孫瑞芳， 劉 蕾， 蔡海燕， 劉永鎖

（1.民航總醫(yī)院，北京 100123；2.北京雙鶴高科天然藥物有限責任公司，北京 100123；3.民航醫(yī)學研究所，北京 100123）

舒血寧注射液具有擴張冠脈血管、腦血管，改善腦缺血產(chǎn)生的癥狀和記憶功能，被臨床廣泛應用于治療急慢性腦機能不全及其后遺癥、缺血性心臟病、眼部的血流及神經(jīng)障礙、耳部的血流及神經(jīng)障礙及末梢循環(huán)障礙。但是，近幾年來中藥注射劑的不良反應引起人們的關注，尤其是不溶性微粒帶來的輸液反應時有發(fā)生［1］。大量文獻報道使用精密過濾輸液器和普通輸液器的對比觀察，發(fā)現(xiàn)使用精密過濾輸液器有預防和減少靜脈炎發(fā)生的作用，且效果明顯［2-3］。所以，臨床上普遍使用精密過濾輸液器輸注中藥注射劑。

目前中藥注射劑的輸注選擇精密輸液器是基于臨床觀察得出的一種看法，它對降低輸液反應是有利的，但是中藥注射劑成分復雜，一般有多個主要成分，那么中藥注射劑經(jīng)過精密輸液器后主要成分的含有量是否有變化［4］。而且，臨床上也遇到精密輸液器的過濾裝置在輸注舒血寧注射液過程中被堵的情況，因此，本項目選擇舒血寧注射液為模型藥物，以指紋圖譜作為舒血寧注射液質量的主要評價方法［5-6］。通過建立高效液相色譜法考察精密輸液器和普通輸液器對舒血寧注射液質量的影響，為臨床應用舒血寧注射液選擇合適的輸液器提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(島津LC-20AT)；高效液相色譜儀進樣器(SIL-20AT)；雷磁PHS-3C精密pH計；GWF-5J微粒分析儀(激光光源傳感器，天河醫(yī)療儀器有限公司)；500 mL潔凈輸液瓶；一次性普通輸液器(0.7×20，規(guī)格H-06APD-3T4，天津哈娜好醫(yī)材有限公司)；一次性精密輸液器(過濾介質孔徑為5.0 μm，規(guī)格PT-20D，北京伏爾特技術有限公司)。

1.2 試藥 舒血寧注射液(北京雙鶴高科天然藥物有限公司規(guī)格:5 mL/支，含總黃酮醇苷4.2 mg，銀杏總內酯0.70 mg，批號091119)，5%葡萄糖注射液(250 mL/500 mL，批號200912073，北京雙鶴藥業(yè))、氯化鈉注射液(250 mL/500 mL，批號200911042，北京雙鶴藥業(yè))；乙腈為色譜純，水為注射用水，磷酸為分析純。

2 方法與結果

2.1 方法學考察

2.1.1 色譜條件［7］色譜柱:Phenomenex:Kinetex TMC18(2.6 μm，4.6 mm×100 mm)；流動相為水(0.5% 磷酸水溶液)(A)-乙腈(100%)(B)。梯度洗脫條件見表1。檢測波長 360 nm；進樣量 5 μL。

表1 梯度洗脫條件

2.1.2 系統(tǒng)適用性實驗 取舒血寧注射液稀釋液、蘆丁對照品分別進樣5 μL，記錄色譜圖，見圖1。對比保留時間，將蘆丁峰作為參照峰，理論塔板數(shù)應大于40000，樣品在蘆丁峰前后分離為不少于5個色譜峰(實際為7～8個色譜峰)，其相鄰峰的分離度不小于1.2。同一供試品連續(xù)進樣10針，其相似度應大于0.99。

2.2 實驗方案［8］

2.2.1 單因素考察舒血寧注射液在不同條件下輸注后的含有量對比研究 模擬臨床輸液環(huán)境，單因素考察舒血寧注射液在不同質量濃度、不同溶媒、不同輸注速度、不同輸液器配置條件下藥物輸注后的含有量變化(n=3)，輸注后用潔凈輸液瓶收集液體經(jīng)HPLC觀察舒血寧指紋圖譜特征，測定相似度。結果見表2。

2.2.2 單因素考察舒血寧注射液在不同條件下輸注后的微粒分布對比研究［9］模擬臨床輸液環(huán)境，單因素考察舒血寧注射液在不同質量濃度、不同溶媒、不同輸注速度、兩種輸液器濾過條件下藥物輸注后的微粒分布變化(n=3)，輸注后用潔凈輸液瓶收集液體經(jīng)GWF-5J微粒分析儀測定微粒個數(shù)。

