徐水琴

(北京航天中心醫(yī)院 中藥房,北京 100049)

中藥工業(yè)

采用自動煎藥機制備橘紅痰咳液的工藝及穩(wěn)定性研究

徐水琴

(北京航天中心醫(yī)院 中藥房,北京 100049)

目的研究自動煎藥機制備橘紅痰咳液的最佳煎藥工藝及穩(wěn)定性。方法選定影響煎藥的3個主要因素，通過正交試驗確定最佳煎藥工藝；采用HPLC法測定不同貯存方法和貯存時間橘紅痰咳液中苦杏仁苷和柚皮苷的含量及其衛(wèi)生學(xué)檢測指標(biāo)。結(jié)果橘紅痰咳液在所測定的7周內(nèi)，藥液微生物含量符合《中國藥典》2010版中關(guān)于合劑的微生物限度要求；苦杏仁苷和柚皮苷在7周內(nèi)含量比較穩(wěn)定。結(jié)論煎藥機制備橘紅痰咳液最佳煎煮工藝為浸泡40 min，100 ℃煎40 min；橘紅痰咳液在常溫和冰箱能保存4周。

中藥煎藥機；橘紅痰咳；苦杏仁苷；柚皮苷；高效液相色譜法；微生物

自從韓國研制了第一臺自動煎藥機后，中藥煎藥機在各大醫(yī)院和零售藥店被廣泛使用。煎藥機與傳統(tǒng)煎藥方法相比具有方便、快捷、衛(wèi)生、耐儲存等優(yōu)點。但是自動煎藥機的煎藥工藝和質(zhì)量考察卻鮮有報道，對其保存時間的研究也未見報道。為此，我們選擇橘紅痰咳液對自動煎藥機的制備工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和貯存期進(jìn)行了系統(tǒng)研究，以期對自動煎藥機的性能進(jìn)行評價，為醫(yī)院和藥店的正確使用提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 高效液相色譜系統(tǒng)

LC-3A溶劑輸送泵，SPD-10Avp紫外檢測器，SIL-10ADvp自動進(jìn)樣器。BKL-3010色譜工作站。自動煎藥機為韓國產(chǎn)東南DN-15型，包裝機為東南DN-12型。

1.2 試藥

柚皮苷對照品(批號：722-200107)、苦杏仁苷對照品(批號：110820-200403)，購自中國食品藥品檢定研究院?；偌t(北京四方中藥飲片有限公司，批號：11063003，產(chǎn)地：浙江)?？嘈尤?北京鶴延齡中藥飲片有限公司，批號：101043，產(chǎn)地：河北)。甲醇、乙腈和磷酸為分析純，水為瓶裝純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 橘紅痰咳液最佳煎藥工藝研究

根據(jù)文獻(xiàn)[1-3]，影響煎藥效果的主要因素有：藥材粉碎度、加水量、浸泡時間、煎煮時間、煎煮溫度等，本研究主要考察后3個因素對煎藥的影響。根據(jù)L9(34)正交表進(jìn)行正交試驗。

表1 正交試驗因素水平

2.1.1 苦杏仁苷煎煮工藝正交試驗 正交試驗結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表2 苦杏仁苷煎煮工藝正交試驗結(jié)果

表3 苦杏仁苷煎煮工藝方差分析表

注：n=2

表3正交試驗方差分析表表明以上3個條件對苦杏仁苷含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義。依據(jù)常規(guī)煎藥方法,選定最佳煎煮工藝為浸泡40 min，100 ℃煎40 min。

2.1.2 柚皮苷正交試驗 正交試驗結(jié)果見表4，方差分析見表5。

表4 柚皮苷煎煮工藝正交試驗結(jié)果

表5 柚皮苷煎煮工藝正交方差分析表

注：n=2

正交試驗方差分析表驗證以上3個因素對柚皮苷含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義。綜合以上實驗數(shù)據(jù)，并按照常規(guī)煎藥方法,最終確定煎煮工藝為：浸泡40 min，100 ℃煎40 min。

2.2 橘紅痰咳液煎劑中苦杏仁苷和柚皮苷含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)柱?？嘈尤受諟y定[4]：流動相為甲醇-水-磷酸(110∶390∶2.5)，檢測波長為210 nm，進(jìn)樣20 μL，苦杏仁苷出峰時間比較合適(約為15 min)，分離度為1.7。

