張秀珍，龔永福，楊滿華，任震眠，肖祎云，溫家根，肖少香，陳玉祥，，*

（1.中南大學藥學院，湖南長沙 410008；2.萬福生科（湖南）農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司，湖南桃源 410128；3.湖南科技職業(yè)學院，湖南長沙 410004）

氣相色譜法檢測藥用葡萄糖原料碎米的有機氯殘留

張秀珍1，龔永福2，楊滿華2，任震眠2，肖祎云1，溫家根1，肖少香3，陳玉祥1，2，*

（1.中南大學藥學院，湖南長沙 410008；2.萬福生科（湖南）農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司，湖南桃源 410128；3.湖南科技職業(yè)學院，湖南長沙 410004）

考察湖南部分地區(qū)碎米的有機氯農(nóng)藥殘留情況，為以碎米為原料生產(chǎn)藥用葡萄糖提供安全保障，同時為合理使用有機氯農(nóng)藥提供參考。在《中國藥典》方法基礎上改良，提取樣品，濃硫酸凈化后，采用氣相色譜法測定有機氯含量。色譜柱為SE-54彈性石英毛細管色譜柱（30m×0.25mm×0.32mm），經(jīng)程序升溫技術分離，然后用電子捕獲檢測器進行檢測，外標法計算含量。結果表明，樣品中有不同程度的有機氯農(nóng)藥殘留，該方法快速、簡便、準確，適用于碎米中有機氯類農(nóng)藥殘留的檢測。

有機氯農(nóng)藥殘留，大米，氣相色譜法

在大米的精加工過程中，不可避免的會產(chǎn)生10% ~15%的碎米，碎米所含營養(yǎng)成分與大米相近，其淀粉含量將近70%~80%，但是其價格僅為整米的三分之一到二分之一，因此以碎米代替整米為原料，采用雙酶法生產(chǎn)藥用葡萄糖，不僅可以充分利用資源、節(jié)約成本，還可以增加大米的附加值。但是稻米在生長的過程中施用了大量的農(nóng)藥，因此收獲的稻米中均有不同程度的農(nóng)藥殘留。盡管我國早在1983年就停止生產(chǎn)和禁止使用一些有機氯類農(nóng)藥（六六六和滴滴涕）[1]，但由于其高效的殺蟲能力，低廉的市場價格再加上廣泛的適用性，使其仍不絕于市場；另外由于結構穩(wěn)定和難于降解的特點，有機氯農(nóng)藥在土壤、動物、植物中均有不同程度的殘留，給生物體本身及后代造成了很大的危害[2]。農(nóng)藥對人體的危害主要表現(xiàn)為三種形式：急性中毒、慢性危害和“三致”（致癌、致畸、致突變）危害[3]。六六六、滴滴涕等有機氯農(nóng)藥，隨食物途徑進入人體后，主要蓄積于脂肪中，其次為肝、腎、脾、腦中，通過人乳傳給胎兒引發(fā)下一代病變[4]。因此，為了保證糧食的安全性和保護人體的健康，檢測碎米中有機氯農(nóng)藥的殘留就顯得至關重要。本文參考2010版藥典以及相關文獻，采用氣相色譜-電子捕獲檢測（GC-ECD）法對湖南省部分地區(qū)的碎米中有機氯農(nóng)藥殘留進行檢測，旨在了解湖南各地水稻的有機氯殘留情況，為農(nóng)藥的合理使用和生產(chǎn)合格的藥用葡萄糖提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

α－BHC（批號：GBW（E）080725）、β－BHC（批號：GBW（E）080727）、γ－BHC（批號：GBW（E）0807229）、δ－BHC（批號：GBW（E）080731）、PP’－DDE（批號：GBW（E）080735）、OP’－DDT（批號：GBW（E）080739）、PP’－DDD（批號：GBW（E）080733）、PP’－DDT（批號：GBW（E）080737）和五氯硝基苯（PCNB）粉末（批號：GBW（E）060617）等 標準品，國家標準物質(zhì)研究中心。

島津GC－2010氣相色譜儀 配SE－54彈性石英毛細管色譜柱（30m×0.25mm×0.32mm）、63Ni電子捕獲檢測器（ECD）；AE163電子分析天平 Mettler；FW 80微型高速萬能試樣粉碎機 天津泰斯特儀器有限公司；KQ－250B超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；RE－5250真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 深圳三利化學品有限公司；飛鴿牌TDC－40B離心機 上海安亭科學儀器廠；N－EVAPTM 112氮吹儀 USA。

