朝魯門(mén) 吳香杰

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

額日敦-7湯由訶子、梔子、川楝子、土木香、懸鉤子木、山奈、苦參等7味藥組成的傳統(tǒng)蒙藥制劑，具有清瘟解熱、解表、止痛之功效;用于瘟病初期感冒發(fā)燒、咳嗽、全身酸痛、頭痛、咽喉腫痛等病癥［1］。為了確保療效，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定其梔子中梔子苷的含量。本方法先進(jìn)、簡(jiǎn)便.，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為控制該劑制的質(zhì)量提供依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器:AUW220D型電子分析天平 (d=0.1mg/0.01mg)，日本島津;LC-10AT高效液相色譜儀，日本島津;SPD—10AVP檢測(cè)器，日本島津;N3000色譜工作站，日本島津;DiamonsilC18 色譜柱(250 ×4.6mm，5μm)，迪馬公司;KQ-100型超聲波清洗器，昆山市超聲波儀器有限公司。

1.2 藥品與試劑:額日敦-7湯由內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院蒙藥制劑室提供(批號(hào)20110221、20100617、20110916)。梔子苷對(duì)照品(批號(hào):110749-200511，純度＞98%)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。甲醇為色譜純;水為高純水;所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［2］:DiamonsilC18 色譜柱(250 × 4.6mm，5μm，迪馬公司)色譜柱;以甲醇:水:0.5%磷酸水(65:35:0.05)為流動(dòng)相;流速為1.0ml·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm;柱溫為25℃;進(jìn)樣量以μl。

2.2 對(duì)照品溶液的制備:取梔子苷對(duì)照品10mg，精密稱(chēng)定，置10ml量瓶中，加入甲醇使溶解至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密吸取上液3mL置100容量瓶中，加入甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液(即每1ml中含梔子苷30μg)。

2.3 供試品溶液的制備:取額日敦-7湯約0.6g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入20ml甲醇，稱(chēng)定重量，超聲20分鐘后放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密稱(chēng)定續(xù)濾液作為供試品溶液。

另取缺梔子陰性對(duì)照品約0.5g，精密稱(chēng)定，照上述方法操作，即得缺梔子陰性對(duì)照品溶液。

2.4 干擾試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、缺梔子陰性對(duì)照品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，按選定色譜條件，記錄各色譜圖。供試品溶液色譜圖中與對(duì)照品相應(yīng)的位置上，呈現(xiàn)梔子苷吸收峰，而缺梔子陰性對(duì)照品溶液色譜圖中無(wú)干擾色譜峰。

2.5 線性關(guān)系及其工作范圍的考察:精密吸取對(duì)照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0，17.5μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面值(A)。并以梔子苷峰面值(Y)對(duì)其相應(yīng)的的進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:y=17508x-728，r=0.9995。結(jié)果表明，梔子苷對(duì)照品進(jìn)樣量在0.075～0.525μg范圍內(nèi)，與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn):精密吸取供試品溶液各10μl，在上述色譜條件下，分別重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積積分值。結(jié)果梔子苷的RSD值為1.76%。結(jié)果表明，精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一份供試品溶液10μl，分別于 0、2、4、6、8、10、12 小時(shí)注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積積分值。結(jié)果梔子苷的RSD值為1.64%。表明供試品溶液在12小時(shí)內(nèi)測(cè)定穩(wěn)定性良好。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

2.8 重復(fù)性試驗(yàn):稱(chēng)取樣品約0.6g，共3份，精密稱(chēng)定，照供試品溶液制備方法制得供試品溶液6份，按含量測(cè)定方法，分別精密吸取10.0μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積。結(jié)果梔子苷的RSD分值為0.99%。表明該含量測(cè)定方法具有良好的重復(fù)性。

2.9 回收率試驗(yàn):取已知含量的樣品約0.3055g，計(jì)6份，精密稱(chēng)定，分別加入一定量的梔子苷對(duì)照品貯備液，照供試品溶液制備方法制得供試品溶液后進(jìn)樣測(cè)定峰面積，并計(jì)算回收率。結(jié)果梔子苷的平均回收率為98.54%，RSD為1.77%(見(jiàn)表2)。

2.10 樣品測(cè)定:取樣品約 0.6g，(n=6)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入20ml甲醇，稱(chēng)定重量，超聲20分鐘后放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密稱(chēng)定續(xù)濾液作為供試品溶液。

3 討論

本試驗(yàn)用甲醇提取蒙藥額日敦－7湯，能使樣品中的梔子苷得到良好的分離。本測(cè)定方法簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好，可用于本品中梔子苷的含量測(cè)定，能夠有效的控制藥品質(zhì)量。

［1］內(nèi)蒙古自治區(qū)衛(wèi)生廳.內(nèi)蒙古蒙成藥標(biāo)準(zhǔn)［S］.內(nèi)蒙古科技技術(shù)出版社，1984，101.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［S］.一部.北京:人民衛(wèi)生出版社，2010，231.