佟 昕 佟 力

(1秦皇島市海港區(qū)計(jì)劃生育服務(wù)站，河北秦皇島，066000;2秦皇島市青龍滿族自治縣人民醫(yī)院)

加味佛手散(MFSS)為本課題組應(yīng)用的自擬方，以佛手散為基礎(chǔ)的組方，由當(dāng)歸、川芎、血見(jiàn)愁、赤芍、黃芪等組成，具有益氣活血、行氣活血、通經(jīng)散寒、止痛之功效，臨床用于治療原發(fā)性痛經(jīng)療效可靠［1］，前期實(shí)驗(yàn)研究證明本方對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)模型動(dòng)物的痛反應(yīng)及對(duì)縮宮素誘發(fā)的正常小鼠離體子宮過(guò)度收縮有明顯的抑制作用［2］。本研究旨在通過(guò)觀察MFSS對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)模型動(dòng)物子宮平滑肌興奮性的影響及血清中PGF2α水平，探討MFSS治療原發(fā)性痛經(jīng)的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 加味佛手散水提取物的制備:當(dāng)歸、川芎、血見(jiàn)愁、赤芍、黃芪按 6∶3∶1∶1∶5 配伍，加 8 倍量水，浸泡4h，煎煮2次，每次煎煮20min，合并煎煮液，過(guò)濾，減壓濃縮至1g/mL;元胡止痛片(YHZTP)，承德天源藥業(yè)有限公司，批號(hào):20090312;己烯雌酚片，石家莊市華龍藥業(yè)股份有限公司，批號(hào):20090408;縮宮素注射液，上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)090206。

1.1.2 試劑盒 大鼠前列腺素F2α(PGF2α)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，批號(hào)090621，上海西唐生物科技有限公司生產(chǎn)。谷胱甘肽過(guò)氧化物酶試劑盒，批號(hào):20090716;SOD試劑盒，批號(hào):20090321;MDA試劑盒，批號(hào):20090711，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所第一分所。

1.1.3 洛氏液(Locke’s solution)［3］NaCl 9.0g/L，KCl 0.42g/L，CaCl20.24g/L，NaHCO30.2g/L，Glucose 1.0g/L，臨用時(shí)重蒸水新鮮配制。

1.1.4 儀器 MacLab/4e四道生理記錄儀(澳大利亞生產(chǎn))。

1.1.5 動(dòng)物 wistar大鼠，清潔級(jí)，雌性，未孕，體質(zhì)量200～220g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào):SCXK(冀)－1－003，實(shí)驗(yàn)前在本實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)3天，實(shí)驗(yàn)室溫度22～24℃，相對(duì)濕度60%，光照時(shí)間12h(7:00－19:00)。

1.2 方法

1.2.1 分組及原發(fā)性痛經(jīng)模型的制備［4］雌性wistar大鼠60只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC)、MFSS(按生藥計(jì)算)1.0、2.0和4.0g/kg組，YHZT 1.0g/kg陽(yáng)性對(duì)照組及模型組(MC)。除正常對(duì)照組外，其他組大鼠均每天腹腔注射(ip)己烯雌酚2mg/kg，連續(xù)10d。ip己烯雌酚第6日開(kāi)始，各組灌胃給予相應(yīng)的藥物，給藥容積為5mL/kg，模型組灌胃等體積蒸餾水，連續(xù)5d。末次給藥后1h肌肉注射縮宮素20u/kg。

1.2.2 檢測(cè)標(biāo)本的制備 上述模型動(dòng)物在注射縮宮素40min后，乙醚輕度麻醉，腹腔靜脈取血，3000 r/min，4℃離心15min，分離血清，置于－20℃保存。取血后，迅速取出子宮，置于冷洛氏液中輕輕沖洗，供下列實(shí)驗(yàn)用。

1.2.3 大鼠離體子宮平滑肌活動(dòng)力的測(cè)定 將上述離體子宮固定于盛有15mL洛氏液的恒溫浴槽中，與MecLab/4e相連的張力換能器上。浴槽內(nèi)溫度為37.5～38℃，恒量通入95%O2+5%CO2混合氣體。調(diào)節(jié)微調(diào)器加前負(fù)荷1g，平衡40min，待子宮恢復(fù)自發(fā)節(jié)律，收縮頻率和幅度穩(wěn)定后，記錄各組動(dòng)物子宮的收縮頻率和幅度，并計(jì)算其活動(dòng)力(頻率×幅度)。

1.2.4 大鼠血清中PGF2α、MDA含量及SOD和GSH－PX的活性測(cè)定 取1.2.2制備的血清，按試劑盒方法測(cè)定各組大鼠血清中PGF2α、MDA含量及SOD和GSH－PX的活性。

表1 MFP對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠離體子宮收縮力的影響(n=10，±s)

表1 MFP對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠離體子宮收縮力的影響(n=10，±s)

注:與 MC 組比較，*P ＜0.05，＊＊P＜0.01。

組別 劑量(g/mL)頻率(次/10min)收縮幅度(mm)活動(dòng)力(頻率×幅度)NC － 6.21±2.53＊＊ 6.45±2.11＊＊ 39.85±7.54＊＊MC － 12.2±2.87 4.28±2.05 51.72±6.75 MFP 1.0 9.42±1.94 5.22±2.13* 49.17±8.86 MFP 2.0 7.93±2.01＊＊ 5.37±2.41* 42.31±6.21＊＊MFP 4.0 8.37±2.41＊＊ 5.58±2.34* 46.70±9.64*YHZT 1.0 8.37±3.34* 5.42±2.11* 45.96±5.91*

