吳聰英，程莉莉，睢明河

（北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029）

在針灸臨床中，特定穴的應(yīng)用廣泛，且臨床效果較好。在治療臟腑疾病中，用下合穴、背俞穴、募穴較多。下合穴作為特定穴之一，備受歷代醫(yī)家的重視，臨床上多用于治療六腑疾病?！鹅`樞· 四時氣》篇中曰:“邪在腑，取之合。”《靈樞·邪氣臟腑病形》云:“滎輸治外經(jīng)，合治內(nèi)府”，“治內(nèi)府奈何取之于合”［1］。募有匯聚之意。楊上善《明堂》注:“募，猶盛也。”《類經(jīng)》謂:“為臟氣結(jié)聚之所，故曰募?！薄稑?biāo)幽賦》曰:“豈不聞臟腑病，而求門、海、俞、募之微?！睔v代醫(yī)家臨床運(yùn)用俞募穴積累了豐富經(jīng)驗(yàn)，予今日臨床以借鑒［2］。背俞穴是內(nèi)臟與體表聯(lián)系的部位，具有反映內(nèi)臟疾病和治療相應(yīng)內(nèi)臟病變的功能。腹為陰，臟腑深居腹中，其病曰陰病;背為陽，俞穴所在，調(diào)治之曰治陽?！端貑枴り庩枒?yīng)象大論》云:“陰病治陽?！薄端貑枴らL刺節(jié)論》云:“迫臟刺背，背俞也?！闭潜秤嶂委熛鄳?yīng)臟腑疾病的明證［3］。急性尿潴留是常遇到的泌尿外科急癥，嚴(yán)重危害著人類健康。針刺療法是治療該疾病常用的一種非藥物療法，對多種原因造成的急性尿潴留均有一定療效，且無副作用。但在針灸治療該疾病時，所選穴位差異較大，如何優(yōu)選穴位成為一個值得研究的課題。本實(shí)驗(yàn)通過建立家兔急性尿潴留模型，電針膀胱下合穴委中、募穴中極和背俞穴膀胱俞，比較對膀胱內(nèi)壓［4］及膀胱組織 ATP 濃度［5］影響的差異，從而優(yōu)選出治療急性尿潴留等膀胱疾病的優(yōu)勢穴位，以指導(dǎo)臨床應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物與分組

健康清潔級成年雄性家兔48只，體重為（2.0±0.2）kg，由北京興隆動物養(yǎng)殖廠【動物許可證號:SCXK（京）2011－0006】提供。實(shí)驗(yàn)過程中對動物的處置符合實(shí)驗(yàn)動物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。家兔于兔籠內(nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，清潔飲水，自由攝食，光照與黑暗為12 h交替，室溫為20℃ ～22℃，相對濕度為60%。按隨機(jī)數(shù)字表將家兔隨機(jī)分為6組，分別為:正常組、模型組、電針非經(jīng)非穴組、電針委中組、電針中極組、電針膀胱俞組，每組8只。

1.2 主要試劑與儀器

烏拉坦由北京環(huán)亞泰克生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司提供，BL－420+型生物機(jī)能信號采集系統(tǒng)由成都泰盟公司研制，YP100型壓力換能器由北京新航興業(yè)科貿(mào)有限公司研制，BT223S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），韓氏電針儀LD202H型由北京華衛(wèi)公司研制，5415R高速離心機(jī)由德國Eppendorf公司研制，華佗牌一次性針灸針（直徑0.25 mm×13 mm，蘇州華佗醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)）。

1.3 動物模型的建立

參照Chien等［6］所建立的膀胱過度充盈模型進(jìn)行。將家兔用20%烏拉坦（5 ml/kg）耳緣靜脈麻醉，將其仰臥位固定于兔臺上，用10#導(dǎo)尿管由尿道插入膀胱（6～7 cm），用4號絲線環(huán)繞尿道結(jié)扎，導(dǎo)凈尿液，再以同樣灌注速度用37℃溫生理鹽水充盈膀胱，灌注量達(dá)到測定膀胱容量的2倍，保持2 h后模型形成。造模后的膀胱內(nèi)壓較造模前降低50%以上，表示造模成功。

1.4 取穴方法

委中:膝關(guān)節(jié)屈面正中凹陷處［7］。中極:腹正中線上，恥骨聯(lián)合上1寸（兔的胸腹前正中線上取劍突與恥骨聯(lián)合上緣為13等分，每等分為1寸）［7］。膀胱俞:第2骶椎棘突下旁開1.5 cm處［7］。非經(jīng)非穴:腓骨小頭后下方，因?yàn)檫@個部位既不屬于任一條經(jīng)，也不是任一穴位，且方便操作，所以用來做本實(shí)驗(yàn)的對照穴位。