1.2 樣品的采集

采用隨機抽樣的方法從湖南六個市區(qū)（常德、長沙、岳陽、株洲、郴州、益陽）分別抽取碎米樣本各九份。

1.3 實驗方法

1.3.1 標準儲備液的制備 精密稱取六六六（BHC）（α－BHC，β－BHC，γ－BHC，δ－BHC）、滴滴涕（DDT）（PP’－DDE，PP’－DDD，OP’－DDT，PP’－DDT）及五氯硝基苯（PCNB）農(nóng)藥對照品適量，用石油醚（60～90℃）分別制成每1m L約含4～5μg的溶液；精密量取上述各對照品儲備液0.5m L置于10m L容量瓶中，用石油醚（60～90℃）稀釋至刻度，搖勻；精密量取上述混合儲備液對照品，用石油醚（60～90℃）制成每1L分別含有0、1、5、10、50、100、250μg的溶液，即得。

1.3.2 樣品溶液的制備 取適量碎米碎成細粉，取約2g，精密稱定，置于100m L具塞錐形瓶中，加水20m L，超聲處理30m in，精密加丙酮40m L，稱定重量，超聲處理30m in，冷卻，再稱定重量，用丙酮補足減失的重量，再加氯化鈉約6g，精密加二氯甲烷30m L，稱定重量，超聲處理15min，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失重量，靜置分層，將有機相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100m L具塞錐形瓶，放置4h。精密量取35m L，于40℃水浴上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至近干，加少量石油醚（60～90℃），如前反復操作至少三次，至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚（60～90℃）溶解并轉(zhuǎn)移至10m L具塞刻度離心管中，加石油醚（60～90℃）精密稀釋至5m L，小心加入硫酸1m L，振搖1min，離心（3000r/min）10m in，精密量取上清液2m L，置于具刻度的試管中，用氮吹儀將溶液濃縮至適量，精密稀釋至1m L，即得。

1.3.3 色譜條件 色譜柱：SE－54（30m×0.25mm× 0.32mm）彈性石英毛細管色譜柱，進樣口溫度260℃，檢測器溫度300℃，色譜柱程序升溫：初始120℃，保持6m in，5℃/m in升至220℃，保持10m in，8℃/m in升至250℃，保持15m in，檢測總時間為54.75m in。載氣為高純氮（質(zhì)量分數(shù)＞99.999%），氣流量為30m L/m in，1μL不分流進樣，外標法定量。

2 結果與分析

2.1 系統(tǒng)適應性

在確定好的色譜條件下，取按照1.3.1項下制備的混合標準品進樣。結果發(fā)現(xiàn)，兩色譜峰分離度大于1.5[5]，理論塔板數(shù)按α－BHC對照品峰計算高于1×106，并確定9種有機氯農(nóng)藥的保留時間（圖1）。

圖1 250μg/L有機氯標準混合液色譜圖Fig.1 GC chromatogram of standard solutions of organochlorine pesticides（250μg/L）

從左到右依次是：α－BHC（15.56m in）、β－BHC（16.75min）、γ－BHC（17.02min）、PCNB（17.24m in）、δ－BHC（18.07m in）、PP’－DDE（25.77m in）、PP’－DDD（27.72min）、OP’－DDT（27.91min）、PP’－DDT（29.91min）。

2.2 重復性實驗

精密稱量常德碎米樣本9份，按照1.3.2項下制備樣品，依法測定，將峰面積帶入回歸方程計算得，PCNB的平均質(zhì)量分數(shù)為0.1147mg/kg，RSD為1.02%（最佳是小于1%[6]，該實驗結果約等于1%），方法的重復性好。

2.3 穩(wěn)定性實驗

取岳陽碎米樣品溶液1μL，分別在0、2、4、6h依法連續(xù)測定3次，以質(zhì)量濃度計算α－BHC、β－BHC、γ－BHC、δ－BHC、PP’－DDE、PP’－DDD的RSD分別為0.8%、0.5%、1.1%、0.3%、0.6%、0.8%。均小于5%，說明樣品在制備6h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 檢出限測定

配制質(zhì)量濃度為0.1μg/L的混合標準品溶液進樣，以3倍的噪聲作為儀器的最低檢出限，分別測得九種有機氯的檢出限（表1），本實驗所檢測的9種有機氯農(nóng)藥的檢測限均低于1μg/L，因此實驗結果表明檢測器靈敏度良好。

表1 9種有機氯的儀器檢測限和方法檢測限Table 1 The device determination limitand method determination limit of 9 organochlorine pesticides

2.5 線性關系考察

分別精密吸取1.3.1項下混合標準儲備液各1μL進樣，以峰面積為縱坐標，質(zhì)量濃度為橫坐標（μg/L），計算回歸方程見表2。結果表明，各被測組分在0~ 250μg/L范圍內(nèi)峰面積和質(zhì)量濃度呈良好的線性關系。

表2 9種有機氯農(nóng)藥回歸曲線Table 2 Regression equation of 9 organochlorine pesticides

2.6 回收率實驗

取常德碎米6份，每份取2g，精密稱定。分別準確加入質(zhì)量濃度為250μg/L的混合對照品溶液0.1、0.5、0.9m L，混合后揮干溶劑。按1.3.2項下方法制備回收率供試品樣品溶液，每份依法測定3次，計算回收率見表3。

