徐國(guó)鋒，蘇海峰，底佳芳，張秀英

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱150030；2.浙江匯能動(dòng)物藥品公司，浙江 杭州314422）

產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridiumperfringens）是人和動(dòng)物腸道的一種重要共生菌和條件致病菌，也是正常雞腸道的常在菌群［1］，可產(chǎn)生多種外毒素，對(duì)人和多種動(dòng)物致病，尤其是與禽類壞死性腸炎（necrotic enteritis，NE）的暴發(fā)有直接的關(guān)系［2］。產(chǎn)氣莢膜梭菌在正常情況下棲息在盲腸，通常不會(huì)引起發(fā)病，但當(dāng)腸黏膜受到損傷或者腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生變化時(shí)，在消化道前段大量增殖，導(dǎo)致NE的發(fā)生和雞的死亡［3］。目前，防制壞死性腸炎的主要措施是在飼料中添加桿菌肽鋅等抗生素，但不合理使用抗生素將會(huì)造成細(xì)菌耐藥性和殘留，嚴(yán)重影響動(dòng)物健康養(yǎng)殖和人類健康［4］。

那西肽（Nosiheptide）是一種含硫多肽類抗生素，對(duì)革蘭陽(yáng)性球菌和桿菌具有較強(qiáng)的抑制作用［5］。飼料中添加那西肽可提高雞的增重率和飼料利用率，但是關(guān)于那西肽能否預(yù)防雞產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的雞壞死性腸炎的報(bào)道很少。本文評(píng)價(jià)了那西肽對(duì)人工感染的雞產(chǎn)氣莢膜梭菌病的預(yù)防效果，目的是為有效預(yù)控雞壞死性腸炎提供新思路和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌A型CVCC－52，購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。1%那西肽預(yù)混劑，由浙江匯能動(dòng)物藥品有限公司提供；15%桿菌肽鋅預(yù)混劑（對(duì)照藥物），購(gòu)自武漢遠(yuǎn)誠(chéng)共創(chuàng)藥業(yè)有限公司；其余所有試劑除特殊標(biāo)記外均為分析純。

1.2 動(dòng)物與日糧 1日齡伊莎婷特粉雛雞，購(gòu)自東北農(nóng)業(yè)大學(xué)孵化場(chǎng)；按雛雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)飼喂不含任何抗菌藥物的標(biāo)準(zhǔn)日糧，按正常程序進(jìn)行免疫接種和飼養(yǎng)管理。試驗(yàn)用料：大威禽用顆粒飼料，購(gòu)自哈爾濱市大威飼料制造有限責(zé)任公司，其有效成分為：蛋白含量＞18.0%、水分＜14.0%、總磷＞0.3%、鈣0.7%～1.0%、鹽0.3%～0.8%。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 將480只1日齡伊莎婷特粉雛雞隨機(jī)分成6個(gè)試驗(yàn)組，每個(gè)試驗(yàn)組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只，其中第1組為空白對(duì)照組（不感染不給藥組），第2組為陽(yáng)性對(duì)照組（感染不給藥組），第3組到第5組為那西肽低、中、高劑量組，第6組為藥物對(duì)照組。從1日齡開始那西肽低、中、高劑量組飼料中分別添加1.25mg、2.5mg、5mg的1%那西肽預(yù)混劑，藥物對(duì)照組在每公斤飼料中添加15%桿菌肽鋅預(yù)混劑200mg；連續(xù)飼喂至24日齡試驗(yàn)結(jié)束。在整個(gè)試驗(yàn)過程中，各組的一切用具嚴(yán)格分開。

在接種產(chǎn)氣莢膜梭菌前，先將雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌A型接種于VF厭氧培養(yǎng)基，37℃厭氧培養(yǎng)18～24h后采用菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定培養(yǎng)物的含菌數(shù)。從12日齡開始，給陽(yáng)性對(duì)照組、那西肽低、中、高劑量組、藥物對(duì)照組的每只雞口腔灌服1mL濃度為108CFU／mL的菌液，每天1次，同時(shí)在飲水中加入約105CFU／mL濃度的產(chǎn)氣莢膜梭菌（通過預(yù)試驗(yàn)確定），連續(xù)染毒3d。