柚皮苷測定[5]：流動相為甲醇-乙腈-水-磷酸(75∶75∶350∶2.5)，檢測波長為283 nm，進(jìn)樣5 μL,流速為1.0 mL·min-1，室溫。柚皮苷出峰時間比較合適，約為19 min,分離度為1.8，在此條件下，苦杏仁苷不出峰。

2.2.2 對照品溶液的制備

2.2.2.1 苦杏仁苷對照品溶液制備 精密稱取苦杏仁苷對照品1.87 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇適量超聲振蕩溶解，定容即得，濃度為0.187 mg·mL-1,色譜圖見圖1。

2.2.2.2 柚皮苷對照品溶液制備 精密稱取柚皮苷對照品1.86 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇適量超聲振蕩溶解，定容即得，濃度為0.186 mg·mL-1,色譜圖見圖1。

A.苦杏仁苷 B.柚皮苷圖1 苦杏仁苷和柚皮苷對照品HPLC圖

2.2.3 供試品溶液的制備 精密量取供試品5 mL，上大孔樹脂HPD-100小柱(1 cm內(nèi)徑)，用純凈水80 mL沖洗，繼用95%乙醇50 mL淋洗，洗液水浴蒸干，殘渣加甲醇適量，溫?zé)崾谷芙猓D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，上清液用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。供試品樣品HPLC圖見圖2、3。

圖2 供試品樣品HPLC圖(苦杏仁苷)

圖3 供試品樣品HPLC圖(柚皮苷)

2.2.4 線性關(guān)系

2.2.4.1 苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密吸取苦杏仁苷對照品溶液不同體積進(jìn)樣，測得峰面積，以峰面積和進(jìn)樣量計算回歸方程Y=1.178 27×10-6X+1.908 35×10-3，r=0.999 7。結(jié)果表明苦杏仁苷在0.187～4.675 μg線性關(guān)系良好。

2.2.4.2 柚皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密吸取柚皮苷對照品溶液不同體積進(jìn)樣，測得峰面積，以峰面積和進(jìn)樣量計算回歸方程Y=6.589 51×10-7X+0.011 037 6,r=0.999 8。結(jié)果表明柚皮苷在0.186～5.58 μg線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度考察

2.2.5.1 苦杏仁苷 精密吸取同一對照品溶液進(jìn)樣6次，測定，計算RSD=1.25%。

2.2.5.2 柚皮苷 精密吸取同一對照品溶液進(jìn)樣6次，測定，計算RSD=0.88%。

2.2.6 穩(wěn)定性考察

2.2.6.1 苦杏仁苷 取同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，8 h各測定1次,計算RSD=3.03%,說明供試品在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6.2 柚皮苷 取同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，8 h各測定1次，計算RSD=2.42%，說明供試品在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗

2.2.7.1 苦杏仁苷 取同一批號的供試品6份，按供試品溶液制備方法處理，制備供試品溶液，每份供試品溶液進(jìn)樣3針，測定峰面積，計算RSD=2.77%。說明重復(fù)性試驗結(jié)果良好。

2.2.7.2 柚皮苷 取同一批號的供試品6份，按供試品溶液制備方法處理，制備供試品溶液，每份供試品溶液進(jìn)樣3針，測定峰面積，計算RSD=2.97%。說明重復(fù)性試驗結(jié)果良好。

2.2.8 加樣回收率試驗

2.2.8.1 苦杏仁苷 取已知含量的藥液，精密加入0.5，1，1.5倍量的苦杏仁苷對照品，按樣品含量測定方法測定，每個濃度測3份，計算回收率及RSD，結(jié)果見表6。

2.2.8.2 柚皮苷 取已知含量的藥液，精密加入0.5，1，1.5倍量的柚皮苷對照品，按樣品含量測定方法測定，每個濃度測3份，計算回收率及RSD，結(jié)果見表6。

