王自蕊 王曉芳 朱長生 周秋白

黃鱔（Monopterus albus），又名鱔魚、長魚等，屬合鰓目，合鰓科，黃鱔屬，是我國重要的淡水經(jīng)濟魚類之一，主要分布在中國、朝鮮、日本等國家。黃鱔肉質細嫩、味道鮮美、營養(yǎng)價值高，含肉率高達65%以上[1]。黃鱔不僅有重要的食用價值，而且還具有良好的藥用價值，近年來，各地廣泛開展了黃鱔的人工養(yǎng)殖，取得了較好的效果[2]。目前，有關黃鱔幼體的研究，大多集中在形態(tài)學方面。楊代勤等(1999)用人工授精方法對黃鱔胚胎發(fā)育和魚苗培育進行了初步探索[3]。周秋白等(2003)首次用顯微攝影記錄了黃鱔的胚胎期及胚后發(fā)育的過程[4]。評估機體生長發(fā)育狀況和營養(yǎng)代謝的更好辦法則是對機體生化成分變化的測定。目前國內(nèi)有不少學者對部分魚類不同生長階段進行了機體生化成分的測定[5-6]，但在受精卵孵化期間的機體營養(yǎng)成分變化方面報道較少。

許多魚類的仔魚在由內(nèi)源性營養(yǎng)轉換為外源性營養(yǎng)時往往會出現(xiàn)大量死亡，死亡原因錯綜復雜，但能否及時提供適口性餌料是其中一個重要因素[7]。在魚類胚胎發(fā)育階段和仔魚發(fā)育早期，營養(yǎng)來源于卵黃所儲存的內(nèi)源性物質。一般而言，魚卵含有仔魚在卵黃營養(yǎng)階段所需的所有營養(yǎng)，可以在仔魚攝食外源性營養(yǎng)之前，保證內(nèi)環(huán)境平衡和發(fā)育[8]。不同種類魚卵的生化組成各不相同，其主要成分（蛋白質、脂肪和碳水化合物）的消耗順序在質和量上都有區(qū)別[9]。因此，本試驗以黃鱔為對象，研究受精胚胎發(fā)育期和仔魚期在饑餓狀態(tài)下機體主要營養(yǎng)成分的變化，為預測幼魚的成活率及了解其開口仔魚對蛋白質和脂肪的需求奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料來源

試驗所用受精卵來自江西農(nóng)業(yè)大學黃鱔繁殖試驗基地。受精卵置直徑14.8 cm的培養(yǎng)皿內(nèi)加曝氣自然水，室溫（25～30℃）靜水孵化到幼魚階段，定期換水，未喂食。

1.2 檢測指標及方法

從卵受精當天開始，每2 d（仔魚階段每5 d）取樣1次，每次取3份樣品，每份樣品40粒卵(仔魚)，用于測定水分、蛋白質和脂肪等的含量。干物質和粗蛋白質的含量測定分別參照國家標準GB 6435—86(1996)和GB/T 6432—94（1996）推薦的方法測定。脂肪含量測定采用Folch提取脂質法：每份取30顆卵或仔魚，搗碎樣品后，加1 ml氯仿-甲醇（1：2）攪拌搖勻后靜置24 h，用混合液潤洗濾紙和漏斗并抽提2～3次，倒入試管后加氯化鎂，振蕩1 min后靜置2～3 h，待清晰分層后移走上層甲醇，放入真空干燥箱中干燥，15 d左右，至水分蒸發(fā)完全，稱重。

1.3 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)以“平均值±標準誤”表示，采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析。統(tǒng)計結果的顯著性水平為P＜0.05。

2 結果

2.1 濕重和干重及含水量(見表1)

由表1可知，黃鱔機體濕重在胚胎發(fā)育期和仔魚發(fā)育期變化都不顯著(P＞0.05)，但出膜前后變化顯著(P＜0.05)，出膜前機體濕重為29.93 mg，出膜后第1 d濕重為17.52 mg，相比出膜前濕重含量下降了41%(P＜0.05)。機體干重在整個胚胎發(fā)育期差異不顯著，但在出膜后第10 d開始，機體干重顯著下降(P＜0.05)。含水量在受精卵的整個胚胎發(fā)育階段差異不顯著，保持在83.28%～83.71%之間。但在出膜前后卻有顯著差異（P＜0.05），出膜后含水量突然下降，之后至第10 d開始慢慢恢復到出膜前的水平。

表1 黃鱔胚胎及仔魚機體的濕重、干重和含水量

2.2 蛋白質和脂肪及占干濕重比(見表2)

表2 黃鱔胚胎及仔魚機體蛋白質和脂肪的含量及占濕重比

由表2可知，蛋白質的質量在黃鱔受精卵的整個發(fā)育期間差異不顯著(P＞0.05)，但是呈下降趨勢。仔魚發(fā)育到20 d時，相比胚胎發(fā)育初期，蛋白質含量下降了28%。蛋白質占濕重的百分含量在胚胎發(fā)育期和仔魚發(fā)育期第 10、15、20 d 之間差異都不顯著(P＞0.05)，但與仔魚發(fā)育期1 d和5 d相比差異顯著(P＜0.05)，并且仔魚發(fā)育期第1 d和第5 d之間存在顯著差異(P＜0.05)。