表3 回收率測定結果（RSD，%）Table3 Recovery resultsof9 organochlorine pesticides（RSD，%）

通過表3可知，不同農(nóng)藥量條件下，9種不同有機氯農(nóng)藥的回收率和RSD滿足農(nóng)藥殘留檢測的精密度的要求。當檢測農(nóng)藥的含量在25～225ng或檢測濃度在5~250μg/L時，回收率處于86.83%～118.33%間，RSD在0.30%～2.32%之間，符合實際檢測的要求。

2.7 樣品的測定

準確稱取各地區(qū)大米樣品，按照1.3.2項下制備樣品溶液，依法進行測定，按外標法以峰面積計算含量見表4。

根據(jù)中國農(nóng)藥殘留量國家標準規(guī)定：糧食農(nóng)產(chǎn)品中滴滴涕、六六六、五氯硝基苯的農(nóng)藥殘留最高限量分別是0.2、0.3、0.1mg/kg[7]。從表4可知，只有常德的農(nóng)殘超標，其PCNB含量為0.1147mg/kg，微大于0.1mg/kg。圖2為常德地區(qū)碎米中有機氯農(nóng)藥檢測的色譜圖。

圖2 常德碎米有機氯農(nóng)藥檢測色譜圖Fig.2 Gas chromatogram of organochlorine pesticides in rice from Changde

3 結論與討論

從方法學上可以看出：首先我們采用的提取方法是根據(jù)藥典改良的。與藥典方法相比，我們的方法更簡單快捷、節(jié)省時間、節(jié)省試劑。與近年來發(fā)展的樣品前處理技術相比，該方法操作簡單、成本較低[8-11]。其次，我們建立的方法中，九種有機氯的保留時間較短，比文獻中的保留時間縮短了近一半[12]，這不僅可以節(jié)省大量的操作時間，同時還可以減少儀器的損耗；最后，我們建立的方法回收率高、重現(xiàn)性好、檢測靈敏度高、可用于大批量的樣品檢測，為有機氯農(nóng)藥殘留的檢測提供了一個可靠的方法。

從檢測結果來看：岳陽和益陽碎米中的有機氯農(nóng)藥殘留種類較多，主要是六六六和滴滴涕兩類，但是殘留量并沒有超標，因此可以得知，兩地農(nóng)民對這兩種農(nóng)藥的使用較多，今后應該在量上嚴格控制，否則就要超出安全范圍；常德碎米樣品只有PCNB一種殘留，但其殘留量超過了安全范圍，因此我們可以得知該地的農(nóng)民用藥比較單一，但是用量卻比較大，可能存在濫用的現(xiàn)象；株洲、郴州和長沙檢測結果較好，僅有一種農(nóng)藥的微量殘留；益陽的碎米農(nóng)藥殘留種類較多，含量較少。從以上結果可以看出，各地用藥情況參差不齊，但總的來講六六六和滴滴涕兩大類農(nóng)藥仍是使用較多的，因此，以后有關部門應該加強對這種農(nóng)藥的限制使用，以確保糧食安全。

表4 大米樣品中有機氯檢測結果（mg/kg）Table 4 Organochlorine determination results in the rice samples（mg/kg）

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Determ ination of organochlorine pesticides residues in broken rice for pharmaceuticalglucose by gas chromatography

ZHANG Xiu-zhen1，GONG Yong-fu2，YANG Man-hua2，REN Zhen-m ian2，XIAO Yi-yun1，WEN Jia-gen1，XIAO Shao-xiang3，CHEN Yu-xiang1，2，*
（1.School of Pharmacy，Central South University，Changsha 410008，China；2.Wanfu Biotechnology（Hunan）Agriculture Development Co.，Ltd.，Taoyuan 410218，China；3.Hunan Vocational College of Technology，Changsha 410004，China）

Organochlorine pesticides residues in rice in several Hunan d istrict was exam ined so as to p rovide security for p roduc tion of pharmaceuticalg lucose which wasmade w ith b roken rice and a reasonab le reference for the app lication of organic pesticides.The mod ified method of Chinese pharmacopoeia was used to extract and p repare the samp les which were analyzed by gas chromatography w ith SE-54 fused silica cap illary column（3.0m×0.25mm×0.32mm）and the contents ofnine organic chlorine pesticide were separated by column tem perature p rogram and detected by electronic cap ture detector，calculated by external standard.The results showed that organic chlorine pesticides in rice were determ ined and found in all sam p les.This method was fast，sim p le and accurate that it could be used to determ ine organic chlorine pesticide in rice.

organic chlorine pesticide residues；rice；gas chromatog raphy

TS210.1

A

1002-0306（2012）14-0093-04

2011－11－25 *通訊聯(lián)系人

張秀珍（1987-），女，碩士研究生，研究方向：新藥新制劑。