汪開毓 苗常鴻 黃錦爐 王 均 連 海 吳春艷 牟巧鳳 付 希

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué)魚病研究中心，四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物疫病與人類健康四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，雅安 625014)

根據(jù)水產(chǎn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SC/T 1024—2002《草魚配合飼料》，草魚飼料中粗脂肪含量不應(yīng)小于4%。但是，草魚是一種對(duì)脂肪需求量較低的植食性魚類[1-2]。有研究表明，當(dāng)給草魚投喂脂肪含量為8%的飼料8周后，草魚則出現(xiàn)采食量下降、生長發(fā)育受阻以及血脂升高的現(xiàn)象[3-4]。草魚長期攝入高脂飼料后可導(dǎo)致肝臟脂肪代謝機(jī)能紊亂，其病理上可表現(xiàn)為肝臟脂肪異常沉積或肝組織不同程度的損傷[5-6]。然而，草魚長期攝入高脂飼料后引發(fā)其肝臟脂肪代謝異常的作用機(jī)制仍不清楚。

作為體內(nèi)脂肪合成的關(guān)鍵酶之一，乙酰輔酶A羧化酶1(ACC1)參與了長鏈脂肪酸從頭合成的第1步反應(yīng)，其活性高低可直接影響肝臟對(duì)脂肪的合成速度，對(duì)調(diào)控肝組織的脂肪代謝活動(dòng)具有重要作用[7-8]。因此，研究和分析攝入高脂飼料后草魚的血清生化指標(biāo)、肝胰臟生化指標(biāo)以及ACC1 mRNA相對(duì)表達(dá)量的變化，有助于闡明草魚脂肪代謝的變化機(jī)制。本試驗(yàn)通過連續(xù)12周投喂草魚高脂飼料，以研究高脂飼料對(duì)草魚主要生化指標(biāo)和ACC1 mRNA表達(dá)的影響，旨在探索草魚對(duì)過量脂肪的代謝調(diào)控機(jī)理，為系統(tǒng)闡明草魚營養(yǎng)代謝性肝病的發(fā)病機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

草魚:購自成都市邛崍水產(chǎn)養(yǎng)殖場。魚油:購自青島永豐生物科技有限公司。大豆油:購自益海嘉里食品營銷有限公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼料配制

試驗(yàn)設(shè)基礎(chǔ)組和高脂組2組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20尾魚?；A(chǔ)組投喂含4.6%脂肪的基礎(chǔ)飼料，高脂組投喂含8.1%脂肪的高脂飼料。試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平見表1，飼料中的脂肪比例設(shè)計(jì)參考 Du等[4]的報(bào)道以及 SC/T 1024—2002《草魚配合飼料》，其他營養(yǎng)物質(zhì)的配比參考NRC(1993)鯉魚的營養(yǎng)需求。

1.3 飼養(yǎng)管理

健康草魚共120尾，平均體重為(15.0±2.4)g，雌雄隨機(jī)，購回后用氯化鈉溶液浸泡消毒，分組后以重復(fù)為單位馴養(yǎng)在80 cm×75 cm×60 cm的水族箱中，養(yǎng)殖水質(zhì)符合GB 11607—89《漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)》。馴養(yǎng)期間各組均按草魚體重的1% ～2%投喂基礎(chǔ)飼料，每天在09:00、12:00、18:00各投喂1次，每2天換水1次，水源為經(jīng)曝氣后的自來水，換水量為原來水量的1/4～1/3，換水的同時(shí)抽去殘餌和糞便。經(jīng)2周馴養(yǎng)后，隨機(jī)抽取6條草魚，剖解，觀察無異常后開始正式試驗(yàn)，正式試驗(yàn)時(shí)試驗(yàn)魚飼喂對(duì)應(yīng)飼料，均按飽食量投喂，試驗(yàn)期為12周。

