徐 斐，胡安青

(鎮(zhèn)江市藥品檢驗(yàn)所，江蘇鎮(zhèn)江212003)

復(fù)方青黛膠囊收載于國家藥品標(biāo)準(zhǔn)［1］，處方由青黛、馬齒莧、白芷、土茯苓、紫草、貫眾、蒲公英、丹參、粉萆薢、白皮、烏梅、五味子(酒制)、山楂(焦)、建曲組成。具有清熱解毒，化瘀消斑，祛風(fēng)止癢的功能。臨床用于熱挾瘀、熱毒熾盛證;進(jìn)行期銀屑病、玫瑰糠疹、藥疹等治療。但在控制產(chǎn)品的質(zhì)量方面，原標(biāo)準(zhǔn)采用薄層掃描法測(cè)定復(fù)方青黛膠囊中靛玉紅的含量，其操作過程復(fù)雜，重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、精密度均較高效液相色譜法差。而筆者以高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方青黛膠囊中靛玉紅含量，結(jié)果表明，方法簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，可用于復(fù)方青黛膠囊的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SK250LH超聲波清洗器 (上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司);Waters高效液相色譜儀系統(tǒng)(1525泵、2487紫外可見光光度檢測(cè)器、Empower工作站);BP211D型電子天平(賽多利士)。

1.2 試藥 靛玉紅對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110717－200204);復(fù)方青黛膠囊(陜西醫(yī)藥控股集團(tuán)XX制藥有限責(zé)任公司，批號(hào):110202，101204，100406);甲醇為色譜純(Merck KgaA，Germany);水為純化水，其他均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動(dòng)相［2］:甲醇 － 水(70∶30);流速:1.0 mL·min－1;檢測(cè)波長(zhǎng):292 nm;柱溫:室溫。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取靛玉紅對(duì)照品9.90 mg，置于100 mL量瓶中，加三氯甲烷－甲醇(1∶9)混合溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得靛玉紅對(duì)照品貯備液(含靛玉紅 99.0 μg·mL－1)。精密量取 1 mL，置于10 mL 量瓶中，加三氯甲烷－甲醇(1∶9)溶液稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液(含靛玉紅 9.90 μg·mL－1)。

2.2.2 供試品溶液的制備［3］取本品10粒的內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于4粒內(nèi)容物的重量)，置具塞錐形瓶中，加乙醚20 mL，超聲處理30 min，濾過，用適量的乙醚洗滌濾渣和濾器兩次，合并洗滌液和濾液，再用10%氫氧化鈉溶液洗滌4 次(15 mL、15 mL、15 mL、10 mL)，棄去氫氧化鈉溶液，取乙醚層揮干，殘?jiān)尤燃淄椋状?1∶9)混合溶液使溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)過濾，取續(xù)濾液即得。

2.3 專屬性考察 按標(biāo)準(zhǔn)處方量及制法制得不含青黛的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上無色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對(duì)照對(duì)測(cè)定結(jié)果無干擾，方法專屬性良好，結(jié)果見圖1(C)。

圖1 靛玉紅色相圖 (A)靛玉紅對(duì)照品;(B)供試品;(C)陰性對(duì)照

2.4 線性關(guān)系 精密吸取靛玉紅貯備液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置于10mL量瓶中，加三氯甲烷－甲醇(1∶9)混合溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件測(cè)定，分別進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果進(jìn)樣量在9.90～49.50 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，回歸方程 Y=534.834X+0.010(r=0.999 9)。

2.5 精密度試驗(yàn) 取同一對(duì)照品溶液，依法操作，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10 μL。結(jié)果靛玉紅對(duì)照品峰面積的 RSD為1.0%，表明精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一樣品5份，按2.2.2項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣，依法測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果靛玉紅對(duì)照品含量的RSD為0.5%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性較好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 在本試驗(yàn)條件下，將樣品溶液每隔2 h進(jìn)樣10 μL。靛玉紅峰面積的RSD為0.7%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同一批樣品(110202)約相當(dāng)于2粒內(nèi)容物的重量，共6份。分別加入靛玉紅貯備液(含靛玉紅 99.00 μg·mL－1)2.0、2.5、3.0 mL，混勻，同供試品溶液制備，照樣品測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

2.9 樣品含量測(cè)定 取3批樣品，按供試品溶液制備方法制備溶液，進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算靛玉紅含量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 在樣品溶液制備中，我們對(duì)比了回流提取、索氏提取和超聲提取等方法，以超聲提取時(shí)間短，提取完全，雜質(zhì)較少;提取溶液用10%氫氧化鈉溶液洗滌后雜質(zhì)明顯減少，有利于色譜的測(cè)定。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3.2 試驗(yàn)表明，本法在一定濃度的范圍內(nèi)線性、精密度、穩(wěn)定性和回收率結(jié)果可靠，方法簡(jiǎn)便，快速，重現(xiàn)性好，可作為該制劑質(zhì)量控制方法。

［1］國家藥品監(jiān)督管理局.國家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)(第63冊(cè))［S］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2009:70－72.

［2］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:185.

［3］張俊燕.RP－HPLC法測(cè)定消炎退熱顆粒中靛玉紅的含量［J］.藥學(xué)與臨床研究，2007，15(2):163 －164.