蔣法成 陳樹霞 蔣鎖俊 孫 浩 范 磊

（1江蘇省淮安市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，江蘇省淮安市 223001；2江蘇省淮安市清浦區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，江蘇省淮安市 223002）

日本乙型腦炎（Japanese B Encephalitis，JE）簡稱乙腦，是由日本乙型 腦 炎 病 毒 （Japanese B Encephalitis virus，JEV）引起的一種重要的人獸共患傳染病。乙腦病毒可致懷孕母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎，可致公豬睪丸炎[1]，可致仔豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。

為了解淮安豬場乙腦的免疫狀況及野毒感染情況，為乙腦綜合防控提供科學(xué)依據(jù)，2012年5月筆者應(yīng)用ELISA試驗(yàn)對全市12個(gè)規(guī)模豬場共246份血清樣品進(jìn)行了抗體監(jiān)測。現(xiàn)將監(jiān)測情況報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 血清樣品

被檢豬血清樣品共246份，于2012年3月采自淮安市各縣區(qū)的12個(gè)規(guī)模豬場，樣品有關(guān)信息參見表1、表2。

1.2 檢測試劑和儀器

1.2.1 試劑

豬乙腦酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ELISA）試劑盒為武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號為120101，購自江蘇力通生物技術(shù)有限公司。

1.2.2 儀器

酶標(biāo)儀：Rayto，RT－6000，深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司生產(chǎn)；移液器：Biohit，芬蘭百得實(shí)驗(yàn)儀器 （蘇州）有限公司生產(chǎn)；洗板機(jī)：KHB，ST－36WT，上?？迫A實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有限公司生產(chǎn)。

1.3 檢測方法

按試劑盒說明書進(jìn)行。 主要步驟如下： （1）1∶40的體積稀釋待檢血清（195μL樣品稀釋液中加入 5μL待檢血清）、1∶40的體積分別稀釋陽性對照和陰性對照血清 （234μL樣品稀釋液中加入 6μL對照血清）；（2） 取抗原包被板，將稀釋好的待檢血清和對照血清各取 100μL加入到抗原包被板，置37℃溫育 30分鐘；（3）洗板，加入稀釋好的洗滌液200μL/孔，靜置 3分鐘，拍干，共洗滌5次；（4）每孔加酶標(biāo)二抗 100μL， 置 37℃溫育 30分鐘； 洗滌 5次，方法同上；（5）每孔先加底物A 液 50μL、 再 加 底物 B 液 50μL 混勻，室溫避光顯色 10分鐘；（6）每孔加終止液 50μL，10分鐘內(nèi)用 630nm波長測定結(jié)果。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

試驗(yàn)成立的條件是陽性對照孔平均OD630nm值≥0.6，陰性對照孔平均OD630nm值＜0.3。 當(dāng)樣品 OD630nm值＞0.32時(shí)為豬乙腦抗體陽性，樣品OD630nm值≤0.32時(shí)為陰性。

2 檢測結(jié)果

2.1 淮安市豬場乙腦抗體水平監(jiān)測總體情況

淮安市豬場乙腦抗體水平監(jiān)測總體情況見表1。

2.2 不同豬場乙腦抗體水平情況

不同豬場乙腦抗體血清陽性率的檢測結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 監(jiān)測結(jié)果分析

淮安市12個(gè)規(guī)模豬場的不同豬群的乙腦抗體監(jiān)測結(jié)果表明，在246份血清樣品的檢測中，免疫的母豬血清陽性率平均為 70.59% （表1），其中免疫較好的種豬場抗體陽性率為100% （表2），具備整齊的免疫水平。漣宏豬場的經(jīng)產(chǎn)母豬抗體陽性率只有20%，經(jīng)調(diào)查該場截止采樣時(shí)與上次免疫時(shí)間已有12個(gè)月。未免疫豬群血清陽性率平均為21.83% （表1）。免疫豬群與未免疫豬群相比，血清陽性率平均值差異極顯著 （P＜0.01）。