表2 單因素考察實驗方案

2.2.3 單因素考察舒血寧注射液在不同條件下輸注后的pH對比研究 模擬臨床輸液環(huán)境，單因素考察舒血寧注射液在不同質量濃度、不同溶媒、不同輸注速度、兩種輸液器濾過條件下藥物輸注后的pH變化(n=3)，輸注后用潔凈輸液瓶收集液體經(jīng)精密pH計測定pH。

2.3 實驗結果

2.3.1 舒血寧注射液HPLC指紋圖譜 本實驗中供試品為舒血寧注射液原液稀釋25倍液，從指紋圖譜分離情況看，蘆丁峰的理論塔板數(shù)為40000，在蘆丁峰前后分離為不少于5個色譜峰，相鄰峰的分離度為1.2，同一供試品連續(xù)進樣相似度大于0.99，滿足舒血寧注射液配伍實驗測定要求。見圖1。

圖1 舒血寧注射液HPLC指紋圖譜

圖2 單因素實驗方案中舒血寧注射液的HPLC指紋圖譜

表2 單因素實驗方案中舒血寧注射液的相似度

2.3.2 不同條件下舒血寧注射液輸注后指紋圖譜 單因素考察舒血寧注射液在不同條件下輸注后的指紋圖譜與舒血寧注射液標準圖譜匹配圖見圖2，計算后相似度見表2。舒血寧注射劑的質量控制范圍為與標準指紋圖譜比較相似度大于0.90合格。

由上述結果得出，舒血寧注射液20 mL加入到5%葡萄糖250 mL經(jīng)普通、精密輸液器2 h滴完后樣品指紋圖譜相似，相似度比為0.989；舒血寧注射液20 mL加入到5%葡萄糖500 mL注射液中，經(jīng)普通、精密輸液器2 h滴完后樣品指紋圖譜相似，相似度比為1.004；舒血寧注射液20 mL加入到5%葡萄糖250 mL注射液中，經(jīng)普通、精密輸液器高速(約1 h)滴完后樣品指紋圖譜相似，相似度比為1；舒血寧注射液20 mL加入到250 mL 0.9%氯化鈉后分別經(jīng)過普通輸液器和精密輸液器2 h滴完后樣品指紋圖譜相似，相似度比為1，指紋圖譜均未發(fā)現(xiàn)顯著性變化。

2.3.3 不同條件下舒血寧注射液輸注后不溶性微粒 單因素考察舒血寧注射液在不同條件下輸注后的不溶性微粒個數(shù)測定結果見圖3～5。

圖3 單因素實驗方案中舒血寧注射液輸液過濾前后不溶性微粒檢測結果

圖4 不同實驗方案下≥10 μm微粒測定結果

圖5 不同實驗方案下≥25 μm微粒測定結果

按照中國藥典［10］規(guī)定，5%葡萄糖注射液250 mL每1 mL中含≥10 μm的微粒不得超過25粒，含≥25 μm不得超過3粒，舒血寧注射液每支(5 mL)中含≥10 μm不得超過6000粒，含≥25 μm不得超過600粒，本實驗中收集輸注后配伍液體100 mL，按照中國藥典標準計算，總≥10 μm粒子不得大于(25×250+6000×4=30250)，總≥25 μm粒子不得大于(3×250+600×4=3150)，則每1 mL中含≥10 μm不得超過112粒，含≥25 μm不得超過12粒。由圖3看出，每1 mL中含不溶性微?！?0 μm 有25～58個，含≥25 μm有4～9個，均符合規(guī)定，通過SPSS統(tǒng)計軟件分析，經(jīng)不同輸液器后微粒沒有顯著性差異(P＞0.05)；由圖4～5看出，4種實驗方案下≥10 μm和≥25 μm微粒比較，輸液前(舒血寧注射液與溶媒配伍后0.5 h，不經(jīng)過輸液器直接取樣)的不溶性微粒與兩種輸液器輸注后的不溶性微粒個數(shù)是有顯著性差異的(P＜0.05)，A、B、C 3種方案中舒血寧注射液與5%葡萄糖注射液配伍后輸液前≥25 μm微粒個數(shù)超出中國藥典標準，只有D方案中舒血寧注射液與0.9%氯化鈉配伍后輸液前和輸液后的不溶性微粒個數(shù)都是符合藥典標準的。

