邵燕虹

喉痛片收載于中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》第14冊(cè)175頁(yè)，由山豆根、烏梅、鵝不食草、甘草、兒茶、玄參、薄荷腦等組成的中藥復(fù)方制劑，具有解毒消炎，涼喉生津之功效。用于咽喉、口、鼻腔紅痛的治療［1］。原標(biāo)準(zhǔn)只有簡(jiǎn)單的性狀及片劑常規(guī)檢查。本文采用薄層色譜法和高效液相法對(duì)喉痛片進(jìn)行更好的質(zhì)量監(jiān)控。

1 儀器、試藥與藥品

島津-20A高效液相色譜儀;SPD-M20A檢測(cè)器;Diamonsil(鉆石)C18(250 mm×4.6 mm×5 m)色譜柱;Sartorius-CPA225D，十萬(wàn)分之一電子天平;KQ-500DE型超聲波清洗器;CMAG REPROSTARⅡ型號(hào)成像系統(tǒng);硅膠G板(青島海洋化工研究所);乙腈:色譜純，Merck KGaA;水為超純水;其余試劑均為分析純;烏梅對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):121208-200903)、苦參堿對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110805-200306)。喉痛片及陰性對(duì)照(廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司提供)。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 烏梅的薄層色譜鑒別 取本品粉末1.0 g，加甲醇20 ml，超聲處理30 min，濾過(guò)，蒸干，殘?jiān)铀?0 ml使溶解，加乙醚提取2次，20 ml/次，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)檬兔?30～60℃)浸泡2次，15 ml/次(浸泡約2 min)傾去石油醚，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。取烏梅對(duì)照藥材2.0 g，加甲醇20 ml，同法制成對(duì)照品藥材溶液［2］。另按處方工藝制備缺烏梅的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(2010年版《中國(guó)藥典》第一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述溶液各6 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷-二氯甲烷－乙酸乙酯－甲酸(20∶5∶8∶0.1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。日光下檢視，供試品色譜中，在與烏梅對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照液在相應(yīng)位置上無(wú)斑點(diǎn)。置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與烏梅對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照液在相應(yīng)位置上無(wú)熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)附圖1～2。

圖1 烏梅薄層色譜圖(日光下)

圖2 烏梅薄層色譜圖(紫外光燈下)

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇 島津-20A高效液相色譜儀;SPDM20A檢測(cè)器;，對(duì)苦參堿對(duì)照品溶液在190～800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，在205 nm處有吸收波長(zhǎng)，結(jié)合《中國(guó)藥典》(2010年版一部)“苦參”藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，選定205 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果見(jiàn)附圖3～4。

圖3 苦參堿光譜圖

圖4 喉痛片(缺山豆根)陰性光譜圖

2.2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑;流動(dòng)相:乙腈－0.02 mol/L磷酸二氫銨溶液(每1000 ml中加入十二烷基硫酸鈉2 g，磷酸1 ml)(33∶67);檢測(cè)波長(zhǎng);205 nm;進(jìn)樣量:10 μl;柱溫:35℃。理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000［3］。

2.2.3 溶液制備

2.2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 取苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含50 μg的溶液，即得。

2.2.3.2 供試品溶液的制備 取喉痛片粉末1.0 g，精密量定，置50 ml量瓶中，加氨水2 ml，再加二氯甲烷－甲醇(40∶10)混合溶液40 ml，超聲處理30 min，取出，放冷，用二氯甲烷－甲醇(40∶10)混合溶液定容至刻度。搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10 ml，蒸干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相溶解并定容至5 ml，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，即得。

2.2.3.3 陰性對(duì)照品溶液的制備 另按處方工藝制備缺山豆根的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.2.4 專屬性考察 按制定的色譜條件，將苦參堿對(duì)照品溶液、供試品溶液、缺山豆根的陰性對(duì)照溶液，進(jìn)行液相色譜分析，結(jié)果陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖5～7。

圖5 山豆根對(duì)照品

圖6 供試品溶液

圖7 山豆根陰性對(duì)照溶液

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取苦參堿對(duì)照品適量，加甲醇配制成每 1 ml含苦參堿 6.2984、12.5968、25.1938、50.3875、100.7750、201.5500、403.1000 g 的溶液。分別吸取10 μl，進(jìn)行液相色譜分析，計(jì)算回歸方程為:Y=17299X+61133，R=0.9995.說(shuō)明丹皮酚在6.2984～403.1000 g之間呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，進(jìn)行色譜分析，測(cè)定苦參堿峰面積，并計(jì)算峰面積的RSD=1.05%。說(shuō)明所建立方法的精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，精密吸取10 μl，進(jìn)行色譜分析，分別在 0、2、4、8、12、24 h 測(cè)定，并計(jì)算含量，得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD=1.98%。說(shuō)明制備的供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品6份，按供試品制備方法制備供試品溶液，按制定色譜條件依法測(cè)定，并計(jì)算含量。RSD=1.88%，說(shuō)明該方法重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的喉痛片6份，精密加入一定量的苦參堿對(duì)照品溶液，按制定的方法進(jìn)行操作與分析，測(cè)定苦參堿的含量，計(jì)算加樣回收率，回收率為99.63%，RSD=1.06%，該方法準(zhǔn)確度較高，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 喉痛片加樣回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

2.2.10 樣品測(cè)定 根據(jù)所制定的供試品提取方法及色譜條件對(duì)喉痛片三批進(jìn)行分析與計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 苦參堿是該制劑中藥材山豆根主要成分之一。曾采用薄層掃描法與高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定，通過(guò)對(duì)不同批次的喉痛片樣品的考察，結(jié)果高效液相色譜法對(duì)山豆根的含量，較薄層掃描法，操作簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，故高效液相色譜法應(yīng)是中藥材及其制劑中苦參堿首選的分離分析方法。

3.2 增加烏梅的薄層色譜的定型鑒別，山豆根的高效液相定量含量測(cè)定，更好更全面的控制喉痛片的質(zhì)量。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)－中藥成方制劑(第14冊(cè))，1997:175.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(2010年版).一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010，73，附錄Ⅵ B，Ⅵ D.

［3］李樹(shù)龍.TLC，HPLC法測(cè)定山豆根含量及研究，黑龍江醫(yī)藥，2009，22(4):446-447.