表6 回收率試驗結(jié)果

2.2.9 不同放置時間樣品的含量測定及微生物檢測

2.2.9.1 飲片含量測定[6]精密稱取苦杏仁粗粉1.317 3 g，置于具塞錐形瓶中，加100 mL甲醇，稱重，超聲30 min，放至室溫，稱重，補足分量，0.45 μm微孔濾膜濾過，進(jìn)樣10 μL。精密稱取化橘紅粗粒1.456 3 g，加60～90 ℃石油醚80 mL水浴回流2.5 h，揮盡石油醚，加甲醇回流提取3 h，移至100 mL容量瓶中，定容，0.45 μm微孔濾膜濾過，進(jìn)樣5 μL。

2.2.9.2 不同放置時間的樣品含量測定及微生物檢測 按照最佳煎藥條件，一次煎煮20付藥，一部分常溫保存，一部分冰箱(-4 ℃)保存，一部分40 ℃、RH=75%保存。按照前面所示配制供試品，苦杏仁苷樣品進(jìn)樣10 μL，柚皮苷樣品進(jìn)樣5 μL。結(jié)果見表7。微生物含量測定照《中國藥典》2010版一部附錄ⅠJ合劑微生物限度檢查法檢查，都符合規(guī)定。

表7 不同放置時間的橘紅痰咳液含量測定結(jié)果 /mg·g-1

注：標(biāo)號1為常溫保存，2為冰箱冷藏保存，3為加速保存(40 ℃，RH=75%)。

3 討論

《中國藥典》2010年版橘紅痰咳液項下只有柚皮

苷含量測定，沒有苦杏仁苷含量測定?？嘈尤受蘸侩m然比較少，也是一個很重要的成分,并且苦杏仁苷有小毒。本試驗建立了兩個成分的含量測定方法，對完善橘紅痰咳液的含量測定提供了一定的依據(jù)。

煎藥機煎得的藥液成分很復(fù)雜，雜質(zhì)很多，需要經(jīng)過預(yù)處理，比較了石油醚、乙酸乙酯萃取，大孔吸附樹脂處理，最后確定最佳條件為大孔樹脂HPD-100，95%乙醇處理效果最佳。

藥液在設(shè)定的幾個因素下,苦杏仁苷和柚皮苷含量差異并無統(tǒng)計學(xué)意義,可能是煎煮半小時以上,這兩個成分已溶出完全。

藥液放置兩個月微生物檢測仍然合格，說明藥液的密封性能很好，但藥液本身含有的抑菌成分是否在起作用需進(jìn)一步研究。

[1] 林寧.中藥煎煮機技術(shù)特點與使用[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2001,10(23):2271-2272.

[2] 宋小勇，應(yīng)裕國，張樹堯，等.煎藥機的煎煮條件研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2000,11(9):782

[3] 李彬.應(yīng)用新型煎藥機煎藥時對加水量的實驗研究[J].天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2004,10(1):68-70.

[4] 袁丹，胡爽，畢開順，等.HPLC測定復(fù)方制劑中苦杏仁苷含量的研究[J].藥物分析雜志,2002,22(5)：361-365.

[5] 陳新，柯康保.HPLC法測定橘紅痰咳液中柚皮苷的含量[J].中藥材,2000，23(8)：489.

[6] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:69，187，1224.

StudyonOptimizationProcessandStabilityofJuhongtankeDecoctionPreparedbyAutomaticChineseMaterialMedicaBoilingMachine

XU Shui-qin

(AerospaceCenterHospital,Beijing100039,China)

Objective:To study the optimal process and stability of Juhongtanke decoction prepared by automatic CMM(Chinese Material Medica) boiling machine.MethodsOrthogonal experimental method was used to sellect an optimal process from three factors. Amounts of animalcules and contents of amygdalin and naringin of Juhongtanke decoction were used as evaluation on storage way and time.ResultsAmounts of animalcules was accord with specified number in Chinese Pharmacopoeia.Contents of amygdalin and naringin are steady comparatively in 7 weeks.ConclusionThe optimal process of decoct Juhongtanke is soaking in water for 40 minutes, boiling for 40 minutes in 100 ℃; Juhongtanke decoction can be preserved for 7 weeks in friger or room temperature.

Automatic CMM (Chinese material medica) boiling machine;Juhongtanke; Amygdalin;Naringin; HPLC;Animalcule

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徐水琴,E-mail：lindaxu188@163.com

2011-11-19)