2.3.4 不同實驗方法測定的舒血寧注射液的pH值，結果見表3。

表3 單因素實驗方案中舒血寧注射液輸液的pH值

由表3可見，舒血寧注射液模擬臨床輸液，20 mL加入到5%葡萄糖注射液250 mL中，經(jīng)普通、精密輸液器2 h滴完后樣品的pH 4.74，4.69；舒血寧注射液20 mL加入到5%葡萄糖500 mL注射液中，經(jīng)普通、精密輸液器2 h滴完后樣品pH 4.16、4.15；舒血寧注射液20 mL加入到5%葡萄糖250 mL注射液中，經(jīng)普通、精密輸液器1 h滴完后樣品的pH 4.70、4.71；20 mL舒血寧注射液加入到250 mL 0.9%氯化鈉后分別經(jīng)過普通輸液器和精密輸液器2 h滴完后樣品pH 5.02、5.03；可以認為兩種輸液器對舒血寧注射液pH沒有影響。

3 討論

3.1 本實驗通過建立高效液相法測定舒血寧注射液與溶媒配伍后的舒血寧中黃酮類化合物的含有量變化，液相條件已經(jīng)用于生產(chǎn)企業(yè)的質量控制，方法可靠，舒血寧注射液中黃酮類化合物的指紋圖譜分離度高，相似度計算方法可行。

3.2 本實驗方案模擬臨床輸液情況，按藥品說明書使用要求選取劑量為20 mL，單因素考察舒血寧注射液在不同質量濃度、不同溶媒、不同輸注速度、不同輸液器配置條件下藥物輸注后的含有量變化。實驗結果顯示，舒血寧注射液在高或低質量濃度、用5%葡萄糖注射液或0.9%氯化鈉注射液配伍、在高或低輸注速度輸注時，無論是經(jīng)過普通輸液器還是精密輸液器得到的液體經(jīng)測定，與標準指紋圖譜比較相似度均在0.95以上，可以認為舒血寧注射液通過兩種輸液器后的主要成分含有量沒有顯著性差異。

3.3 單因素考察舒血寧注射液在不同質量濃度、不同溶媒、不同輸注速度、不同輸液器配置條件下藥物輸注后的pH沒有顯著性變化，與文獻報道一致［11］。

3.4 將不溶性微?？疾鞌?shù)據(jù)通過SPSS統(tǒng)計軟件分析得出，各種實驗方案下經(jīng)普通輸液器和精密輸液器輸注后得到的液體中不溶性微粒個數(shù)都符合藥典規(guī)定，且相互間沒有顯著性差異(P＞0.05)，可以說在本實驗中普通輸液器和精密輸液器在降低不溶性微粒個數(shù)上沒有顯著性差異。但是比較舒血寧注射液與溶媒配伍后0.5 h，不通過輸液器的溶液(以下稱輸液前)的不溶性微粒發(fā)現(xiàn)，A、B、C 3種方案中舒血寧注射液與5%葡萄糖注射液配伍后輸液前≥25 μm微粒個數(shù)超出藥典標準，只有D方案中舒血寧注射液與0.9%氯化鈉配伍后輸液前和輸液后的不溶性微粒個數(shù)都是符合藥典標準的，而且輸液前的不溶性微粒與兩種輸液器輸注后的不溶性微粒個數(shù)是有顯著性差異的(P＜0.05)，說明舒血寧注射液在配伍后不溶性微粒都有增大的趨勢，與文獻報道相符［12］。但是通過輸液器中的過濾介質都會顯著截留不溶性微粒，有效的降低不溶性微粒的個數(shù)，保證藥液進入人體靜脈的安全性；另外舒血寧注射液與0.9%氯化鈉配伍后不溶性微粒個數(shù)增加幅度不大，符合藥典標準，建議生產(chǎn)廠家在說明書中增加0.9%氯化鈉的配伍選擇。

3.5 本實驗結果顯示，舒血寧注射液通過精密輸液器后質量濃度、pH沒有顯著性改變，與普通輸液器相比也沒有顯著性差異，臨床使用精密輸液器不會因為輸液器的過濾作用而影響舒血寧注射液的質量濃度，從而影響療效。

3.6 臨床評價精密輸液器在控制輸液不良反應上有顯著性優(yōu)勢［2］，從臨床的角度證明使用精密輸液器輸注中藥注射劑是更為安全可行的方法。但是，精密輸液器通過什么方式降低了不良反應的發(fā)生，文獻報道［2］用精密輸液器過濾了不溶性微粒，降低了過敏原。從本實驗結果看精密輸液器與普通輸液器均能有效地降低配伍后的舒血寧注射液的不溶性微粒，但是精密輸液器5.0 μm的過濾介質與普通輸液器8.0～10.0 μm的過濾介質相比沒有截留更多的不溶性微粒，沒有顯著降低微粒個數(shù)，本實驗結果顯示對于舒血寧注射液的輸注使用精密輸液器并沒有顯著優(yōu)于普通輸液器。兼顧藥物經(jīng)濟學因素，臨床輸注舒血寧注射液不一定必須選擇精密過濾輸液器。

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