1.4 樣本采集與生長相關(guān)指標(biāo)的測定

試驗(yàn)開始前草魚禁食1 d，從2組中各抽取6尾草魚，稱重后剝離肝胰臟，稱量肝胰臟重量并記錄。分別在正式試驗(yàn)開始后的第4、8、12周對(duì)2組草魚隨機(jī)采樣，采樣前草魚禁食1 d，每組各取6尾，稱重、尾靜脈采血后剖解并剝離肝胰臟，將肝胰臟稱重，記錄，計(jì)算肝體指數(shù)。

肝體指數(shù)=100×肝胰臟重/魚體重。

1.5 血清相關(guān)指標(biāo)的測定

將采集的血液樣本在室溫下靜置30 min，轉(zhuǎn)入4℃冰箱放置3 h后4 000 r/min離心10 min，抽取上層血清，同組血清合并為1份，4℃存放，用于甘油三酯(TG)、總膽固醇(CHO)含量以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性的檢測，上述指標(biāo)檢測所用試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table1 Composition and nutrient levels of experimental diets(DM basis) %

1.6 肝胰臟相關(guān)指標(biāo)的測定

分別從基礎(chǔ)組和高脂組中各取6尾魚，將同組魚的肝胰臟合并，取其中0.2 g，按試劑盒說明制備10%的組織勻漿，用于肝胰臟丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)活性的檢測，上述指標(biāo)檢測所用試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。試驗(yàn)第12周，各組取部分肝胰臟-80℃凍存，用于半定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測ACC1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。剩余的肝胰臟用福爾馬林溶液固定，制作病理切片后進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE)染色和蘇丹Ⅲ+Ⅳ染色，顯微鏡下觀察肝組織形態(tài)。

1.7 肝胰臟ACC1 mRNA表達(dá)的半定量檢測

1.7.1 引物設(shè)計(jì)

使用Primer 5.0和Oligo 7.0軟件設(shè)計(jì)RT-PCR引物(表2)，引物序列參考GenBank公布的草魚ACC1基因序列(登錄號(hào):HM142590)和β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)基因序列(登錄號(hào):DQ211096)進(jìn)行設(shè)計(jì)，引物由上海生工公司合成。

表2 RT-PCR引物序列Table2 Primer sequences for RT-PCR

1.7.2 總RNA的提取和cDNA第1鏈的合成

采用Trizol試劑(TakaRa公司)，提取第12周基礎(chǔ)組和高脂組的草魚肝胰臟總RNA，1%瓊脂糖凝膠電泳分析總RNA提取效果，紫外分光光度計(jì)測定吸光度(OD)值，計(jì)算RNA濃度以確定上樣量。以提取的總RNA為模板，37℃ 15 min，85℃5 s反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。上述2組的cDNA樣品保存在-20℃冰箱，供RT-PCR使用。

1.7.3 RT-PCR和產(chǎn)物半定量分析

以1.7.2合成的cDNA為模板，RT-PCR擴(kuò)增ACC1基因片段序列。反應(yīng)體系共50 μL。ACC1和β-actin基因的反應(yīng)條件為:94℃預(yù)變性5 min;94℃變性30 s，退火溫度55.3℃(β-actin基因?yàn)?9.4 ℃)30 s，72 ℃ 延伸1 min，共30 個(gè)循環(huán);最后72℃延伸5 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)2%的瓊脂糖凝膠電泳分析，核酸染料(golden view)染色，用Quantity One 462軟件分析條帶豐度，計(jì)算ACC1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

ACC1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量=ACC1表達(dá)豐度/β-actin表達(dá)豐度。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析

所得數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，高脂組和基礎(chǔ)組數(shù)據(jù)進(jìn)行組間差異t檢驗(yàn)，同組3個(gè)取樣時(shí)間的數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和Duncan氏法多重比較，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 草魚肝胰臟組織形態(tài)學(xué)觀察

