楊晉霞，樊寧寧，龔 嬌，梁晉偉

(1.太原市小店區(qū)人民醫(yī)院，山西太原 030032;2.山西醫(yī)科大學，山西 太原 030001)

養(yǎng)肝清降丸由決明子、枸杞子、熟地黃等十六味藥材組成，具有滋養(yǎng)肝腎的功效，適用于肝腎陰虛型的視力減弱患者。決明子為其主要成分，現(xiàn)代藥理學研究表明［1～3］，決明子能清肝熱，潤腸燥，又有平肝養(yǎng)腎之功，用于目赤腫痛，大便秘結，頭痛、頭暈，青盲內障。為了建立中藥新制劑養(yǎng)肝清降丸含量測定標準，保證產品質量的穩(wěn)定可靠，進一步提高制藥水平，本研究采用高效液相色譜法(high performance liquid chromatogoraphy，HPLC)對處方中決明子的主要成分大黃酚進行定量分析，取得滿意結果，為養(yǎng)肝清降丸質量標準的制定提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀，配DAD檢測器;日本島津UV-2450型可見紫外分光光度計。

1.2 藥品及試劑

大黃酚對照品:批號111562-200605，購于中國藥品生物制品檢定所;養(yǎng)肝清降丸供試品:批號20100812，20100915，20101026，山西醫(yī)科大學藥學院制劑室提供。乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件［4～6］

2.1.1 色譜柱 采用日本資生堂Capcell PAK ODS C18(250 mm ×4.6 mm，粒徑5 μm)。

2.1.2 流動相 甲醇－0.1%磷酸溶液(79∶21)。

2.1.3 檢測波長 取大黃酚對照品溶液，在200～400 nm波長之間進行紫外掃描，以254 nm為檢測波長。見圖1。

圖1 大黃酚對照品光譜圖Fig 1 Spectrogram of Control Products of Chrysophanol

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液配制 大黃酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.5 μg的溶液，搖勻即得。

2.2.2 供試品溶液配制 取重量差異項下的本品，剪碎，取約18 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，置水浴上加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25 mL，蒸干，加10%鹽酸溶液30 mL，置水浴中加熱水解1 h，立即冷卻，用三氯甲烷振搖提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘渣用甲醇溶解，轉移至10 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液配制 取處方除決明子外的全部藥味，按成品工藝及供試品溶液的制備方法制備陰性樣品溶液。

2.3 干擾實驗

分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照液各10 μL，注入液相色譜儀，進行測定。見圖2。結果表明:陰性樣品在大黃酚保留時間處，無其他成份干擾，方法的專屬性良好。

2.4 線性范圍考察

精密稱取大黃酚對照品適量，加甲醇制成110 μg/mL的溶液，分別量取1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL至10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，分別進樣10 μL，即 進 樣 量 為 0.11 μg、0.22 μg、0.33 μg、0.44 μg、0.55 μg，測定峰面積為 181.166、699.466、1 304.219、1 902.693、2 520.488。以大黃酚進樣量(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸。見圖3。其回歸方程為Y=5 347.2X －442.95，r=0.999。結果表明，大黃酚在0.11～0.55 μg范圍內，峰面積與進樣量之間呈良好線性關系。

圖2 干擾試驗圖譜Fig 2 Atlas of Interference Experiments

圖3 線性回歸方程圖Fig 3 Equation Graph of Linear Regression

2.5 精密度實驗

精密吸取同一份供試品溶液(批號:20100812)，重復進樣 6 次，峰面積分別為2 249.840、2 259.426、2 258.516、2 263.215、2 267.744、和2 273.260，RSD為0.4%。結果表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實驗

取同一份供試品溶液(批號:20100812)，分別在制備后及2 h、4 h、8 h、12 h、24 h后依法測定大黃酚的峰面積，結果為 2 293.339、2 306.373、2 301.181、2 301.358、2 301.065和2 337.073，RSD 為 0.7%。結果表明供試品溶液在24 h內基本穩(wěn)定。

2.7 重復性實驗

取同批樣品(批號:20100812)，依法平行制備6份供試品，分別測定大黃酚的含量，結果為0.067 4 mg/g、0.067 5 mg/g、0.067 3 mg/g、0.067 3 mg/g、0.067 4 mg/g和0.068 5 mg/g，平均含量為 0.067 6 mg/g，RSD 為0.05%。結果表明該方法的重復性良好。

2.8 回收率實驗

采用加樣回收方法，取已知含量的樣品(批號:20100812，0.0676mg/g)適量，精密稱定，分別加入一定量的大黃酚對照品，按供試品溶液配制方法制備三種不同添加濃度的回收率樣品溶液，照2.1項下色譜條件測定，計算回收率，結果見表1。結果表明該方法具有良好的回收率。

表1 回收率測定結果Table 1 Determination Results of the Recovery Rate

2.9 決明子藥材的測定

精密稱取決明子藥材0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，按供試品溶液配制方法配制決明子藥材測定溶液。再按文中的供試品含量測定條件進行實驗，結果均符合藥典要求的藥材含量限度。結果見表2。

表2 藥材測定結果Table 2 Determination Results of Medicinal Materials

2.10 樣品測定

分別取3批樣品，按本文色譜條件進行含量測定，結果見表3。

表3 3批樣品測定結果Table 3 Determination Results of Three Batches of Samples

3 討論

3.1 流動相的選擇

實驗中對流動相的比例進行了調整，以甲醇－0.1%磷酸溶液(85∶15)為流動相，結果分離效果較差，分離不完全;以甲醇－0.1%磷酸溶液(82∶18)為流動相，結果供試品主峰與雜質峰分離不完全;以甲醇 －0.1%磷酸溶液(79∶21)為流動相，結果分離效果較佳，保留時間適宜，分離度大于1.5，因此選擇甲醇－0.1%磷酸溶液(79∶21)為流動相。

3.2 限度的確定

參照3批樣品的含量測定結果，求得平均含量為0.614 3 mg/丸。以平均含量的80%作為樣品含量測定的限度，暫定本品每丸中含決明子以大黃酚(C15H10O4)計，不得少于0.49 mg。由于樣品批次較少，數(shù)據(jù)代表性不夠，以后累計數(shù)據(jù)再做調整。

本法具有簡單、快速、準確、穩(wěn)定且重現(xiàn)性好的特點，可以作為該制劑的質量控制手段之一。

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