1.5 各組處理方法

正常組:只按同樣方法麻醉，不造成急性尿潴留模型。模型組:家兔造成急性尿潴留模型后，不給予電針。委中組:家兔造成急性尿潴留模型后，立即針刺雙側(cè)“委中”，針刺深度為5 mm，并組成一回路連接于LD202H型韓式電針儀，采用疏密波，刺激頻率為2 Hz，強(qiáng)度以針柄輕微抖動為宜（電流強(qiáng)度約0.5 mA），電針時間為20 min。中極組:家兔造成急性尿潴留模型后，立即針刺“中極”，并與中極和曲骨的中點(diǎn)組成一回路，電針方法同上。膀胱俞組:家兔造成急性尿潴留模型后，將家兔改為側(cè)臥固定，立即針刺雙側(cè)“膀胱俞”，并組成一回路，電針方法同上。非經(jīng)非穴組:家兔造成急性尿潴留模型后，立即針刺雙側(cè)“非經(jīng)非穴（腓骨小頭后下方）”，并組成一回路，電針方法同上。

1.6 指標(biāo)檢測

1.6.1 膀胱內(nèi)壓測定 各組膀胱內(nèi)壓測定時刻:正常組只測量1次即膀胱初始內(nèi)壓;模型組分別于造模前（即灌注2倍膀胱容量時即刻）、造模后（即灌注2倍膀胱容量2 h后還未排尿時）測量膀胱內(nèi)壓;電針組分別于造模前、后及電針前（即灌注2倍膀胱容量2 h及排尿后）、后測量。方法:用37℃溫生理鹽水，通過三通管一端的輸液器，以大約3 ml/min的速度向膀胱內(nèi)注生理鹽水，三通管另一端與壓力換能器相連，再與BL－420+型生物機(jī)能信號采集系統(tǒng)相連，同時觀察膀胱內(nèi)壓的變化。

1.6.2 膀胱組織三磷酸腺苷（ATP）的取材及檢測

各組家兔處理結(jié)束后，耳緣靜脈注射空氣10 ml處死家兔，立即剖腹取出膀胱，用生理鹽水沖洗后稱重，按照1∶4比例加入生理鹽水勻漿，制成20%濃度的勻漿液，將勻漿液通過高速離心機(jī)離心，離心速度為3000 R/min，時間為15 min，取上清液。采用酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）檢測膀胱組織ATP濃度。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組膀胱內(nèi)壓的比較

表1 各組造模前、后膀胱內(nèi)壓的比較（cmH2O，±s）

表1 各組造模前、后膀胱內(nèi)壓的比較（cmH2O，±s）

注:與造模前比較，△P ﹤0.01。

組別 n 造模前 造模后模型組 8 29.12 ±3.33 7.55 ±1.72△非經(jīng)非穴組 8 27.47 ±2.47 9.82 ±1.08△委中組（BL 40） 8 23.79 ±3.40 7.82 ±1.21△中極組（RN 3） 8 32.35 ±3.55 14.53 ±3.01△膀胱俞組（BL 28） 8 23.41 ±3.35 9.99 ±0.95△

如表1所示，與造模前比較，造模后膀胱內(nèi)壓明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01），且造模后的膀胱內(nèi)壓較造模前均降50%以上，提示造模成功。

表2 各組電針前、后膀胱內(nèi)壓比較（cmH2O，±s）

表2 各組電針前、后膀胱內(nèi)壓比較（cmH2O，±s）

注:與電針前比較，★P﹤0.05;與委中組比較，△P﹤0.05;與中極組比較，*P ﹤0.05。

組別 n 電針前 電針后 d=（電針后－電針前）8 5.26 ±0.95 5.82 ±1.12 0.55 ±0.35委中組（BL 40） 8 4.84 ±0.68 5.60 ±0.74★ 0.77 ±0.27中極組（RN 3） 8 6.62 ±0.68 7.82 ±0.69★ 1.19 ±0.42膀胱俞組（BL 28） 8 6.63 ±0.84 9.18 ±0.98★ 2.54 ±0.66非經(jīng)非穴△＊

如表2所示，與電針前比較，電針后委中組、中極組和膀胱俞組的膀胱內(nèi)壓變化均明顯升高（P＜0.05）;與委中組和中極組比較，膀胱俞組的家兔膀胱內(nèi)壓變化差（電針后－電針前）明顯較大（P＜0.05）。說明膀胱俞對急性尿潴留模型家兔膀胱內(nèi)壓的影響最大，委中組和中極組次之，非經(jīng)非穴最差。

表3 各組膀胱ATP濃度比較（nmol/L，±s）

表3 各組膀胱ATP濃度比較（nmol/L，±s）

注:與正常組比較，*P﹤0.01;與模型組比較，☆P﹤0.01;與非經(jīng)非穴組比較，△P﹤0.01;與委中組比較，◇P﹤0.01;與中極組比較，□P ﹤0.01。

