加入2.0 mL對(duì)照品溶液于7～9號(hào)容量瓶。按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 辣椒素加樣回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果(n=9)

2.9 樣品的測(cè)定結(jié)果

取各種辣椒樣品，分別按2.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液。按上述色譜條件，用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，測(cè)定個(gè)辣椒樣品中辣椒素的含量。結(jié)果見表2。

表2 不同品種、不同產(chǎn)地辣椒辣椒素含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

辣椒素在高溫下不穩(wěn)定，選取合適的辣椒素提取方法非常必要。綜合分析文獻(xiàn)報(bào)道［5－7］的辣椒素的提取制備方面信息，本文選用以70%乙醇做溶劑，超聲處理60 min的超聲輔助法對(duì)辣椒素進(jìn)行提取，避免高溫處理的損失。按此方法提取制備的供試品溶液，其辣椒素峰的峰型好，與相鄰色譜峰也有良好的分離度，雜質(zhì)峰也少。

本文選用甲醇－水(70∶30)做流動(dòng)相的HPLC法對(duì)辣椒素含量進(jìn)行測(cè)定，該法分離效果好、出峰時(shí)間適中，其穩(wěn)定性、重現(xiàn)性及精密度都很好，其平均回收率100.8%(n=9)，這些說明本方法在辣椒的處理過程中辣椒素?fù)p失少，適合辣椒中辣椒素含量的測(cè)定，并且流動(dòng)相組成簡(jiǎn)單。

從測(cè)定的辣椒樣品結(jié)果(表2)可看到，海南黃燈籠辣椒辣椒素含量高達(dá)8.37 mg/g，比文獻(xiàn)報(bào)道［8］的口感極辣的四川野山椒的8.02 mg/g還高。?？谑惺埸S燈椒椒的辣椒素含量最高，海南小紅米椒及朝天椒次之，四川辣椒、貴州辣椒等較少。同時(shí)，海口市售黃燈籠椒的辣椒素含量是海南小紅米椒的3倍多，是貴州辣椒和四川辣椒的13倍多。?？谑惺埸S燈籠椒也比萬寧產(chǎn)和雜交種黃燈籠椒的辣椒素含量高的多。不同品種、不同產(chǎn)地辣椒的辣椒素含量變化幅度很大，存在著廣泛的遺傳和變異。以上這些說明辣椒中辣椒素含量的高低與辣椒品種、種植環(huán)境密切有關(guān)。海南黃燈籠辣椒這一地方特有的珍稀辣椒品種口感極辣、風(fēng)味獨(dú)特，具有很高的綜合開發(fā)價(jià)值。有關(guān)海南黃燈籠辣椒的不同成熟期的辣椒素含量變化，辣椒果實(shí)不同部位的辣椒素含量等內(nèi)容也具有重要的意義，并有待于進(jìn)一步的研究。

［1］ 黃海波，淡明，郭安平，等.黃燈籠辣椒子葉離體培養(yǎng)與植株再生［J］.熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，26(3):18 －21.

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