劉起勝

(湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，湖南 株洲 412012)

細胞核增殖抗原(Ki67)、凋亡抑制蛋白(Survivin)的異常表達與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，但兩者在原發(fā)性肝細胞癌(HCC)的發(fā)生、發(fā)展中是否有相關(guān)性，目前尚無定論。2001年1月～2010年12月，我們采用免疫組化SP法檢測了Survivin、Ki67在HCC組織中的表達，旨在進一步探討HCC的發(fā)生機制。

1 材料與方法

1.1 材料 收集我院手術(shù)切除的HCC組織標(biāo)本60份(腫瘤組)，患者男37例，女23例，年齡23～70(46.43±11.78)歲;均經(jīng)病理證實且未行化療、放療和免疫治療。另取正常肝組織標(biāo)本20份作為正常組(肝破裂切除及尸檢標(biāo)本)。兩組一般資料無統(tǒng)計學(xué)差異。DAB顯色試劑盒和S-P試劑盒，兔抗人Survivin、鼠Ki67抗原、SP試劑及DAB顯色試劑盒。

1.2 Ki67、Survivin表達檢測 采用免疫組化 SP法。實驗步驟按試劑盒說明進行操作，以3%H2O2室溫孵育5～10min除去內(nèi)源性過氧化物酶的活性，微波抗原修復(fù)，常規(guī)免疫組化標(biāo)記。已知陽性切片作陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):在組織切片中，以試劑盒中陽性片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。Ki67以細胞核著棕褐色顆粒為陽性，每張切片隨機觀察10個具有代表性的高倍視野，計數(shù)100個腫瘤細胞的陽性細胞數(shù)，以≤10%為(－)，＞10%的細胞著色為陽性［1］。Survivin定位于胞質(zhì)，少數(shù)胞核可同時染色。Survivin均以腫瘤細胞出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達。根據(jù)陽性腫瘤細胞占腫瘤細胞總數(shù)的比例判定陰陽性及其程度:陽性細胞數(shù)≤10%為陰性( －)，＞10%為陽性［2］。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗，兩變量之間采用Spearman等級相關(guān)分析，以P≤0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ki67、Survivin表達 腫瘤組及正常組Ki67陽性率分別為 76.7%(46/60)、30.0%(6/20)，Survivin 陽性率分別為 78.3%(47/60)、25.0%(5/20)，P 均 ＜0.01。

2.2 Ki67、Survivin表達水平與HCC病理參數(shù)的關(guān)系 見表1。

表1 Ki67、Survivin表達水平與HCC病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 相關(guān)性分析 HCC組織中Ki67與Survivin表達呈正相關(guān)(r=0.566，P ＜0.01)。

3 討論

Survivin蛋白是迄今發(fā)現(xiàn)最強的凋亡抑制因子，Survivin蛋白的表達與多種腫瘤的生物學(xué)(或)疾病分期有關(guān)［3］，mRNA原位雜交和免疫組化結(jié)果表明，Survivin在肺癌、結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤中均有過表達，陽性表達率為30% ～100%［4］。本研究腫瘤組Survivin陽性率明顯高于正常組，提示Survivin參與HCC的發(fā)生、發(fā)展，其可能是參與抑制惡性腫瘤細胞的凋亡過程中的重要因素。本研究顯示，Survivin在肝細胞癌組織中的表達與患者性別、年齡均無關(guān)聯(lián)，與癌栓形成及腫瘤轉(zhuǎn)移、包膜侵犯有關(guān)聯(lián)。眾多學(xué)者認為，癌栓形成、腫瘤轉(zhuǎn)移、包膜侵犯可以代表肝癌侵襲和轉(zhuǎn)移程度和時效，Survivin陽性表達與他們相關(guān)，說明這種陽性表達可能與肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)，但具體機制仍待進一步研究。

Ki67抗原是研究細胞增殖性的重要指標(biāo)，Ki67抗原表達可反映腫瘤細胞增殖活性，與惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后高度相關(guān)［5］。Ki67的檢測已被廣泛用于反映腫瘤細胞增殖速度和預(yù)測腫瘤預(yù)后［6～8］。本研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤組中Ki67陽性率明顯高于正常組，Ki67在肝細胞癌組織中的表達與患者性別、年齡均無關(guān)，與包膜侵犯、癌栓形成及腫瘤轉(zhuǎn)移均呈顯著正相關(guān)。提示腫瘤組乳腺癌細胞的增殖活性高。并支持Ki67可作為反映乳腺癌細胞增殖活性和判斷其生物學(xué)行為的一個指標(biāo)。本研究還發(fā)現(xiàn)，Ki67和Survivin在肝細胞癌組織表達具有一致性，由此推測，其作為均與細胞增殖相關(guān)的分子，在癌細胞增殖過程中均不同程度地發(fā)揮了作用。

總之，聯(lián)合檢測Ki67和Survivin可能有助于對肝細胞癌惡性程度的判定及侵襲轉(zhuǎn)移能力的評估，進而為肝細胞癌的預(yù)后判斷和合理治療提供參考依據(jù)。

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