海飛，崔小偉

（1.河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，鄭州，451450；2.河南省農(nóng)科院植保所）

植物寄生線蟲（Phytoparasitic nematode）中以根結(jié)線蟲為害最為嚴(yán)重，廣泛分布于世界各地。我國熱帶、亞熱帶及寒帶地區(qū)溫室蔬菜都有根結(jié)線蟲病發(fā)生，尤其是在一些南方省份，根結(jié)線蟲病已成為經(jīng)濟作物生產(chǎn)的嚴(yán)重障礙，特別是長期連作的田塊。目前，植物根結(jié)線蟲主要采用化學(xué)防治方法，但是廣泛、大量和長期地使用化學(xué)農(nóng)藥易造成農(nóng)藥殘留、蟲害的抗藥性增強等問題。因此，從植物材料中開發(fā)符合環(huán)保、健康和持續(xù)發(fā)展理念的高效、低毒和低殘留的植物源殺線劑已成為當(dāng)今農(nóng)藥研究的熱點之一。

本研究通過室內(nèi)盆栽試驗、田間小區(qū)試驗和田間示范應(yīng)用，系統(tǒng)考察了一種由多種中草藥材料混合而成的新型植物源線蟲速殺劑對番茄根結(jié)線蟲病的防治效果，為替代或減少高毒性、高殘留殺線劑，提高農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

①供試植物 在調(diào)查和鑒定根結(jié)線蟲病時，主要根據(jù)河南重要經(jīng)濟作物的種植分布以及各地的生態(tài)條件，選擇沿黃地區(qū)自東向西的開封、中牟、鄭州、許昌、洛陽、三門峽等地進(jìn)行病樣采集。主要采集茄科中的煙草、番茄、茄子根結(jié)線蟲進(jìn)行調(diào)查。

番茄種子由河南省農(nóng)科院植保所提供。將準(zhǔn)備好的番茄種子用55℃溫水浸種25 min或用高錳酸鉀1 000倍液浸種20 min后，再用清水淘洗2遍，濾去多余的水分；將吸足水分的種子盛于培養(yǎng)皿中，用濕紗布蓋好，置于25～30℃的培養(yǎng)箱中催芽，每天用溫水淘洗種子1～2次；經(jīng)2～3 d，當(dāng)多數(shù)種子露白時播于育苗盤中，待長到5～6片真葉時，挑選長勢一致的植株用于試驗。

用于田間小區(qū)試驗和田間示范試驗的番茄分別種植于河南農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院科教園區(qū)自然發(fā)病田和洛陽農(nóng)科院的根結(jié)線蟲病病圃內(nèi)。生產(chǎn)管理同當(dāng)?shù)卣Ｉa(chǎn)。

②供試試劑、儀器及藥劑 試驗所用試劑均為進(jìn)口或國產(chǎn)分析純，所用儀器均為實驗室常用試驗儀器設(shè)備。供試藥劑為15%植物源線蟲速殺劑可濕性粉劑（河南農(nóng)業(yè)大學(xué)提供），5%線敵顆粒劑（壽光雙星農(nóng)藥廠生產(chǎn)），無線美（英國OMEX農(nóng)用流體公司生產(chǎn)并提供，純天然物質(zhì)提?。?，肯邦線尊（泰山現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技有限公司生產(chǎn)，5%阿維菌素顆粒劑），治線寶（山東壽光宜東肥料廠生產(chǎn)并提供，生物菌），15%鐵滅克（涕滅威）顆粒劑（市售）。施藥方法均為移栽時一次性穴施，施藥量為推薦劑量。

③供試線蟲 盆栽試驗接種用的供試線蟲由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院植物病理研究室采自田間番茄根結(jié)線蟲發(fā)病植株。接種于感病的番茄植株，采用活體繁殖方法擴繁。將采自田間的病株病根切碎和病土按1∶3的體積比與無病土混勻待用。

1.2 試驗方法

①番茄根結(jié)線蟲病的發(fā)生程度調(diào)查方法 在番茄移栽后90 d左右采取5點取樣法進(jìn)行調(diào)查。

田間生長期番茄根結(jié)線蟲病嚴(yán)重度分級標(biāo)準(zhǔn)、病株率、根結(jié)指數(shù)的計算參照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（YC/T 39-1996）進(jìn)行。收獲期根結(jié)嚴(yán)重度的分級標(biāo)準(zhǔn)如下，0級∶根部正常，無可見根結(jié)；1級∶1/3以下根上有少量根結(jié)；2 級∶1/3～1/2 根上有根結(jié)；3 級∶1/2 以上根上有根結(jié)，少量根結(jié)上再次產(chǎn)生根結(jié)；4級∶幾乎所有根上長滿根結(jié)，甚至根結(jié)連接成團(tuán)塊狀。