試驗(yàn)期間，基礎(chǔ)組草魚肝細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞界限清晰，細(xì)胞內(nèi)有少量脂滴(圖1-a、圖1-b)。與基礎(chǔ)組相比，高脂組草魚第4周時(shí)肝細(xì)胞腫脹，部分肝細(xì)胞脂滴增多(圖1-c、圖1-d);第8周時(shí)肝細(xì)胞進(jìn)一步腫脹，肝索排列紊亂，肝細(xì)胞內(nèi)空泡體積增大，部分肝細(xì)胞核染色質(zhì)濃縮、邊移，肝細(xì)胞內(nèi)脂滴進(jìn)一步增多，并相互融合(圖1-e、圖1-f);第12周時(shí)脂肪變性進(jìn)一步加重，肝細(xì)胞輪廓不清，部分肝細(xì)胞壞死(圖1-g、圖1-h)。

2.2 草魚生長情況

由表3可知，試驗(yàn)初始階段，高脂組和基礎(chǔ)組草魚體重差異不顯著(P＞0.05)。試驗(yàn)第4周時(shí)，高脂組草魚體重達(dá)35.12 g，較基礎(chǔ)組顯著升高了9.2%(P＜0.05);試驗(yàn)第8周時(shí)，高脂組和基礎(chǔ)組草魚體重差異不顯著(P＞0.05);試驗(yàn)第12周時(shí)，高脂組草魚體重為98.62 g，較基礎(chǔ)組顯著降低了11.4%(P＜0.05)。

圖1 12周內(nèi)草魚肝胰臟組織形態(tài)學(xué)觀察Fig.1 Histomorphology observation on hepatopancreas of grass carp within 12 weeks(400×)

試驗(yàn)初始階段，高脂組和基礎(chǔ)組草魚肝體指數(shù)差異不顯著(P＞0.05)。試驗(yàn)第4周時(shí)，高脂組草魚肝體指數(shù)為2.51，較基礎(chǔ)組顯著升高了9.1%(P＜0.05);試驗(yàn)第8周時(shí)，高脂組草魚肝體指數(shù)達(dá)2.23，但與基礎(chǔ)組差異不顯著(P＞0.05);試驗(yàn)第12周時(shí)，高脂組草魚肝體指數(shù)為2.00，較基礎(chǔ)組顯著降低了13.5%(P＜0.05)。

表3 12周內(nèi)草魚生長情況Table3 Growth condition of grass carp within 12 weeks

2.3 草魚血清生化指標(biāo)的變化

投喂高脂飼料后，草魚血清TG、CHO含量均在試驗(yàn)第4周有不同程度地上升，并在試驗(yàn)期間保持著上升的趨勢。由表4可知，試驗(yàn)第4周時(shí)，高脂組血清TG含量達(dá)2.12 mmol/L，較基礎(chǔ)組顯著升高了89.0%(P＜0.05)。試驗(yàn)第8、12周的檢測結(jié)果顯示，高脂組血清TG含量分別達(dá)2.57和2.71 mmol/L，較基礎(chǔ)組分別顯著升高了70.2%和99.2%(P＜0.05)。試驗(yàn)期間高脂組草魚血清TG含量隨投喂時(shí)間的延長逐漸上升，且第4周與第12周之間差異達(dá)到顯著水平(P＜0.05)。試驗(yàn)第4周時(shí)，高脂組血清CHO含量已達(dá)5.56 mmol/L，較基礎(chǔ)組極顯著升高了78.0%(P＜0.01);試驗(yàn)第8周時(shí)，高脂組血清CHO含量達(dá)5.96 mmol/L，較基礎(chǔ)組極顯著升高了81.7%(P＜0.01);試驗(yàn)第12周時(shí)，高脂組草魚血清CHO含量高達(dá)6.66 mmol/L，較基礎(chǔ)組極顯著升高了100.6%(P＜0.01)。試驗(yàn)期間高脂組草魚血清CHO含量隨投喂時(shí)間的延長逐漸上升，且3個(gè)時(shí)間點(diǎn)間差異達(dá)到顯著或極顯著水平(P＜0.05或P＜0.01)，試驗(yàn)第8周時(shí)較前1次測定結(jié)果顯著升高了7.2%(P＜0.05)，第12周時(shí)較前1次測定結(jié)果極顯著升高了11.7%(P＜0.01)。

