石建森，張鎖峰，武 旭，李 青

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)研究中心，山西 太原 030006）

羊肚菌是一種野生名貴食、藥用真菌，具有較高的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值[1-4]。由于其具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值及較強(qiáng)的實(shí)用性,市場(chǎng)價(jià)格一直居高不下，導(dǎo)致野生資源被過(guò)度的采摘[5-7]。近20多年來(lái),我國(guó)許多科技工作者在羊肚菌的栽培方面做了大量研究工作，雖然已有栽培成功的報(bào)道,但出菇不穩(wěn)定，產(chǎn)量低，無(wú)法達(dá)到大批量生產(chǎn)的目的[8-10,12]。由于大規(guī)模人工栽培羊肚菌未實(shí)現(xiàn)，上世紀(jì)60年代起，人們轉(zhuǎn)而大規(guī)模生產(chǎn)羊肚菌菌絲體。菌絲體的化學(xué)成分、功效與子實(shí)體幾乎等同[11]，生產(chǎn)要相對(duì)容易，因此引起了世界研究者的關(guān)注。近年來(lái)，有不少科技工作者就碳氮源、溫度、pH值、微量元素等因素對(duì)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的影響做了大量相關(guān)報(bào)道[12-16]。菌絲體主要來(lái)源于野生或人工栽培羊肚菌的組織分離培養(yǎng)[17-19]，但關(guān)于羊肚菌不同分離部位菌絲生長(zhǎng)情況的研究報(bào)道較少。本文旨在研究羊肚菌不同分離部位的組織成活率和菌絲生長(zhǎng)的情況。

1 材料和方法

1.1 供試材料

1.1.1 羊肚菌菌株來(lái)源

本研究中的羊肚菌為尖頂羊肚菌，采集于山西省呂梁地區(qū)方山縣麻地會(huì)鄉(xiāng)陽(yáng)圪臺(tái)村緊鄰的山丘上的闊葉林中。此地區(qū)四季分明、雨量充沛、溫差很大。

1.1.2 試驗(yàn)培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，即土豆300 g、葡萄糖15 g、瓊脂粉 30 g、KH2PO43 g、Mg2SO41.5 g，水 1 500 mL，pH 6.5。

制作方法：將土豆煮沸20 min左右過(guò)濾取汁，加入上述配方，裝入18 mm×180 mm玻璃試管的1/4處，塞入棉塞，在120℃下高壓滅菌60 min，做成斜面培養(yǎng)基備用。

1.2 試驗(yàn)方法

將新采集的羊肚菌子實(shí)體及子實(shí)體與樹(shù)根共生體放在操凈臺(tái)上，首先用酒精棉擦拭消毒,然后紫外線滅菌10 min。分別對(duì)菌蓋、菌柄菌蓋結(jié)合部位、樹(shù)根與菌絲共生部位 (以下用根部表示)3個(gè)位置進(jìn)行分離，接種于PDA培養(yǎng)基斜面中部，在25℃下恒溫培養(yǎng)，定期觀察菌絲生長(zhǎng)狀況，記錄菌絲萌發(fā)時(shí)間、長(zhǎng)勢(shì)及成活率，每處理重復(fù)10次。

將上述獲得的羊肚菌一級(jí)試管菌種分別接種于PDA培養(yǎng)基斜面中部，在25℃下恒溫培養(yǎng)，定期觀察菌絲生長(zhǎng)狀況，記錄菌絲密度、色澤、邊緣整齊度、長(zhǎng)勢(shì)及生長(zhǎng)速度，每處理重復(fù)10次。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同分離部位對(duì)組織成活的影響

羊肚菌不同分離部位對(duì)組織成活的影響見(jiàn)表1。

表1 羊肚菌不同分離部位對(duì)組織成活的影響

由表1可看出，組織成活率與菌絲生長(zhǎng)勢(shì)均表現(xiàn)為蓋柄結(jié)合部位最好，其次為根菌共生部位，菌蓋處較差；根菌共生部位分離的組織菌絲萌發(fā)最快，菌蓋與蓋柄結(jié)合部位萌發(fā)時(shí)間相差不大。

2.2 不同分離部位對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

羊肚菌不同分離部位對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響見(jiàn)表2。

表2 羊肚菌不同分離部位對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

由表2可看出，不同分離部位的菌絲萌發(fā)時(shí)間相同，菌絲形態(tài)均為短絨毛狀，菌絲均呈黃白色，但菌絲生長(zhǎng)勢(shì)、菌絲密度、菌絲均勻度均表現(xiàn)為蓋柄結(jié)合部位最好，其次為根部，菌蓋處最差，且不同分離部位間菌絲密度差異較大。

2.3 不同分離部位對(duì)菌絲平均生長(zhǎng)速度的影響

不同分離部位對(duì)菌絲平均生長(zhǎng)速度的影響見(jiàn)圖1。

圖1 不同分離部位對(duì)二次轉(zhuǎn)管菌絲生長(zhǎng)速度的影響

由圖1可看出，不同分離部位組織菌絲平均生長(zhǎng)速度差異較大。表現(xiàn)為菌蓋處平均生長(zhǎng)速度最快，滿管時(shí)間最短，蓋柄結(jié)合部位最慢，滿管時(shí)間最長(zhǎng)。但菌絲滿管后，都有一個(gè)回菌過(guò)程，隨時(shí)間的延長(zhǎng)，培養(yǎng)基上菌絲密度會(huì)進(jìn)一步增加。