根結(jié)指數(shù)=[∑（各級植株數(shù)×相應(yīng)級值）/（調(diào)查總株數(shù)×4）]×100。

②根結(jié)線蟲病病原種類鑒定方法 a.根系組織內(nèi)根結(jié)線蟲的檢查。采用酸性品紅染色法，檢查病株根系內(nèi)線蟲的存在，結(jié)果在所有發(fā)病根系中均發(fā)現(xiàn)了大量根結(jié)線蟲的雌蟲及卵塊，以及少量的雄蟲。雌蟲為囊狀、洋梨形或檸檬形；雄蟲均為線形。

b.根結(jié)線蟲雌成蟲會陰花紋特征的種類鑒定。標(biāo)本的采集與保存∶采用5點取樣法，將根系連同一定的根際土壤裝入自封袋中，貼上標(biāo)簽，帶回實驗室后直接分離和挑取線蟲，或接種在消毒土種植的番茄苗上待用。

會陰花紋玻片的制作∶將帶根結(jié)線蟲的根用自來水洗凈，置培養(yǎng)皿中加水挑取雌成蟲。然后移置45%的乳酸中切成方形的會陰花紋，每載玻片上放置5個，調(diào)整在一條線上，用甘油作浮載劑，蓋上蓋玻片后用Znt膠封固，制成永久玻片，顯微鏡下觀察和照相。

根據(jù)資料報道，常見4個種的會陰花紋特征簡述如下。M.incognita（南方根結(jié)線蟲）∶有明顯高的背弓，無明顯的側(cè)線，一些線紋在側(cè)面分叉。M.exigua（M.incognita acrita）（南方根結(jié)線蟲 1號小種，曾用名為高弓根結(jié)線蟲）∶會陰花紋平滑至波浪形，弓形完好。M.arenaria（花生根結(jié)線蟲）∶背弓扁平至圓形，背弓線紋平滑至波浪狀，線紋在側(cè)線處稍有分叉，弓上線紋呈肩狀凸起，背部線紋與腹部線紋在側(cè)線處相交成角度。M.javanica（爪哇根結(jié)線蟲）∶背弓圓，有明顯的雙側(cè)線。M.hapla（北方根結(jié)線蟲）∶會陰花紋呈近圓形的六邊形至扁平的卵圓形，尾端區(qū)有刻點。

雄蟲∶從根中分離出雄蟲后用熱TAF液殺死，然后用TAF液作浮載劑，Znt膠封固制成半永久玻片，以備觀察和照相。

二齡幼蟲∶將卵塊放在裝有清水的培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中（25～28℃）孵化，將幼蟲用熱TAF液殺死后，用TAF液作浮載劑，Znt膠封固制成半永久性玻片，以供觀察。

③盆栽試驗 a.供試植物材料的準(zhǔn)備。將采自田間的病株病根切碎連同病土按V/V=1/3的比例與無病土混合均勻，裝入營養(yǎng)缽中，將長至5～6片真葉的番茄苗移栽至營養(yǎng)缽中，每缽1株，同時進(jìn)行藥劑處理。

b.藥劑處理與試驗設(shè)計。試驗共設(shè)置6個藥劑處理，667 m2使用劑量分別為植物源線蟲速殺劑2 kg，線敵 1.8 kg、無線美 100 mL、肯邦線尊 3 kg、治線寶20 kg、鐵滅克 0.9 kg，另設(shè)不施藥處理作對照（CK），每個重復(fù)4株，每個處理4次重復(fù)。分別稱取試驗所需藥量與細(xì)土充分拌勻，穴施于接種根結(jié)線蟲的營養(yǎng)缽中，其中無線美用清水稀釋后，澆灌于營養(yǎng)缽中，植株定植后，覆土澆透水。

c.調(diào)查內(nèi)容與方法。分別于番茄移栽后30 d左右（發(fā)病初期）、90 d（線蟲病高峰期間）調(diào)查番茄植株根結(jié)線蟲病的病株率和病情指數(shù)。根據(jù)病株率、病情指數(shù)或根結(jié)指數(shù)分別計算相對防效，并利用SPSS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行Duncan氏檢驗。

④小區(qū)試驗 a.藥劑處理與施藥方法。試驗在中牟溫室大棚中進(jìn)行。小區(qū)試驗藥劑處理同盆栽試驗，采用隨機區(qū)組設(shè)計，每個處理4次重復(fù)，每個重復(fù)不少于200株。