與基礎(chǔ)組相比，高脂組草魚血清AST和ALT活性同樣在試驗(yàn)第4周有不同程度地上升，并在試驗(yàn)期間保持上升趨勢。試驗(yàn)第4周時(shí)，高脂組草魚血清ALT和AST活性分別為8.57和12.23 U/L，較基礎(chǔ)組分別極顯著升高了85.5%和188.4%(P＜0.01);試驗(yàn)第8周時(shí)，高脂組草魚血清ALT和AST活性分別為14.69和24.07 U/L，均極顯著高于基礎(chǔ)組3倍以上(P＜0.01);試驗(yàn)第12周時(shí)，高脂組草魚血清ALT和AST活性達(dá)66.43和100.31 U/L，均極顯著高于基礎(chǔ)組14倍以上(P＜0.01)。與血清CHO上升趨勢類似，草魚血清ALT和AST活性均隨高脂飼料投喂時(shí)間的延長而上升，且3個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間差異達(dá)到極顯著水平(P＜0.01)。

2.4 草魚肝胰臟生化指標(biāo)的變化

由表5可知，試驗(yàn)第4周時(shí)，高脂組草魚肝胰臟MDA含量達(dá)3.14 nmol/mg，較基礎(chǔ)組顯著升高了102.5%(P＜0.05);試驗(yàn)第8周時(shí)，高脂組草魚肝胰臟MDA含量達(dá)7.61 nmol/mg，約為基礎(chǔ)組的5倍(P＜0.01);試驗(yàn)第12周時(shí)，高脂組草魚肝胰臟MDA含量為8.22 nmol/mg，較基礎(chǔ)組極顯著升高了230.1%(P＜0.01)。試驗(yàn)期間草魚肝胰臟MDA含量隨高脂飼料投喂時(shí)間的延長而持續(xù)上升，3個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間差異達(dá)到極顯著 (P＜0.01)。

表4 12周內(nèi)草魚血清生化指標(biāo)的變化Table4 Changes in serum biochemical indices of grass carp within 12 weeks

投喂高脂飼料后，草魚肝胰臟SOD活性在試驗(yàn)第4周達(dá)到峰值，之后表現(xiàn)出下降的趨勢。試驗(yàn)第4周時(shí)，高脂組草魚肝胰臟SOD活性為208.00 U/mg，較基礎(chǔ)組顯著升高了16.3%(P＜0.05);試驗(yàn)第8周時(shí)，高脂組草魚肝胰臟SOD活性降至152.56 U/mg，與高脂組第4周的測定結(jié)果比較下降了36.3%(P＜0.01)，并顯著低于同期基礎(chǔ)組(P＜0.05);試驗(yàn)第12周時(shí)，高脂組草魚肝胰臟SOD活性為156.22 U/mg，與高脂組第8周的測定結(jié)果比較略有上升(上升了2.4%)(P＞0.05)，仍顯著低于同期基礎(chǔ)組(P＜0.05)。

與SOD活性相似，高脂組草魚肝胰臟CAT活性在試驗(yàn)第4周達(dá)到峰值，之后表現(xiàn)出下降的趨勢。試驗(yàn)第4周時(shí)，高脂組肝胰臟CAT活性達(dá)625.47 U/g，約為基礎(chǔ)組的30倍，差異極顯著(P＜0.01)。試驗(yàn)第8周和第12周的檢測結(jié)果顯示高脂組草魚肝胰臟CAT活性分別為619.39和290.43 U/g，均極顯著高于同期基礎(chǔ)組14倍以上(P＜0.01)。試驗(yàn)期間草魚肝胰臟CAT活性隨著高脂飼料投喂時(shí)間的延長而下降，試驗(yàn)第12周時(shí)的檢測結(jié)果與第8周時(shí)相比極顯著降低了113.2%(P ＜0.01)。

表5 12周內(nèi)草魚肝胰臟生化指標(biāo)的變化Table5 Changes in hepatopancreas biochemical indices of grass carp within 12 weeks