2 結(jié)果

2.1 對(duì)痛經(jīng)模型大鼠離體子宮平滑肌活動(dòng)力的影響模型組大鼠離體子宮平滑肌的收縮頻率顯著高于正常對(duì)照組、收縮幅度低于正常對(duì)照組(P＜0.05)、活動(dòng)力高于正常對(duì)照組(P＜0.01)。MFSS 2.0、4.0g/kg劑量組離體子宮收縮頻率明顯低于模型組(P＜0.05)，收縮幅度高于模型組(P＜0.05)，活動(dòng)力低于模型組(P＜0.05)。1.0g/kg劑量組收縮幅度高于模型組(P＜0.05)，收縮頻率與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。2.0g/kg劑量組的活動(dòng)力低于其他劑量組，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 對(duì)大鼠血清中PGF2α、MDA、SOD和 GSH－PX水平的影響 MC組大鼠血清中PGF2α的含量顯著高于NC組(P＜0.01)，MFSS各劑量組及YHZT組動(dòng)物血清中PGF2α的含量顯著低于MC組(P＜0.05)。MC組MDA含量高于NC組(P＜0.05)，SOD、GSHPX活性低于NC組(P＜0.05)。MFP各劑量組MDA的含量低于MC組(P＜0.05);GSH－PX及SOD的活性高于MC組，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 MFP對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠血清中PGF2α、MDA、SOD和GSH－PX水平的影響(n=10，±s)

表2 MFP對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠血清中PGF2α、MDA、SOD和GSH－PX水平的影響(n=10，±s)

注:與MC組比較，*P＜0.05，＊＊P ＜0.01。

組別 劑量(g/kg) PGF2α(μg/mL) MDA(nmol/mL) SOD(u/mL) GSH －PX(U)1.12±0.35 102.39±38.56 812.62±154.29 MC － 8.71±2.87 1.78±0.41 159.46±55.37 537.91±119.60 MFP 1.0 5.71±2.42* 1.46±0.26* 137.64±54.56* 597.12±203.12*MFP 2.0 5.34±0.75＊＊ 1.37±0.43＊＊ 122.75±49.52* 723.52±272.26＊＊MFP 4.0 4.79±0.87＊＊ 1.45±0.35* 128.12±42.51* 682.57±113.24*YHZT 0.1 4.78±1.38＊＊ 1.41±0.38＊＊ 134.78±51.25* 616.69±123.46 NC － 3.01±0.45＊＊*

3 討論

原發(fā)性痛經(jīng)的病因、病機(jī)復(fù)雜。Creat sas G等研究證明原發(fā)性痛經(jīng)的發(fā)生與前列腺素(PGs)密切相關(guān)［5］，前列腺素能促進(jìn)子宮內(nèi)膜螺旋小動(dòng)脈收縮，加速內(nèi)膜缺血、壞死及血管的斷裂導(dǎo)致月經(jīng)來(lái)潮。痛經(jīng)患者血中PGF2α水平與痛經(jīng)的癥狀呈正相關(guān)。高濃度的PGF2α作用于螺旋小動(dòng)脈上的PGF2α受體，引起子宮平滑肌痙攣性收縮，表現(xiàn)為能宮肌張力增高、收縮幅度增加，導(dǎo)致子宮組織血流減少，缺血、缺氧，酸性代謝產(chǎn)物堆積于肌層，刺激子宮自主神經(jīng)疼痛纖維而致痛經(jīng)［6－8］。子宮平滑肌痙攣性收縮致肌間血管受壓而出現(xiàn)子宮肌層及內(nèi)膜的暫時(shí)缺血，產(chǎn)生更多的超氧自由基，而抗氧化酶活性相應(yīng)降低，引起自由基的連鎖反應(yīng)，形成一系列的脂質(zhì)自由基及其降解產(chǎn)物，進(jìn)一步引起細(xì)胞膜的流動(dòng)性降低，通透性增高，線粒體腫脹，溶酶體破壞及溶酶體酶的釋放，更進(jìn)一步加重了子宮內(nèi)膜的損傷，使痛經(jīng)發(fā)生并加?。?］。

本方臨床用于治療血瘀兼氣虛型原發(fā)性痛經(jīng)，療效可靠［1］。前期實(shí)驗(yàn)研究證明本方可明顯減少原發(fā)性痛經(jīng)模型小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)，延長(zhǎng)扭體反應(yīng)的潛伏期［2］。本研究結(jié)果證明，MFS 2.0、4.0g/kg 明顯降低原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠離體子宮收縮頻率(P＜0.05)，而收縮幅度高于模型組(P＜0.05)，活動(dòng)力低于模型組(P＜0.05)，說(shuō)明MFS可明顯抑制原發(fā)性痛經(jīng)大鼠子宮的過(guò)度收縮，使其舒張完全，改善子宮平滑肌的血液供應(yīng)，進(jìn)而減輕痛反應(yīng)。MFS明顯降低原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠血清中PGF2α水平，提示其緩解原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠子宮痙攣性收縮與抑制PGF2α的合成或釋放有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，本方可以明顯提高血清中SOD和GSH－PX的活性，降低MDA的含量，提示其可通過(guò)提高SOD及GSH－PX酶的活性，加速超氧自由基的消除，減輕超氧自由基對(duì)子宮平滑肌的進(jìn)一步損傷，是其治療原發(fā)性痛經(jīng)作用機(jī)制之一。

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