施藥時分別稱取試驗所需藥量與細(xì)土充分拌勻，在番茄移栽時穴施，其中無線美用清水稀釋后，澆灌于定植穴中。

試驗地番茄的栽培管理按照常規(guī)進(jìn)行，但不施用供試藥物之外的任何殺蟲劑或殺線劑。

b.調(diào)查內(nèi)容與方法同盆栽試驗。

⑤示范應(yīng)用 a.藥劑處理與試驗設(shè)計。示范地點設(shè)在河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院科技園番茄田中，具有根結(jié)線蟲病嚴(yán)重發(fā)病史。示范藥劑667 m2的使用劑量分別為植物源線蟲速殺劑2 kg、肯邦線尊3 kg、鐵滅克4 kg，另設(shè)空白對照（CK）。每個處理面積不少于 1 333.3 m2，空白對照面積不少于 667 m2，隨機排列，但不設(shè)重復(fù)。

試驗地番茄的栽培管理按照常規(guī)進(jìn)行，但不施用供試藥物之外的任何殺蟲劑或殺線劑。

b.調(diào)查內(nèi)容與方法。于番茄移栽（藥劑處理）后90 d（發(fā)病高峰期）調(diào)查根結(jié)線蟲病的病株率和病情指數(shù)。采收結(jié)束后拔根調(diào)查根結(jié)指數(shù)，調(diào)查方法同盆栽試驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 盆栽試驗

由表1可知，植物源線蟲速殺劑對番茄根結(jié)線蟲具有十分顯著的防治效果，平均防效最高可達(dá)到75.33%，和其他藥劑防效存在極顯著差異，在降低番茄發(fā)病高峰期（移栽后90 d）根結(jié)指數(shù)方面效果最為顯著，對發(fā)病初期（移栽后30 d）的病株率也有一定的降低作用。在供試的6種藥物中，以植物源線蟲速殺劑防效最為突出，鐵滅克效果次之，線敵、無線美和治線寶效果中等，而以阿維菌素（肯幫線尊）效果最差。

表1 不同藥劑處理對盆栽番茄根結(jié)線蟲防治效果

2.2 小區(qū)試驗

由表2可知，在所有供試藥劑中以植物源線蟲速殺劑防治番茄根結(jié)線蟲病效果最為顯著，在移栽后 30 d，防效達(dá)到 69.54%，和其他藥劑之間存在極顯著差異；在移栽后90 d，防效仍可達(dá)到68.87%。由此可見，植物源線蟲速殺劑在控制番茄根結(jié)線蟲病發(fā)病高峰期的病情指數(shù)方面效果較為突出，可有效降低番茄根結(jié)線蟲病發(fā)病初期的發(fā)病率和發(fā)病高峰期的根結(jié)指數(shù)。在供試的其他幾種藥劑中，鐵滅克防效略低于植物源線蟲速殺劑，線敵、治線寶和無線美防效中等，而以阿維菌素（肯邦線尊）效果最差，防效最高僅為24.92%。

表2 不同藥劑處理對小區(qū)番茄根結(jié)線蟲的防治效果

2.3 示范應(yīng)用

由表3可知，2009-2010年連續(xù)2 a的田間示范試驗結(jié)果與小區(qū)試驗結(jié)果相似，無論在番茄正常生長期還是根結(jié)線蟲病發(fā)病高峰期，植物源線蟲速殺劑均表現(xiàn)出十分顯著的防病效果，移栽后90 d和采烤末期的平均相對防效分別為79.54%和73.46%，防效極顯著優(yōu)于化學(xué)殺線劑鐵滅克以及生物殺線劑肯幫線尊（阿維菌素），值得在生產(chǎn)上進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

表3 植物性添加物防治番茄根結(jié)線蟲病示范應(yīng)用效果

3 結(jié)論

植物源線蟲速殺劑能有效防治番茄根結(jié)線蟲病。室內(nèi)盆栽試驗和田間小區(qū)試驗均表明，植物源線蟲速殺劑對番茄根結(jié)線蟲具有十分顯著的防效，最高平均防效可達(dá)到75.33%，和其他藥劑之間存在極顯著差異，在降低番茄發(fā)病高峰期根結(jié)指數(shù)方面效果最為顯著，對降低發(fā)病初期的病株率也有一定的作用，且極顯著優(yōu)于其他幾種供試藥劑；田間示范應(yīng)用試驗結(jié)果表明，在移栽后90 d和采烤末期，植物源線蟲速殺劑平均相對防效分別為79.54%和 73.46%，極顯著優(yōu)于其他藥劑，值得在生產(chǎn)上進(jìn)一步推廣應(yīng)用。