劉穎姝，劉芳萍，李昌文，周 瓊，李 睿，張秀英，趙玉林

(1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030;2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，哈爾濱 150001)

龍葵為茄科植物龍葵(Solanum nigrum)或少花龍葵(S.photeinocarpum Nakamura et Odashima)的干燥全草，分布于我國南北各省區(qū)，廣東省各地均有出產(chǎn)，民間應(yīng)用廣泛［1］。作為傳統(tǒng)中藥的龍葵其藥理作用主要有以下幾個(gè)方面:抗腫瘤作用、抑菌和抗病毒作用、抗炎與抗休克作用、神經(jīng)藥理作用以及泌尿系統(tǒng)的藥理作用［2］。而龍葵在治療肝損傷方面卻未見報(bào)道。最近一些研究證明，龍葵的提取物中包含有幾種抗氧化劑:五倍子酸、原兒茶酸、兒茶酸、蘆丁等。體外試驗(yàn)中已經(jīng)證實(shí)這些成分都有較強(qiáng)的抗氧化活性［3］。這些抗氧化的成分可以使龍葵作為一種抗氧化的藥物在氧化損傷引起的疾病中起到積極的作用。本試驗(yàn)研究了龍葵對CCl4所致急性肝損傷的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 分析純CCl4。市售精制花生油。龍葵全草，購自哈爾濱市三棵樹中藥材批發(fā)市場。水飛薊素，德國馬博士大藥廠。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)試劑盒、草氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，型號:R205，上海申勝生物技術(shù)有限公司。真空干燥箱，型號:DZF—6050，上海一恒科學(xué)儀器有限公司。紫外分光光度計(jì)，型號:756p，上海光譜儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 昆明系小鼠，體重(20±2 g)，雄性，清潔級，購自哈藥集團(tuán)制藥總廠試驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號:SCXK(黑)2006-007。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)5～7 d，自由攝食和飲水，溫度保持18～20℃，自由光照，相對濕度40% ～60%，定時(shí)通風(fēng)換氣。

1.3 龍葵提取物的準(zhǔn)備 干龍葵800 g放在5000 mL水中浸泡30 min，然后100℃連續(xù)熱提取40 min。濾過水提物后經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀90℃水域濃縮直至成為乳狀，隨后放入真空干燥箱中烘干(溫度為70℃)。最終獲得185 g粉末(為初始重量的23.125%)。試驗(yàn)中的濃度都是基于干重的提取物。

1.4 動(dòng)物分組 將60只小鼠隨機(jī)分成六組，分別為:正常對照組、模型組、藥物組(龍葵高、中、低)、陽性對照組(水飛薊素)。水飛薊素組給藥濃度為0.2 g/kg［4］，龍葵高、中、低劑量組給藥濃度分別為1.5、1.0、0.5 g/kg。試驗(yàn)過程中正常組和模型組給予生理鹽水。灌胃劑量均為10 mL/kg［5］。試驗(yàn)期間所有小鼠標(biāo)準(zhǔn)飲食，自由飲水。第7 d給藥后，禁食16 h后染毒。藥物組和模型組用0.35%的CCl4油溶液，正常組用生理鹽水，灌胃劑量均為10 mL/kg［5］。

1.5 檢測指標(biāo) 染毒24 h后眼球采血，血液3000 r/min，離心10 min，分離血清;剖檢取肝臟，肉眼觀察其病變后，手動(dòng)做成勻漿。組織勻漿后用3000 r/min，離心15 min，取上清液。參照各個(gè)試劑盒的說明書，檢測血清中的ALT、AST和組織中的MDA、SOD和 GSH-Px。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行生物學(xué)分析，結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析，P＜0.05表示差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;P＜0.01表示差異極顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠肝重和肝體比的變化 各組小鼠肝重和肝體比的變化見表1。與正常對照組比較，模型組、龍葵各劑量組、陽性藥物組小鼠肝重和肝體比無顯著性差異(P＞0.05)。由此可見，藥物和毒物的刺激不能引起小鼠臟器的嚴(yán)重?fù)p傷。

