王 禹

（黑龍江省農(nóng)科院園藝分院，哈爾濱150069）

樹莓為薔薇科懸鉤子屬植物，灌木型果樹，果實(shí)為聚合漿果，色澤宜人，風(fēng)味獨(dú)特，既可鮮食，也可加工成果醬、果汁、果凍及多種食品添加劑［1］。樹莓推廣種植與產(chǎn)業(yè)化開發(fā)前景廣闊，但傳統(tǒng)繁殖方法繁殖質(zhì)量差，難以滿足當(dāng)前我國大量優(yōu)質(zhì)苗木的需求，嚴(yán)重制約著樹莓產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展。植物組織培養(yǎng)是一種可以保持物種特性并能夠快速繁殖的一種生物技術(shù)手段。試驗(yàn)通過植物組織培養(yǎng)方法篩選出適宜樹莓腋芽生長的培養(yǎng)基，為樹莓高效繁殖提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料及方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

試驗(yàn)樹莓品種為哈瑞太茲，將采集的樹莓當(dāng)年生枝條去除葉片及葉柄部分，將枝條剪成帶1～2個腋芽的莖段，在流水狀態(tài)下沖洗10min。消毒程序：75%的酒精30s→0.1%HgCl2中消毒7～8min→無菌水沖洗2～3次。

1.2 試驗(yàn)方法

本試驗(yàn)采用的基本培養(yǎng)基為 MS，生長培養(yǎng)基試驗(yàn)：6－BA 設(shè)3種濃度分別為0.5、1、1.5mg／L；IAA設(shè)3種濃度分別為0.1、0.2、0.3mg／L；蔗糖濃度分別為20、25、30g／L。

所有培養(yǎng)基都經(jīng)高壓蒸汽滅菌20min（120～125℃，1.0～1.2大氣壓下），頭孢曲松鈉經(jīng)過濾滅菌。

1.3 觀察統(tǒng)計方法

每一處理20瓶，每瓶2個外植體。接種25天后觀察調(diào)查萌芽情況，所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 適宜生長的培養(yǎng)基

表1 生長培養(yǎng)L9（33）正交研究組合試驗(yàn)結(jié)果

表1中以1mg／L 6－BA＋0.2mg／L IAA＋30g／L蔗糖處理組合的萌芽率最高，為86.7%。對表1中個處理組合的萌芽率進(jìn)一步做方差分析。結(jié)果見表2。

表2 生長培養(yǎng)L9（33）正交研究組合方差分析結(jié)果

表2方差結(jié)果分析表明：哈瑞太茲處理總效應(yīng)達(dá)到5%的顯著水平；6－BA濃度、IAA濃度、蔗糖濃度均達(dá)到了5%顯著水平。均方SIAA＞S蔗糖＞S6－BA，即對萌芽率的影響以IAA為主要因子；蔗糖次之；6－BA最小。對6－BA濃度、IAA濃度、蔗糖濃度因素進(jìn)行多重比較，篩選適合的水平。結(jié)果見表3。

表3 3個因素3水平Duncan＇s檢驗(yàn)

由表3中可以看出A因素A1水平平均值最大，為65%；與 A0.5、A1.5水平差異顯著。因此，最優(yōu)組合選 A1水平，即6－BA濃度為1mg／L。B因素 B0.2水平平均值最大，為59.4%；與 B0.3水平差異顯著；與 B0.1水平差異不顯著，B0.1水平平均值為58.3%。因此，最優(yōu)組合可選 B0.1水平或 B0.2水平，即IAA 濃度為0.1或0.2mg／L。C因素C30水平平均值最大，為66.1%，與C20、C25水平差異顯著。因此，最優(yōu)組合選C30水平，即蔗糖濃度為30g／L。根據(jù)以上分析比較，篩選出的最優(yōu)生長培養(yǎng)基1mg／L 6－BA＋0.1mg／L IAA＋30g／L蔗糖或1mg／L 6－BA＋0.2mg／L IAA＋30g／L蔗糖（此培養(yǎng)基與表1中的最優(yōu)組合相同），兩個培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)比較。最后，篩選出的哈瑞太茲最佳生長培養(yǎng)基為 MS＋1mg／L 6－BA＋0.2mg／L IAA＋30g／L蔗糖。

3 結(jié)果與討論

哈瑞太茲最優(yōu)生長培養(yǎng)基為 MS＋1mg／L 6－BA＋0.2mg／L IAA＋30g／L蔗糖。一般來說，當(dāng)生長素／細(xì)胞分裂素比值高時，有利于長根，低時有利于長芽，中間比值利于愈傷組織的誘導(dǎo)和分化。在具體試驗(yàn)中，二者只有按合適濃度和比例使用時，才能使生長向同一方向協(xié)調(diào)發(fā)展［9］。本試驗(yàn)也證明了生長激素在植物生長期間，起了非常重要的作用，激素組合濃度太高不利于萌芽的發(fā)生，蔗糖濃度低也不利于萌芽的發(fā)生。

［1］ 和加衛(wèi)，唐開學(xué).云南省懸鉤子屬藥用植物資源研究［J］.中草藥，2005，36（7）：1078－1081.

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［9］ 王冬梅，黃學(xué)林.細(xì)胞分裂素類物質(zhì)在植物組織培養(yǎng)中的作用機(jī)制［J］.植物生理學(xué)通訊，1996，4：32.