蘇 琳, 陳慕雁, 王天明, 劉 進(jìn), 趙 業(yè), 楊紅生

(1.中國科學(xué)院 海洋研究所 海洋生態(tài)與環(huán)境科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 山東 青島 266071; 2.中國科學(xué)院 研究生院,北京 100049; 3. 中國海洋大學(xué), 山東 青島 266003)

關(guān)于刺參(Apostichopus japonicus)消化道組織學(xué)和生理特性的研究已有報(bào)道[1-5]。正常情況下, 刺參的消化道分為口、咽、食道、胃、前腸、后腸和肛門等部分[6], 消化道基本結(jié)構(gòu)由內(nèi)到外依次分為黏膜上皮、黏膜下層、肌肉層和外膜4層[1]。進(jìn)入夏眠后, 刺參消化道基本結(jié)構(gòu)不發(fā)生變化, 但是消化道發(fā)生退化, 消化道整體變細(xì)、變短, 各部分限界變得不明顯, 并且各組織層變薄[2-3]。目前對(duì)于刺參消化道組織學(xué)的研究主要是通過光鏡或電鏡切片的觀察來進(jìn)行定性的描述[1-3], 而沒有對(duì)各組織層厚度進(jìn)行定量分析。

在刺參夏眠分期方面, 李潤玲等[2]提出根據(jù)刺參夏眠程度的不同, 可分為夏眠初期、中期和末期,但是沒有給出具體的分期標(biāo)準(zhǔn)。李霞等[3]根據(jù)刺參消化道和呼吸樹的外部形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)變化特點(diǎn), 按照退化程度由淺到深的順序, 將夏眠退化過程科學(xué)地劃分為早、中、晚3個(gè)階段。

為了更為全面地界定刺參由正常到衰退、再由衰退到恢復(fù)的整個(gè)夏眠過程中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn), 并且更加客觀地描述刺參的夏眠程度, 本實(shí)驗(yàn)將刺參的夏眠細(xì)分為夏眠初期、深度夏眠期、夏眠解除期 3個(gè)階段, 并對(duì)刺參夏眠期間前腸各組織層厚度進(jìn)行了定量分析。本研究旨在豐富刺參夏眠期間消化道組織學(xué)的基礎(chǔ)理論, 為進(jìn)一步研究刺參夏眠過程提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及取樣

按照下列標(biāo)準(zhǔn)將刺參夏眠階段分為 3個(gè)時(shí)期:夏眠初期的判斷標(biāo)準(zhǔn)為刺參活動(dòng)及攝食量明顯減少;深度夏眠期的判斷標(biāo)準(zhǔn)為絕大多數(shù)刺參躲進(jìn)石縫不動(dòng)不食, 解剖后可發(fā)現(xiàn)消化道最粗處不足 1 mm[7];夏眠解除期的判斷標(biāo)準(zhǔn)為刺參開始恢復(fù)活動(dòng)與攝食?；顒?dòng)量大、正常攝食的刺參為非夏眠期刺參, 作為對(duì)照組。

實(shí)驗(yàn)刺參取自山東省膠南市刺參養(yǎng)殖池, 按照取樣時(shí)間及取樣時(shí)刺參腸道的退化程度分為夏眠初期、深度夏眠期、夏眠解除期和非夏眠期刺參, 4個(gè)時(shí)期的樣品分別于2011年6月24日、8月25日、10月9日和10月28日采集, 海水溫度分別為24、29、20、15℃ 每次取 10 頭刺參, 體質(zhì)量約 80～100 g。

1.2 光鏡樣品處理及觀察

采捕獲得的刺參進(jìn)行現(xiàn)場解剖, 截取前腸, 迅速放入 Bouin液固定, 固定 24 h后, 經(jīng)梯度酒精脫水、透明、浸蠟等過程, 再用石蠟包埋組織, 用切片機(jī)連續(xù)切片, 切片厚度為6 μm, 再經(jīng)黏片、烤片、脫蠟、復(fù)水、H.E染色、封片等過程, 制成石蠟切片。用 Olympus顯微鏡觀察測量并拍照, 每個(gè)刺參樣品隨機(jī)選取3張切片, 每張切片隨機(jī)選取4個(gè)位點(diǎn)測量各組織層的厚度及壁厚, 并隨機(jī)測量直徑4次。