1.4 測(cè)定指標(biāo) 在試驗(yàn)開始時(shí)（1日齡）、接種前（12日齡）和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)（第24天）分別稱各組雞的體重，記錄每天的飼料消耗量，計(jì)算各組的平均增重和料重比。每天觀察各組雞的臨床癥狀和死亡情況，統(tǒng)計(jì)死亡數(shù)；并對(duì)死亡的雞進(jìn)行剖檢；試驗(yàn)結(jié)束時(shí)（24日齡），每組各個(gè)重復(fù)各處死15只雞，取空腸、回腸、盲腸黏膜進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查，并仔細(xì)觀察小腸和盲腸病變，并對(duì)腸道病變程度進(jìn)行計(jì)分，計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)分為0，1，2，3四級(jí)［6］，即0級(jí)（沒有明顯損傷）、1級(jí)（腸壁變薄或出現(xiàn)纖維素樣）、2級(jí)（局部有壞死或潰瘍?cè)睿?級(jí)（大面積壞死）。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件ANOVA中的單因素方差分析法進(jìn)行分析，用Duncan′s檢驗(yàn)法進(jìn)行各組間的多重比較，所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀 各組雞在接種產(chǎn)氣莢膜梭菌前（1～12日齡）均未有明顯的臨床癥狀，空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、那西肽低、中、高劑量組、藥物對(duì)照組分別有4、4、2、1、1、2只雞死亡。15日齡（開始感染后72h）時(shí)，陽(yáng)性對(duì)照組雞部分出現(xiàn)輕微的臨床癥狀，主要表現(xiàn)在精神不振、嗜睡、食欲減退；從16日齡開始部分雞出現(xiàn)臥地，發(fā)抖；少數(shù)雞出現(xiàn)腹瀉癥狀，并相繼出現(xiàn)個(gè)別雞死亡。而那西肽低、中、高劑量組、藥物對(duì)照組到16日齡才有部分雞出現(xiàn)精神沉郁，食欲有所減退，到17日齡開始才有個(gè)別雞出現(xiàn)腹瀉癥狀，到20日齡雞的臨床癥狀全面好轉(zhuǎn)，到試驗(yàn)結(jié)束時(shí)除個(gè)別雞外，臨床癥狀基本恢復(fù)。而陽(yáng)性對(duì)照組雞到24日齡大部分還表現(xiàn)不同程度的臨床癥狀。那西肽低、中、高劑量組、藥物對(duì)照組雞的發(fā)病癥狀和發(fā)病率明顯低于陽(yáng)性對(duì)照組。

2.2 那西肽對(duì)雞生長(zhǎng)性能的影響 那西肽低、中、高劑量組和藥物對(duì)照組對(duì)雞生長(zhǎng)性能的影響結(jié)果見表1和表2。

由表1可知，試驗(yàn)初期（1日齡）各組雞體重?zé)o顯著差異（P＞0.05），飼喂12d藥物添加劑后，那西肽低、中、高劑量組和藥物對(duì)照組的增重和飼料利用率顯著或極顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.05或P＜0.01）。其中那西肽中、高劑量組增重極顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.01），那西肽高劑量組飼料利用率極顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.01）。證明那西肽有明顯的促進(jìn)生長(zhǎng)和提高飼料利用率的作用，在1.25 mg／kg體重～5mg／kg體重范圍內(nèi)且呈劑量依賴關(guān)系。

表1 那西肽低、中、高劑量組和藥物對(duì)照組對(duì)1～12日齡雞生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，12日齡人工感染產(chǎn)氣莢膜梭菌以后，各試驗(yàn)組雞生長(zhǎng)性能受到影響，那西肽低、中、高劑量組和藥物對(duì)照組增重顯著低于空白對(duì)照組（P＜0.05），但是飼料利用率無(wú)顯著差異（P＞0.05）。其中那西肽低劑量組和藥物對(duì)照組增重極顯著低于空白對(duì)照組（P＜0.01）。

表2 那西肽低、中、高劑量組和藥物對(duì)照組對(duì)12～24日齡雞生長(zhǎng)性能的影響

2.3 那西肽的預(yù)防效果 試驗(yàn)期間不同劑量的那西肽對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物的保護(hù)率見表3。

表3 不同時(shí)期試驗(yàn)組雞死亡結(jié)果

由表3可知，1～12日齡那西肽低、中、高劑量組和藥物對(duì)照組雞的死亡率低于空白對(duì)照組。在12日齡接種產(chǎn)氣莢膜梭菌以后，那西肽低、中、高劑量組和藥物對(duì)照組死亡率明顯低于陽(yáng)性對(duì)照組，表明那西肽能有效減少產(chǎn)氣莢膜梭菌病引起的死亡，且5mg／kg那西肽組有最好的預(yù)防效果。