2.5 草魚肝胰臟ACC1 mRNA表達(dá)的變化

2%瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，RT-PCR產(chǎn)物大小在150 bp以上，膠回收測序結(jié)果證實(shí)該產(chǎn)物是目的基因的擴(kuò)增片段(圖2)。經(jīng)計(jì)算，高脂組草魚肝胰臟ACC1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量為1.11，較基礎(chǔ)組極顯著升高了33.7%(P＜0.01，圖3)。

圖2 RT-PCR產(chǎn)物電泳圖譜Fig.2 Electrophoretogram of the RT-PCR products

圖3 第12周草魚肝胰臟ACC1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量Fig.3 Relative expression of ACC1 mRNA of grass carp on the week 12

3 討論

3.1 草魚高脂攝入與肝組織損傷

魚類血清中TG和CHO主要源于肝臟的合成，血清中這2項(xiàng)指標(biāo)的變化可在一定程度上反映肝臟對(duì)脂肪的代謝情況[9]。本試驗(yàn)中，基礎(chǔ)組草魚血清TG和CHO含量分別為1.33和3.24 mmol/L，而高脂組草魚血清TG和CHO含量均隨著投喂時(shí)間的延長而升高，試驗(yàn)第4周、第8周和第12周時(shí)這2項(xiàng)指標(biāo)均顯著或極顯著高于基礎(chǔ)組。有研究表明，飼料中的脂肪能被魚類代謝為游離脂肪酸并被肝臟攝取[10]。Du等[5-6]研究發(fā)現(xiàn)，幼齡草魚攝入高脂飼料6周后血漿TG和CHO含量升高，并出現(xiàn)了類似哺乳動(dòng)物高脂血癥的癥狀。本試驗(yàn)中草魚攝入高脂飼料后，同樣出現(xiàn)了血清TG和CHO含量持續(xù)升高的趨勢，這說明投喂12周含8.1%脂肪的高脂飼料使草魚攝入的游離脂肪酸過多，并進(jìn)一步使肝臟合成的TG和CHO過量。這些過量的TG和CHO被轉(zhuǎn)運(yùn)出肝臟，使草魚表現(xiàn)為血脂水平上升。

AST和ALT是存在于肝細(xì)胞胞漿內(nèi)的2種重要轉(zhuǎn)氨酶，當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生損傷或壞死時(shí)這2種轉(zhuǎn)氨酶釋放入血液，因此血清中ALT和AST活性的異常升高常提示著肝臟已發(fā)生損傷或炎癥[11-12]。在本試驗(yàn)中，從第4周開始，高脂組草魚血清ALT和AST活性均極顯著高于同期基礎(chǔ)組。試驗(yàn)期間高脂組草魚血清AST、ALT活性與飼料投喂時(shí)間呈正相關(guān)關(guān)系。肝胰臟組織學(xué)觀察結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，過量的脂肪攝入使草魚肝細(xì)胞在試驗(yàn)第4周發(fā)生損傷，且在12周內(nèi)使肝細(xì)胞損傷加重。

3.2 草魚高脂攝入與肝胰臟脂質(zhì)過氧化反應(yīng)

MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)產(chǎn)生的最終產(chǎn)物，可在一定程度上反映機(jī)體的過氧化程度[11]。脂肪酸在氧化過程中可產(chǎn)生多種氧化應(yīng)激誘導(dǎo)物，如活性氧(ROS)和自由基，它們既可以直接引起肝細(xì)胞損害，又可以通過攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，使肝臟發(fā)生氧化應(yīng)激并最終產(chǎn)生MDA[13]。在本試驗(yàn)中，高脂組草魚肝胰臟MDA含量在試驗(yàn)第4周已顯著高于基礎(chǔ)組，且MDA含量與飼料投喂時(shí)間呈正相關(guān)關(guān)系。這說明，連續(xù)投喂高脂飼料加速了草魚肝臟對(duì)脂肪酸的氧化，此期間不斷產(chǎn)生的氧化應(yīng)激誘導(dǎo)物使MDA持續(xù)生成。