每顆卵粒蛋白質的質量在胚胎發(fā)育期為3.5 mg左右，仔魚孵出后，蛋白質在出膜1 d時質量較大，1～10 d呈下降趨勢，在出膜10 d時降到最低水平，隨后保持基本穩(wěn)定（P＞0.05）。脂肪質量在胚胎發(fā)育期基本不變（P＞0.05），仔魚發(fā)育階段明顯下降，在出膜10 d后下降量顯著高于出膜1 d仔魚（P＜0.05）。脂肪的質量在整個胚胎發(fā)育期無顯著變化(P＞0.05)，但與仔魚發(fā)育期第 10、15、20 d 相比存在顯著差異(P＜0.05)。仔魚發(fā)育到第20 d時，相比胚胎發(fā)育初期，脂肪含量下降了57.8%。脂肪占濕重比整個脂肪發(fā)育期差異不顯著，但在出膜后，脂肪占濕重比顯著上升(P＜0.05)，之后隨時間增加而呈下降趨勢。而對于占濕重比例，蛋白質占濕重比和脂肪占濕重比兩者在出膜時都有一迅速上升階段。

由表2可知，蛋白質占干重的百分含量在整個發(fā)育期間差異不顯著（P＞0.05）。除去水分，蛋白質的變化范圍很小，在胚胎發(fā)育期蛋白質占干重比從第3 d開始維持在70%左右。脂肪占干重的百分含量在胚胎發(fā)育初期含量較低，到第3 d時有明顯增加（P＜0.05），之后保持穩(wěn)定。仔魚發(fā)育初期，出膜1 d相比出膜前，脂肪占干重比顯著下降(P＜0.05)，但出膜后第5 d，脂肪占干重比又明顯增加(P＜0.05)，之后開始呈下降趨勢，但差異不顯著(P＞0.05)。

3 討論

卵黃囊期是魚類早期發(fā)育中的一個重要階段，是魚類由內(nèi)源性營養(yǎng)向外源性營養(yǎng)轉化的一個關鍵時期[10]。從更深更廣的角度來研究卵和幼體營養(yǎng)成分的變化，可間接了解能量轉移和利用過程，這對滿足幼魚營養(yǎng)需求，提高其成活率有很大理論指導意義。

3.1 黃鱔胚胎發(fā)育期和仔魚發(fā)育過程中機體水分含量的變化

黃鱔胚胎剛受精時，卵為淺黃色或橙黃色的正圓形卵，沉性，比一般魚類的大。外層包有無色半透明的卵膜，卵黃均勻[11]。受精卵在發(fā)育階段，水分變化不大，但在仔魚發(fā)育期從第1 d開始，含水量急劇下降，由胚胎期第1 d的83.28%降到仔魚出膜第1 d的71.28%，之后緩慢回升。說明仔魚孵化過程中卵膜破裂時，卵膜細胞內(nèi)非胚胎水分流出導致水分大幅減少。而仔魚饑餓期間，細胞外間隙增加，細胞體積縮小，含水量百分比有所提高，而實際含水量下降[12]。當水產(chǎn)動物處于饑餓狀態(tài)時，貯存于體內(nèi)的脂肪被水解成甘油和游離脂肪酸，并釋放入血液被運送全身各組織氧化利用。脂肪酸是機體的主要功能物質，在有氧條件下徹底氧化為水和二氧化碳，并釋放大量的能量，以ATP的形式供機體利用[13]。因此，隨著動物能源物質的不斷消耗，動物體的含水量會逐漸上升，這也許是導致仔魚后期含水量上升的重要因素。機體各種營養(yǎng)成分的變化處于動態(tài)平衡，而水分是維持機體正常新陳代謝的必要條件，所以仔魚后期水分含量會逐漸升高直到與初始含水量相差不大。若不考慮水分的影響，蛋白質和脂肪總體上變化范圍較小，說明水分在營養(yǎng)成分的變化過程中起主要作用。

依據(jù)魚卵的比重和水的比重關系，可以把魚類的卵分為浮性卵和沉性卵。殷名稱（1993）指出，魚類卵的浮性主要取決于卵（黃）內(nèi)水分的含量，脂肪僅是營養(yǎng)物質存在的一種形式，浮性卵的含水量達90%～92%，而典型沉性卵含水量為60%～75%[14]。由本試驗可知，黃鱔受精卵的含水量在整個發(fā)育期間保持在83.28%～83.71%，介于典型沉性卵和浮性卵之間。

3.2 黃鱔胚胎發(fā)育期和仔魚發(fā)育過程中機體蛋白質和脂肪含量的變化

黃鱔胚胎發(fā)育期的蛋白質含量有不同程度的上升，這可歸因于胚胎發(fā)育期隨著卵裂的進行，細胞數(shù)目增多，組成各個細胞的細胞膜的脂肪和蛋白質的含量也相應增加[14]。熊傳喜（1995）對建鯉胚胎和仔魚機體蛋白質和脂肪含量的測定結果顯示，受精卵發(fā)育階段，蛋白質呈現(xiàn)明顯下降趨勢，而脂肪含量基本不變；仔魚發(fā)育初期，脂肪和蛋白質含量均下降[5]。但本試驗測定發(fā)現(xiàn)，胚胎發(fā)育期蛋白質和脂肪含量無顯著變化。但仔魚孵出后，蛋白質和脂肪含量都有不同程度的下降，仔魚發(fā)育到20 d時，蛋白質和脂肪含量相比胚胎發(fā)育初期分別下降了28%和57.8%。在初孵仔魚階段，蛋白質和脂肪占濕重比均呈現(xiàn)下降趨勢，但蛋白質含量占干重比上升，脂肪占干重比下降；仔魚發(fā)育期5 d之后（卵黃囊消失）蛋白質質量保持穩(wěn)定，脂肪質量呈下降趨勢。試驗還發(fā)現(xiàn)仔魚發(fā)育期間，脂肪和蛋白質均消耗很大，這可能是由于仔魚發(fā)育過程中生命活動和運動的能量消耗。脂肪和蛋白質的這種變化規(guī)律以及它們間的能量代謝，提示在投喂開口仔魚時，應考慮餌料中蛋白質和脂肪的含量是否充足，以滿足仔魚正常生長發(fā)育的需要。

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