張慧蘋，姜琳琳

（濟(jì)寧學(xué)院化學(xué)與化工系，山東濟(jì)寧 273115）

手性α－氰基丙烯酸酯類化合物的合成及生物活性研究

張慧蘋，姜琳琳

（濟(jì)寧學(xué)院化學(xué)與化工系，山東濟(jì)寧 273115）

α－氰基丙烯酸酯類化合物是一類抑制植物光合作用PSⅡ的重要除草劑，引入手性因素可以提高其活性。以氰基乙酸乙酯為原料，合成了3－對三氟甲基苯胺－3－（R／S）－α－甲基芐胺－2－氰基丙烯酸酯，對中間體及目標(biāo)化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征；并對α－氰基丙烯酸酯類化合物的生物活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，該類化合物除草活性不突出，但具有一定的抗煙草花葉病毒活性及抗癌活性，具有深入研究的價值。

α－氰基丙烯酸酯；手性；反應(yīng)機(jī)理；生物活性

研究表明，α－氰基丙烯酸酯類化合物是一類抑制植物光合作用的重要除草劑，它作用于光合作用PSⅡ中質(zhì)體醌QB的結(jié)合部位，競爭性替換與D1蛋白質(zhì)結(jié)合的質(zhì)體醌QB，導(dǎo)致電子傳遞受阻［1，2］。由于丙烯酸酯類化合物具有作用機(jī)制新穎、對有益生物無毒、環(huán)境友好等特點，已成為該領(lǐng)域的研究熱點。Huppatz等［3］運(yùn)用CoMFA方法對系列光學(xué)活性α－氰基丙烯酸酯及其HiⅡ活性進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)S異構(gòu)體較R異構(gòu)體活性高。因此，作者以氰基乙酸乙酯為原料，與二硫化碳反應(yīng)合成3，3－二甲硫基－2－氰基丙烯酸酯（Ⅰ），然后與對三氟甲基苯胺合成3－對三氟甲基苯胺－3－甲硫基－2－氰基丙烯酸酯（Ⅱ），再與（R／S）－α－甲基芐胺反應(yīng)合成了手性化合物3－對三氟甲基苯胺－3－（R／S）－α－甲基芐胺－2－氰基丙烯酸酯，對中間體及目標(biāo)化合物進(jìn)行了表征，并對手性α－氰基丙烯酸酯類化合物的生物活性進(jìn)行了測試。

1 實驗

1.1 合成方法

1.1.1 3，3－二甲硫基－2－氰基丙烯酸酯（Ⅰ）的合成

在1000mL四口瓶中加入無水乙醇400mL、氰

基乙酸乙酯34.0g（0.301mol）、二硫化碳23.0g（0.303mol），控制溫度低于20℃，滴加360mL（0.610mol）1.7mol·L－1的乙醇鈉，1h滴加完畢，常溫攪拌8h；再滴加38.5g（0.305mol）硫酸二甲酯，30min滴加完畢，加熱回流2.5h；反應(yīng)畢，將反應(yīng)體系倒入500mL水中，靜置過夜，得白色針狀固體，抽濾，烘干；用正己烷－乙醚（1∶1）重結(jié)晶2次，得化合物Ⅰ。

1.1.2 3－對三氟甲基苯胺－3－甲硫基－2－氰基丙烯酸酯（Ⅱ）的合成

將化合物Ⅰ2.17g（0.01mol）、對三氟甲基苯胺1.61g（0.01mol）加到50mL三口瓶中，快速加入0.80g（0.02mol）60%的NaH；控制溫度低于10℃，迅速滴加8mL DMF－8mL甲苯混合溶劑（干燥處理），常溫超聲反應(yīng)3h；反應(yīng)畢，將反應(yīng)體系倒入100 mL冰水中，分出水相，用10%HCl緩慢調(diào)節(jié)pH值，析出淡黃固體，烘干，稱重2.25g；用乙醇重結(jié)晶，得化合物Ⅱ。

1.1.3 3－對三氟甲基苯胺－3－（R／S）－α－甲基芐胺－2－氰基丙烯酸酯（Ⅲ－R／S）的合成

將1.2g（0.036mol）化合物Ⅱ和0.44g（R／S）－α－甲基芐胺加到20mL無水乙醇中，在微波功率為600W、97℃的條件下回流20～30min后，TLC跟蹤顯示反應(yīng)基本結(jié)束，脫溶，得黃色粘稠液體；用無水乙醇重結(jié)晶，得到目標(biāo)化合物Ⅲ－R／S。

1.2 生物活性測試

1.2.1 除草活性測試［4］

采用盆栽法測試除草活性：以油菜（B.campestrisL.）、反枝莧（A.retroflexusL.）和稗草（E.crusgalliB.）為試材，采用播后苗前土壤處理和苗后1～1.5期莖葉處理，10d后計算地上部分鮮重抑制率。

1.2.2 對TMV侵染的活體治療作用測試［5］

采用半葉枯斑法測試對TMV侵染的活體治療作用：選長勢一致的心葉煙，先用毛筆蘸取病毒汁液，全葉接種病毒，接種后用水沖洗。待葉片干后，在左半葉涂施藥劑，右半葉涂施對應(yīng)濃度的溶劑作對照，3～4d后記錄枯斑數(shù)（取3次實驗的平均值）。按下式計算抑制率：