1.3 數(shù)據(jù)分析

計(jì)算每個(gè)刺參樣品各數(shù)據(jù)的平均值, 以及各層占腸壁總厚度的百分比, 計(jì)算每個(gè)時(shí)期樣品的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差, 并用統(tǒng)計(jì)軟件(SPSS Statistics 17.0)進(jìn)行單因素方差分析, 分析各時(shí)期樣品之間的差異顯著性,P＜0.05為差異顯著,P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 夏眠不同階段刺參前腸直徑和前腸壁厚度變化

深度夏眠期刺參前腸的直徑顯著小于對(duì)照組(P＜0.01), 其他兩組與對(duì)照組無顯著差異(P＞0.05)。夏眠各時(shí)期前腸壁厚與對(duì)照組之間均無顯著差異(P＞0.05), 夏眠解除期前腸壁厚顯著大于夏眠初期(P＜0.05)和深度夏眠期(P＜0.01)(圖 1, 圖 2)。

圖1 夏眠不同時(shí)期刺參前腸直徑和腸壁厚度(μm)Fig. 1 Diameter and thickness of anterior intestine at different stages of aestivating A. japonicus(μm)

圖2 夏眠不同時(shí)期刺參前腸的組織學(xué)變化Fig. 2 The histological changes of anterior intestine at different stages of aestivating A. japonicus

2.2 夏眠不同階段刺參前腸各組織層厚度的比較

夏眠初期和深度夏眠期刺參前腸黏膜上皮的厚度顯著小于對(duì)照組(P＜0.01); 黏膜下層在各時(shí)期之間無顯著差異(P＞0.05); 深度夏眠期肌肉層的厚度顯著小于對(duì)照組(P＜0.01), 其他時(shí)期與對(duì)照組相比無顯著變化(P＞0.05); 夏眠初期外膜的厚度顯著小于對(duì)照組(P＜0.05), 之后逐步恢復(fù)到正常狀態(tài)(圖3)。

2.3 夏眠不同階段刺參前腸各組織層厚度占前腸壁總厚度的比例

夏眠初期黏膜上皮厚度占腸壁總厚度的比例顯著小于對(duì)照組(P＜0.05), 黏膜下層所占比例則顯著大于對(duì)照組(P＜0.01); 深度夏眠期肌肉層所占比例顯著小于對(duì)照組(P＜0.05), 同時(shí)也顯著小于夏眠初期和夏眠解除期(P＜0.01); 夏眠初期外膜厚度所占比例也顯著小于對(duì)照組(P＜0.05), 在深度夏眠期和夏眠解除期與對(duì)照組無顯著差異(P＞0.05)(表1)。

圖3 夏眠不同時(shí)期刺參前腸各組織層厚度(μm)Fig. 3 Tissue layers thickness of anterior intestine at different stages of aestivating A. japonicus (μm)

表1 夏眠不同時(shí)期刺參前腸各組織層厚度占前腸壁總厚度的比例(%)Tab. 1 The proportion of thickness of different layers in anterior intestine wall at different stages of aestivating A. japonicus (%)