3 討論與結(jié)論

目前子實(shí)體組織分離法是羊肚菌菌種分離主要采用的方法之一，由于子實(shí)體中空且組織結(jié)構(gòu)較薄，操作要求極其精細(xì)，一般技術(shù)條件下分離的結(jié)果往往污染率較高[18,19]。本研究采用子實(shí)體組織分離法，結(jié)果表明對(duì)羊肚菌的菌蓋及蓋柄結(jié)合部位進(jìn)行組織分離，組織成活率分別為20%、60%，污染率較高?，F(xiàn)階段，關(guān)于羊肚菌的地下菌絲，特別是連接羊肚菌子實(shí)體的土壤菌絲與來(lái)源于子實(shí)體組織分離的菌絲間是否存在差異的研究鮮有報(bào)道。黃保敬[19]研究表明采用帶羊肚菌菌絲團(tuán)的土壤進(jìn)行羊肚菌菌種分離是可行的，且此方法相對(duì)于采用子實(shí)體進(jìn)行組織分離和孢子分離具有明顯的優(yōu)點(diǎn)。本研究通過(guò)對(duì)樹(shù)根與菌絲共生部位 (根部)菌索進(jìn)行菌種分離，組織成活率達(dá)到40%，符合黃保敬的研究結(jié)果。本研究還表明，從樹(shù)根與菌絲共生部位分離的菌種菌絲萌發(fā)最早，但菌絲長(zhǎng)勢(shì)不如蓋柄結(jié)合部位，其原因有待進(jìn)一步研究。本研究中組成成活率最低的為菌蓋分離部位，與王廣耀[20]等的研究結(jié)果一致。

侯志江[21]等在關(guān)于不同濃度草木灰對(duì)尖頂羊肚菌菌絲生長(zhǎng)影響的試驗(yàn)研究中，羊肚菌的菌絲呈白色、黃色和黃褐色，菌絲形態(tài)為絲狀或絨絮狀。本研究中，羊肚菌菌絲的色澤與形態(tài)同前人研究結(jié)果一致。本研究結(jié)果還表明，菌絲生長(zhǎng)勢(shì)、密度及均勻度均表現(xiàn)為蓋柄結(jié)合部位最優(yōu)，其次為根部，菌蓋部位最差；菌絲平均生長(zhǎng)速度表現(xiàn)為菌蓋部位＞根部＞蓋柄結(jié)合部位，菌絲滿管時(shí)間表現(xiàn)為菌蓋部位＜根部＜蓋柄結(jié)合部位，這可能與菌絲的均勻度和菌絲的密度有關(guān)。

[1]章力建，侯向陽(yáng).我國(guó)農(nóng)業(yè)立體污染防治研究進(jìn)展[J].作物雜志，2005 (5)：1-3.

[2]張廣倫，肖正春.羊肚菌的營(yíng)養(yǎng)成分及其利用[J].食用菌，1993，15 (3)：3-4.

[3]刁治民，鮑敏，祝鮮寧.羊肚菌菌絲營(yíng)養(yǎng)生理特性的研究[J].青海師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2001 (3)：62-66.

[4]吳素蕊，侯波，郭相，等.黑脈羊肚菌營(yíng)養(yǎng)成分分析比較[J].食品科技，2011(7)：65-66，72.

[5]孫大成，郭曉科，崔微.羊肚菌人工栽培技術(shù)綜述[J].黑龍江生態(tài)工程職業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，11 (6)：21-22.

[6]趙琪，康平德，戚淑威，等.羊肚菌資源現(xiàn)狀及可持續(xù)利用對(duì)策[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，23 (1)：266-268.

[7]朱斗錫.羊肚菌人工栽培研究進(jìn)展[J].中國(guó)食用菌，2008，27(4)：3-5

[8]徐中志，趙琪，戚淑威，等.羊肚菌產(chǎn)品流通初步研究[J].中國(guó)食用菌，2007，26 (2)：41-42.

[9]張文科.羊肚菌秸稈無(wú)機(jī)栽培技術(shù)初探[J].現(xiàn)代園藝，2012 (6)：39-41.

[10]李素玲，尚春樹(shù)，劉虹.羊肚菌子實(shí)體培育研究初報(bào)[J].中國(guó)食用菌，1999(1)：8-10.

[11]趙桂云，馬慶斌.羊肚菌液體培養(yǎng)基配方的研究[J].食用菌，2002 (6)：15-16.

[12]李書(shū)蘭，和曉娜，李安利，等.不同配方培養(yǎng)基對(duì)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)及菌核和子實(shí)體形成的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40(5)：2587-2588，2593.

[13]李潔，張?jiān)葡迹竦陆?不同因素對(duì)羊肚菌孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)的影響[J].河北林業(yè)科技，2004(2)：1-2.

[14]肖鋒，王得賢.溫度、pH值、光照對(duì)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的影響[J].中國(guó)食用菌，2000，19 (5)：13-15.

[15]朱永真，杜雙田，車進(jìn)，等.不同碳源及氮源對(duì)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的影響 [J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2011 (3)：113-118.

[16]黃冕，張松.尖頂羊肚菌母種培養(yǎng)基的篩選[J].食用菌，2007(6)：32.

[17]朱斗錫，何榮華.羊肚茵不同菌株生物學(xué)特性及優(yōu)良品種選育[J].中國(guó)食用菌，2008，27(6)：15-16，23

[18]王秀云.羊肚菌的自交與雜交試驗(yàn)初探[J].食用菌，2000 (1)：9.

[19]黃保敬.用羊肚菌菌柄基部土壤分離羊肚菌菌種的方法初探[J].食用菌，2010 (2)：24-25.

[20]王廣耀，蔣曉成，程吉吉.羊肚菌菌種分離及母種培養(yǎng)基篩選[J].北方園藝，2009 (9)：211-212.

[21]侯志江，程遠(yuǎn)輝，戚淑威，等.不同濃度草木灰對(duì)尖頂羊肚菌菌絲生長(zhǎng)及菌核形成的影響[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)，2011，24(5)：2020-2022.