1.2.3 對PC3、A431細(xì)胞增殖的抑制作用測試［6］

采用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）比色分析法測試對PC3、A431細(xì)胞增殖的抑制作用：取對數(shù)生長期的PC3、A431細(xì)胞分別加入到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔細(xì)胞數(shù)為1×103個，過夜培養(yǎng)，次日加入合適終濃度的相應(yīng)藥劑，總體積為200μL。同時設(shè)陰性對照組和空白對照組，每組設(shè)6個平行孔。將培養(yǎng)板置于5% CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h后，每孔加入20μL MTT繼續(xù)培養(yǎng)4h，吸去上清液，每孔加入150μL DMSO，混勻，10min后于酶標(biāo)儀上測定各孔吸光度（A490）。按下式計算細(xì)胞增殖抑制率：

2 結(jié)果與討論

2.1 中間體及目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)表征

2.2 目標(biāo)化合物的生物活性

2.2.1 除草活性（表1）

由表1可知，手性化合物Ⅲ－R、Ⅲ－S的除草活性均不突出。

表1 手性化合物Ⅲ的除草活性Tab.1 Herbicidal activities of chiral compoundsⅢ

2.2.2 對TMV侵染的活體治療作用

選取寧南霉素、病毒A、娃兒藤堿、化合物Ⅱ、化合物Ⅲ－R、化合物Ⅲ－S，對心葉煙進(jìn)行活體治療隨接試驗，結(jié)果見表2。

表2 手性化合物Ⅲ對TMV侵染的活體治療作用Tab.2 Curative effect of chiral compoundsⅢagainst TMVinvivo

由表2可知，手性化合物Ⅲ－R、Ⅲ－S的用量在500 mg·L－1時對TMV侵染有較好的活體治療作用，抑制率分別為41.7%、44.5%，與對照藥劑效果相當(dāng)，具有進(jìn)一步研究的價值。

2.2.3 對PC3、A431細(xì)胞增殖的抑制作用（表3）

由表3可知，目標(biāo)手性化合物Ⅲ－R、Ⅲ－S均對PC3、A431細(xì)胞增殖表現(xiàn)出與5－氟尿嘧啶（5－Fu）相當(dāng)?shù)囊种苹钚?，甚至高出?0%～20%。針對目前市場抗癌藥物品種較少、特效藥極其匱乏的現(xiàn)狀，該發(fā)現(xiàn)具有關(guān)注價值。

表3 手性化合物Ⅲ對PC3、A431細(xì)胞增殖的抑制作用（5μmol·L－1，P＜0.01）Tab.3Inhibition rate of chiral compoundsⅢto growth of PC3cells and A431cells in 72h（5μmol·L－1，P＜0.01）

3 結(jié)論

以氰基乙酸乙酯為原料，合成了3－對三氟甲基苯胺－3－（R／S）－α－甲基芐胺－2－氰基丙烯酸酯，該類化合物除草活性不突出，但具有一定的抗煙草花葉病毒活性及抗癌活性，具有深入研究的價值。

［1］Mackay S P，O′malley P J.Molecular modelling of the interaction between DCMU and QB－binding site of photosystemⅡ［J］.Z Naturforsch C，1993，48（3－4）：291－298.

［2］Huppatz J L.Quantifying the inhibitor－target site interactions of photosystemⅡherbicides［J］.Weed Science，1996，44（3）：743－748.

［3］Huppatz J L，Phillips J N，Rattigan B M.Cyanoacrylates.Herbicidal and photosynthetic inhibitory activity［J］.Agricultural Biology and Chemistry，1981，45（12）：2769－2773.

［4］譚惠芬，劉華銀，楊華錚，等.希爾反應(yīng)測定中新型抑制劑活性的鑒定方法［J］.植物生理學(xué)通訊，1998，34（2），126－129.

［5］李樹正，王篤祜，焦書梅，等.農(nóng)藥實驗法：殺菌劑篇［M］.北京：農(nóng)業(yè)出版社，1991：93－94.

［6］Skehan P，Storeng R，Scadiero D，et al.New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer－drug screening［J］.Journal of the National Cancer Institute，1990，82（13）：1107－1112.

Study on Synthesis and Bioactivity of Chiralα－Cyanoacrylate Compounds

ZHANG Hui－ping，JIANG Lin－lin
（CollegeofChemistryandChemicalEngineering，JiningUniversity，Jining273115，China）

α－Cyanoacrylate is a kind of important herbicide targeted in photosystem PSⅡ.Introduction of chiral factor can improve its activity.Using cyano ethyl acetate as raw material，ethyl 3－（R／S）－1－phenylethylamino－3－（4－（trifluoromethyl）－phenylamino）－2－cyanoacrylate were synthesized.The intermediates and the target compounds were characterized，and the bioactivities of chiralα－cyanoacrylate compounds were determined.The results showed that herbicidal activity of chiralα－cyanoacrylate compounds were not prominent，but they had a certain resistance activity to tobacco mosair virus and anti－cancer activity.

α－cyanoacrylate；chirality；reaction mechanism；bioactivity

TQ 225.24

A

1672－5425（2012）10－0051－03

10.3969／j.issn.1672－5425.2012.10.014

濟(jì)寧學(xué)院青年科研基金項目（2011QNKJ11）

2012－07－06

張慧蘋（1978－），女，山東菏澤人，講師，研究方向：農(nóng)藥學(xué)，E－mail：15963790553＠163.com。