3 討論

3.1 刺參夏眠不同時(shí)期劃分

本研究主要以水溫、刺參的攝食、活動(dòng)和腸道內(nèi)容物的多少為標(biāo)準(zhǔn), 將刺參夏眠階段分為 3個(gè)時(shí)期: 夏眠初期、深度夏眠期和夏眠解除期。當(dāng)夏季水溫升至20～25°C時(shí), 刺參進(jìn)入夏眠初期, 攝食量和活動(dòng)量明顯減少, 腸道開始退化, 腸道內(nèi)容物變少; 當(dāng)水溫接近 30°C時(shí), 刺參進(jìn)入深度夏眠期, 停止攝食與活動(dòng), 躲進(jìn)石縫進(jìn)入休眠狀態(tài), 消化道發(fā)生嚴(yán)重退化, 各部分已沒有明顯的分界, 消化道最粗處不足 1 mm[7], 并且沒有內(nèi)容物; 當(dāng)溫度下降到20～25°C時(shí), 刺參恢復(fù)活動(dòng)與攝食, 消化道也逐步恢復(fù)到正常狀態(tài), 腸道內(nèi)容物開始增多, 此時(shí)為夏眠解除期。本研究對(duì)刺參夏眠的分期和李霞等[3]稍有不同, 李霞等根據(jù)刺參消化道和呼吸樹的外部形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)變化特點(diǎn), 按照退化程度由淺到深的順序,將夏眠退化過程劃分為早、中、晚3個(gè)階段, 而本實(shí)驗(yàn)將刺參的夏眠周期從進(jìn)入夏眠到結(jié)束夏眠進(jìn)行了更細(xì)致的分區(qū), 開始由正常進(jìn)入夏眠的時(shí)期定為夏眠初期, 夏眠最強(qiáng)烈的時(shí)期為深度夏眠期, 由夏眠恢復(fù)到正常狀態(tài)定義為夏眠解除期。這樣的劃分不僅涵蓋了刺參由正常狀態(tài)進(jìn)入夏眠的過程, 還包括了刺參由夏眠狀態(tài)恢復(fù)到正常狀態(tài)的過程, 將刺參夏眠的幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)均包含在內(nèi)。而李潤玲[2]等的研究則沒有對(duì)夏眠的分期進(jìn)行詳細(xì)的界定。

3.2 刺參夏眠不同時(shí)期前腸各組織層厚度定量分析

刺參進(jìn)入夏眠后消化道的基本結(jié)構(gòu)沒有發(fā)生變化, 消化道變細(xì), 黏膜上皮和肌肉層的厚度在夏眠期間比非夏眠期顯著變薄, 這與李潤玲[2]等的研究結(jié)果一致, 并且黏膜上皮和肌肉層的厚度占整個(gè)腸壁厚度的比例在夏眠期間也比非夏眠期顯著小, 分析原因可能是黏膜上皮和肌肉層在食物的消化和吸收中發(fā)揮著十分重要的作用, 在刺參進(jìn)入夏眠以后,消化道的消化與吸收功能發(fā)生大幅度的減弱, 負(fù)責(zé)消化與吸收功能的組織層也會(huì)隨之變薄。夏眠初期消化道外膜厚度與對(duì)照組相比顯著變薄, 消化道外膜厚度占整個(gè)腸壁厚度的比例也比對(duì)照組顯著變小,深度夏眠期, 外膜厚度沒有明顯變化, 到夏眠解除期, 外膜厚度略為增厚, 但是沒有顯著差異; 整個(gè)夏眠過程中呈現(xiàn)出先變薄后增厚的趨勢。李潤玲等研究發(fā)現(xiàn)刺參夏眠后食道的外膜略為增厚而腸道的外膜則無明顯變化。這與我們的研究結(jié)果略有差異, 可能是因?yàn)橄拿邥r(shí)期不同, 消化道的退化程度也不同,而李潤玲等沒有對(duì)夏眠過程中消化道退化進(jìn)行具體的分期研究。李潤玲[2]等的研究還認(rèn)為, 夏眠時(shí)刺參消化道的黏膜下層變薄, 本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示刺參夏眠各階段前腸黏膜下層厚度與對(duì)照組無明顯差異(P＞0.05), 但是, 夏眠初期刺參前腸黏膜下層厚度占腸壁厚度的比例比對(duì)照組顯著變大(P＜0.01), 這可能是由于黏膜上皮和外膜厚度在夏眠初期比對(duì)照組變小, 因此黏膜下層厚度占腸壁厚度的比例會(huì)相對(duì)變大。

刺參消化道在夏眠期間表現(xiàn)出明顯的退化現(xiàn)象,本研究豐富了刺參夏眠期間消化道組織學(xué)的基礎(chǔ)理論, 然而對(duì)刺參夏眠期間消化道退化機(jī)制的研究有待進(jìn)一步深入。

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