SOD和CAT都是動(dòng)物機(jī)體重要的抗氧化酶，它們可以清除ROS和自由基，保護(hù)機(jī)體不受損傷，但過量的ROS和自由基可以抑制抗氧化酶的活性，使肝臟出現(xiàn)低抗氧化水平[14-15]。這在本試驗(yàn)高脂組草魚上也有體現(xiàn):試驗(yàn)第4周，草魚肝胰臟中SOD和CAT活性分別達(dá)到了同期基礎(chǔ)組的2和35倍;第8周時(shí)，高脂組這2種抗氧化酶的活性開始下降;到第12周時(shí)，這2種抗氧化酶活性均極顯著低于第4周的檢測結(jié)果。結(jié)合高脂組草魚試驗(yàn)期間肝胰臟中MDA含量持續(xù)升高的結(jié)果，可以推斷在高脂飼料投喂前4周，草魚尚能通過不斷提高肝胰臟中SOD、CAT的活性來清除機(jī)體產(chǎn)生的氧化應(yīng)激誘導(dǎo)物，但過量的誘導(dǎo)物可能在第4周后超過了草魚機(jī)體自身的清除能力，并開始抑制機(jī)體抗氧化酶的活性。

3.3 草魚高脂攝入后ACC1 mRNA表達(dá)的變化

ACC1是肝臟內(nèi)脂肪酸合成反應(yīng)的限速酶，其活性的大小可以在一定程度上反映動(dòng)物對(duì)脂肪的合成速率[8]。ACC1 mRNA的表達(dá)量受到食物、激素和其他一些生理因子的影響[16]。已有研究證實(shí)，哺乳動(dòng)物進(jìn)食高脂飼料后ACC1 mRNA的表達(dá)量增加，而處于饑餓狀態(tài)時(shí)ACC1 mRNA的表達(dá)受到抑制[17]。而在魚類上，對(duì)ACC1 mRNA表達(dá)量的研究較少。Matsumoto等[18]利用高脂飼料建立8周齡青鳉魚的非酒精性脂肪肝模型，8周后發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)魚肝胰臟ACC1 mRNA表達(dá)量增加。而Kuwashiro等[19]在相同試驗(yàn)管理?xiàng)l件下從另一批8周齡青鳉魚上卻發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)魚進(jìn)食同種高脂飼料8周后肝胰臟ACC1 mRNA表達(dá)量下降。本試驗(yàn)半定量RT-PCR分析結(jié)果顯示，投喂高脂飼料12周后草魚肝胰臟ACC1 mRNA相對(duì)表達(dá)量增加，極顯著高于基礎(chǔ)組，與Matsumoto等[18]的研究結(jié)果相符，由此推斷投喂12周的含8.1%脂肪的高脂飼料使草魚肝胰臟ACC1活性上升，加快了草魚體內(nèi)脂肪酸在肝臟中從頭合成的速度。通過對(duì)比 Matsumoto 等[18]和 Kuwashiro 等[19]的試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，魚類ACC1 mRNA表達(dá)量的變化除受高脂飼料影響外，還與試驗(yàn)動(dòng)物的體質(zhì)、體內(nèi)脂肪酸合成和氧化的相互作用有關(guān)。本試驗(yàn)僅選取了草魚體內(nèi)脂肪酸長鏈合成中的1個(gè)限速基因作為研究對(duì)象，在后續(xù)的試驗(yàn)中還可以將更多參與脂肪酸代謝的相關(guān)基因納入研究范圍，結(jié)合病理形態(tài)學(xué)的觀察和相關(guān)生化指標(biāo)的檢測，更全面地研究草魚對(duì)過量脂肪酸的代謝模式。

4 結(jié)論

高脂飼料的連續(xù)投喂升高了草魚的血脂水平，并使草魚肝胰臟出現(xiàn)損傷，其作用機(jī)制可能與高脂飼料降低草魚抗氧化能力以及促進(jìn)肝臟脂肪合成有關(guān)。

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