組別 ATP濃度（nmol/L）26.36 ±1.92模型組 10.00 ±0.86*非經(jīng)非穴組 8.47 ±1.40委中組（BL 40） 33.87 ±2.35☆△中極組（RN 3） 31.96 ±1.91☆△膀胱俞組（BL 28） 9.98 ±2.77正常組◇□

2.2 各組膀胱組織ATP的比較

由表3可以看出，與正常組相比，模型組的家兔膀胱組織ATP含量明顯較低（P﹤0.01），說明造模后家兔膀胱組織ATP含量會降低;與模型組相比，委中組和中極組的家兔膀胱組織ATP含量明顯偏高（P﹤0.01）;與非經(jīng)非穴組比較，委中組和中極組的家兔膀胱組織ATP含量明顯偏高（P﹤0.01）;與委中組和中極組比較，膀胱俞組的家兔膀胱組織ATP含量明顯較低（P﹤0.01）。

3 討論

急性尿潴留是指膀胱內(nèi)充滿尿液，且尿量超過正常膀胱容量，由于某種原因不能將尿液排出體外。膀胱內(nèi)壓是膀胱逼尿肌收縮構(gòu)成膀胱壁的主動張力，在主觀意識的控制下，逼尿肌產(chǎn)生強(qiáng)有力的收縮，在下尿路通暢的情況下產(chǎn)生并維持排尿，測定膀胱內(nèi)壓［4］可以了解逼尿肌的收縮功能和下尿路的通暢情況。ATP是嘌呤能神經(jīng)的遞質(zhì)，通過與其受體結(jié)合參與多種功能調(diào)節(jié)。研究表明［5］急性尿潴留時，膀胱組織ATP濃度會發(fā)生改變，測定膀胱組織ATP濃度可以反映膀胱組織的ATP活性。因此本實(shí)驗(yàn)選取膀胱內(nèi)壓和膀胱組織ATP活性作為本實(shí)驗(yàn)的檢測指標(biāo)，檢測電針膀胱特定穴對膀胱內(nèi)壓和膀胱組織ATP的影響。

治療腑病當(dāng)首選其下合穴——委中，古籍中記載委中治療膀胱腑病較多。如《靈樞·邪氣臟腑病形》篇云:“膀胱病者，小腹偏腫而痛，以手按之，即欲小便而不得，肩上熱，若脈陷，及足小指外廉及脛踝后皆熱，若脈陷，取委中央。”《甲乙經(jīng)》及《千金方》記載委中主:“少腹堅腫。”《外臺》記載:“遺溺，嵌急身熱，少腹堅腫，少腹實(shí)熱，小便難。”委中現(xiàn)代主要用于治療泌尿系統(tǒng)疾病，有遺尿、尿潴留、癃閉［8］。針刺委中穴對膀胱壓力有一定調(diào)整作用，一般可使膀胱內(nèi)壓力有不同程度下降，對松弛性膀胱或尿潴留者，可有治療作用［9］。中極穴為膀胱募穴，又是足少陰腎經(jīng)、足太陰脾經(jīng)、足厥陰肝經(jīng)與任脈的會穴，主治小腹、肝腎及前陰等疾患。實(shí)驗(yàn)研究表明，針刺中極可使緊張性膀胱內(nèi)壓降低，使弛緩性膀胱內(nèi)壓升高，具有雙向調(diào)節(jié)的作用，也就是說既可以治療癃閉，又可以治療遺尿［10］。膀胱俞為膀胱背俞穴，為足太陽膀胱經(jīng)穴，通過經(jīng)絡(luò)可使膀胱及尿道肌產(chǎn)生興奮，有收縮作用，尿液自動排出［11］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，電針膀胱的不同特定穴對膀胱內(nèi)壓的影響不同，電針委中、中極和膀胱俞均使膀胱壓力升高，膀胱俞優(yōu)于中極和委中，中極與委中差異無統(tǒng)計學(xué)意義。電針膀胱的不同特定穴對膀胱組織ATP濃度的影響也不同，中極與委中對膀胱組織ATP濃度的影響明顯大于膀胱俞，但二者之間無顯著性差異。因此，從膀胱內(nèi)壓來看，膀胱俞效果較好，有利于急性尿潴留的及時排尿;而委中和中極有利于膀胱組織ATP濃度的升高，對ATP活性下降的膀胱組織有明顯的改善作用。

本實(shí)驗(yàn)對膀胱的特定穴與膀胱的相關(guān)性作了探索性研究，也為針灸治療急性尿潴留機(jī)制研究打下基礎(chǔ)，同時為臨床治療急性尿潴留優(yōu)選穴位提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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