未免疫豬群之間抗體陽性率參差不齊，由最低為0到最高的100%不等（表2）。說明各豬場由于種豬來源不同、飼養(yǎng)環(huán)境不同、管理水平不同等原因，導(dǎo)致豬群乙腦感染率不同。

由表1可以看出未免疫的后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬其陽性率分別為35.09%和40%，而育肥豬和仔豬分別為18.89%和12.5%，母豬和育肥豬及仔豬的JEV抗體陽性率差異極顯著 （P＜0.01）。

3.2 感染原因分析

豬、馬、牛、羊、家禽和野鳥都可感染日本乙型腦炎病毒，馬最易發(fā)病，人次之，其它家畜多為隱性感染，這些帶毒動(dòng)物在病毒血癥階段都可成為傳染源。

乙腦主要通過蚊蟲叮咬而傳播，庫蚊 （尤以三帶喙庫蚊）、伊蚊和按蚊都可成為該病的傳播媒介。病毒能在蚊子體內(nèi)繁殖和越冬，并可經(jīng)卵傳代，帶毒越冬的蚊子能成為次年感染人畜的傳染源，因此，蚊不僅是傳染媒介，也是病毒的儲(chǔ)存宿主[1]。

該病有明顯的季節(jié)性，主要在夏秋季節(jié)流行，與蚊蟲的孳生有關(guān)。豬是JEV的重要保毒動(dòng)物，而感染JEV的蚊子可將該病傳給人。因此有效控制豬群中發(fā)生JE，具有重要的公共衛(wèi)生意義。

3.3 防控對策

為了控制JEV的區(qū)域流行，應(yīng)加強(qiáng)豬乙腦的免疫接種，并且進(jìn)行有效的滅蚊活動(dòng)。尤其對于曾經(jīng)發(fā)生過乙腦或JEV隱性感染較嚴(yán)重的豬場 （包括種豬場和商品豬場），應(yīng)將乙腦疫苗納入常規(guī)免疫程序，以防止暴發(fā)豬乙腦，并可有效控制該病在人群中的流行[2,3]。在乙腦流行地區(qū)，應(yīng)對豬場的工作人員進(jìn)行乙腦疫苗接種，以保護(hù)易感人群的安全 [4]。

對規(guī)模豬場以及散養(yǎng)戶定期開展豬乙腦抗體監(jiān)測，當(dāng)生豬抗體水平較低時(shí)，應(yīng)及時(shí)強(qiáng)化免疫。加強(qiáng)養(yǎng)殖場的規(guī)范化建設(shè)和管理，控制乙腦流行區(qū)的畜禽運(yùn)往非流行區(qū)。蚊蟲是本病的主要傳播媒介，防蚊滅蚊是預(yù)防乙腦的有效措施。堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，必須要引進(jìn)種豬時(shí)應(yīng)加強(qiáng)檢疫，病原學(xué)檢測 （如PCR）為陰性方可引進(jìn)。

表1 淮安豬場乙型腦炎監(jiān)測總體情況

表2 不同豬場乙腦抗體血清陽性率的檢測結(jié)果

[1]蔡寶祥主編.家畜傳染病學(xué).北京：農(nóng)業(yè)出版社，1980：165－170.

[2]靳興軍，韓磊，紀(jì)蔚紅，等.北京市豬乙型腦炎血清流行病學(xué)調(diào)查.中國獸醫(yī)雜志，2008，44（8）：51－52.

[3]楊麗君，鄧治邦，曹庸，等.湘西發(fā)生豬日本乙型腦炎. 中國獸醫(yī)雜志，2003，39（1）：32－33.

[4]Yamanaka A,Mulyatno K C,Susilowati H,et al.Prevalence of Antibodies to Japanese Encephalitis Virus among Pigs in Bali and East Java，Indonesia，2008.Japanese journal of infectious diseases，2010，63（1）：58－60.