2.4 24日齡動(dòng)物處死檢查結(jié)果 見表4。

表4 24日齡各試驗(yàn)組雞的病變記分和接種菌檢出情況

從表4中結(jié)果可以看出，那西肽低、中、高劑量組和藥物對(duì)照組的病變情況明顯好于陽(yáng)性對(duì)照組，四組中有部分雞（分別為16只、19只、21只和13只）的病變記分為0分，而陽(yáng)性對(duì)照組雞中絕大部分（43只）病變記分在2分以上；那西肽低、中、高劑量組和藥物對(duì)照組的產(chǎn)氣莢膜梭菌檢出率明顯低于陽(yáng)性對(duì)照組。表明那西肽能有效的減輕產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的腸道病變，對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌病有一定預(yù)防效果。

對(duì)12～24日齡死亡的雞進(jìn)行了剖檢，除藥物對(duì)照組有2只雞和空白對(duì)照組死亡的雞以外，其余死亡的雞均有典型的壞死性腸炎病變，主要表現(xiàn)為腸內(nèi)充氣，空腸和回腸有纖維素樣變，并有黏液和黃色或綠色假黏膜，部分有明顯出血斑和潰瘍壞死；取腸黏膜進(jìn)行產(chǎn)氣莢膜梭菌培養(yǎng)，均為陽(yáng)性結(jié)果，表明雞死亡是由人工感染產(chǎn)氣莢膜梭菌所致。

3 討論與小結(jié)

3.1 關(guān)于雞產(chǎn)氣莢膜梭菌病 產(chǎn)氣莢膜梭菌廣泛存在于自然環(huán)境中，是引起各種動(dòng)物NE、腸毒血癥，人類食物中毒和創(chuàng)傷性氣性壞疽的主要病原菌之一［7］。NE不僅使動(dòng)物生產(chǎn)性能、飼料報(bào)酬降低，雞群死亡率增高，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，還通過雞肉制品引起人的感染，對(duì)人類健康構(gòu)成重大威脅［8］。由產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的雞壞死性腸炎在世界家禽生產(chǎn)領(lǐng)域到處可見，因此，壞死性腸炎對(duì)家禽生產(chǎn)水平的影響極大。一方面，壞死性腸炎提高了家禽的病死率，本試驗(yàn)陽(yáng)性對(duì)照組雞的死亡率比空白對(duì)照組高13.16%，而實(shí)際生產(chǎn)中死亡率有時(shí)會(huì)更高，有的死亡率可達(dá)16%［9］。另一方面，壞死性腸炎極大地提高了家禽生產(chǎn)的料重比，造成家禽養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)成本的大大提高，從而極嚴(yán)重地危害了家禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。

3.2 那西肽的預(yù)防效果 那西肽可以有效阻抑腸內(nèi)有害細(xì)菌的生長(zhǎng)，使腸道管壁吸收機(jī)能正常，因而可以促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高飼料利用率。近年來(lái)，隨著那西肽在國(guó)內(nèi)進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)的實(shí)現(xiàn)，我國(guó)學(xué)者對(duì)那西肽在畜牧業(yè)中的應(yīng)用進(jìn)行了大量研究。李紅軍等［10］發(fā)現(xiàn)在肉雞日糧中添加那西肽可促進(jìn)肉仔雞增重。趙旭明等［11］發(fā)現(xiàn)，添加那西肽能顯著提高蛋雞的產(chǎn)蛋率、采食量、蛋殼厚度和質(zhì)量。朱淑斌［12］等發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加那西肽能顯著提高生長(zhǎng)肥育豬的采食量和日增重，而對(duì)豬的胴體品質(zhì)和豬肉品質(zhì)均無(wú)不良影響。那西肽除了具有促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)的作用外，還具有添加劑量小、在畜禽體內(nèi)的殘留量極低、無(wú)明顯毒副作用、不易產(chǎn)生耐藥性、使用安全等特點(diǎn)。

那西肽能有效地抑制革蘭陽(yáng)性致病菌生長(zhǎng)，常用于家禽的致病性梭菌引起的疾病的預(yù)防。飼料中添加那西肽可以減低家禽腸道梭菌的數(shù)量，減少梭菌性腸炎的發(fā)生率。同時(shí)還有利于維持動(dòng)物腸道內(nèi)環(huán)境的平衡、降低腸道內(nèi)容物黏稠度。本試驗(yàn)的結(jié)果表明，飼料中添加那西肽，不但可以提高12日齡內(nèi)雞的增重和飼料利用率，降低雞的死亡率，而且還可以有效的預(yù)防產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的雞壞死性腸炎。

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