表1 小鼠肝重、肝體比的影響±s，n=10)

表1 小鼠肝重、肝體比的影響±s，n=10)

1.090 ±0.14 4.823 ±0.69模型組 0.992 ±0.34 4.571 ±0.34陽性對照組 1.075 ±0.07 4.886 ±0.28龍葵高劑量組 0.980 ±0.10 4.622 ±0.18龍葵中劑量組 1.097 ±0.08 4.728 ±0.27龍葵低劑量組/%正常組組別 肝重/g 肝體比1.067 ±0.13 4.659 ±0.30

2.2 病理剖檢變化 大體觀察發(fā)現(xiàn)，陽性藥物組與正常對照組小鼠肝臟表面光滑、有彈性、色澤紅潤。模型組肝臟顏色略黃無光澤，質(zhì)地較脆且表面有彌漫粟粒狀小點(diǎn)。龍葵組隨著給劑量的增大病變逐漸減輕，且最大劑量時(shí)接近正常水平。

2.3 龍葵對小鼠生化指標(biāo)的影響 各組小鼠血清中ALT、AST及肝組織中SOD、MDA、GSH-Px變化見表2。通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析可以看出，與模型組相比較，正常組、陽性對照組、龍葵高劑量組都顯示差異極顯著(P＜0.01);與正常組相比，龍葵高劑量組、陽性藥物組均無顯著性差異(P＞0.05);龍葵高劑 量組與陽性藥物組之間也無顯著性差異(P＞0.05)。

表2 各組小鼠血清ALT、AST及肝組織SOD、MDA、GSH-Px變化 (

3 討論

本試驗(yàn)選用的龍葵全草為用途廣泛的藥用植物，來源容易，并且與陽性藥物水飛薊素(文獻(xiàn)報(bào)道水飛薊素對各種肝臟疾病都有很好的療效［6-7］)相比較療效相當(dāng)。試驗(yàn)結(jié)果說明了龍葵除了前人總結(jié)的常用的藥理作用以外，在抗氧化損傷方面也同樣具有很好的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)了龍葵新的藥用價(jià)值。

本試驗(yàn)用0.35%的CCl4按10 mL/kg的劑量給小鼠灌胃，成功復(fù)制了周瓊建立的急性肝損傷模型［5］。CCl4是一種強(qiáng)烈的能夠引起肝細(xì)胞壞死的化合物，一直被研究者用來誘發(fā)各種肝損傷模型以闡明化合物肝毒性機(jī)制或肝損傷保護(hù)機(jī)制［8］。CCl4所致的肝損傷促進(jìn)了氧自由基的產(chǎn)生，導(dǎo)致線粒體及肝細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化損傷。這種損傷破壞了細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，使肝細(xì)胞變性壞死，細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶、自由基滲入血液而活性升高，故血清中ALT、AST仍被認(rèn)為是肝損傷的敏感指標(biāo)，其升高在一定程度上說明了肝臟受損的程度［9］。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，CCl4模型組小鼠肝臟呈現(xiàn)明顯病變，血清ALT、AST均顯著升高，表明肝細(xì)胞已嚴(yán)重?fù)p傷，模型復(fù)制成功，此結(jié)果與童其［9］報(bào)道的一致。同時(shí)肝功能氧化指標(biāo)的變化也顯示出肝細(xì)胞嚴(yán)重受損的趨勢。藥物治療高劑量組小鼠肝臟眼觀與正常組無明顯差異，血清ALT、AST明顯降低，肝功能氧化指標(biāo)也接近正常水平。此結(jié)果與詹可順等［10］研究的白芍總苷對小鼠化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制結(jié)果一致?！纒，n=10)

綜上所述，本試驗(yàn)所選用的龍葵提取物對試驗(yàn)性CCl4所致小鼠急性肝損傷有很好的保護(hù)作用，且最佳藥物濃度為150 mg/kg。其保護(hù)機(jī)制可能與清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化，有效地保護(hù)細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)和減少細(xì)胞凋亡有關(guān)。

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