練高建， 楊 倩

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京210095;2.南華大學(xué) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部，湖南 衡陽421001)

半胱胺因能耗竭動(dòng)物體內(nèi)的生長抑素(Somatostatin，SS)已成為促進(jìn)動(dòng)物生長的飼料添加劑，廣泛用于畜牧生產(chǎn)中［1，2］.有研究報(bào)道，在添加半胱胺耗竭小腸粘膜中SS 的基礎(chǔ)上，通過消化道進(jìn)行粘膜免疫可增加小腸粘膜中sIgA 及iIEL 陽性細(xì)胞數(shù)量，有效地增強(qiáng)小腸局部粘膜免疫力［3］. 半胱胺是否可以通過耗竭血漿中的SS，改變血液中IgA 含量，從而影響機(jī)體的系統(tǒng)免疫，值得進(jìn)一步研究.

本研究建立了ELISA 雙夾心法檢測血清中IgA 水平的變化，以探討半胱胺對血液中IgA 水平的影響.

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物免疫

84 只1日齡小公雞(AA 蛋雞，購自湯泉種雞場)，隨機(jī)分為4 組，每組21 只. 自由飲水，攝食.8日齡時(shí)首次免疫.第1 組為對照組，每只雞經(jīng)口腔注入Hank’s 營養(yǎng)液0.4 mL;第二組為雞新城疫免疫組(ND 組)，每只雞經(jīng)口腔注入新城疫Ⅳ系弱毒苗(JAAS 牧(2000)第003 號，購自江蘇農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所)0.4 mL;第三組為半胱胺組(CS 組)，每只雞經(jīng)口腔注入半胱胺稀釋液0.4 mL;第四組為半胱胺加新城疫免疫組(CN 組)，每只雞先經(jīng)口腔注入半胱胺稀釋液0.4 mL，此后再經(jīng)口腔注入雞新城疫Ⅳ系弱毒苗0.4 mL.雞新城疫Ⅳ系弱毒苗的劑量為常規(guī)劑量的4 倍.首免后14 d，第二、第四組再用雞新城疫Ⅳ系弱毒苗免疫一次，方法與劑量同首免.

1.2 取材

每組雞首免后分別于第21、28、35 d 各宰殺5只，收集血液，4 ℃冰箱放置至次日，然后離心分離血清收集，于－20 ℃冰箱保存.

1.3 兔抗雞IgA 抗體和鼠抗雞IgA 抗體的制備

按常規(guī)方法用純化的雞IgA 按常規(guī)方法分別免疫兔和豚鼠，瓊擴(kuò)實(shí)驗(yàn)效價(jià)達(dá)1∶32 采血，制備兔抗雞IgA 抗體和鼠抗雞IgA 抗體.

1.4 ELISA 雙夾心法檢測血液中IgA 抗體含量

鼠抗雞IgA 抗體包被聚乙烯微量反應(yīng)板(1∶50)，4 ℃冰箱過夜，取出甩去液體，洗滌3 ×3 min.加入1%BSA 封閉，于濕盒中37 ℃2.5h. 洗滌3 ×3 min.分別加入1∶2 待檢血清，陽性參考血清和陰性參考血清，于濕盒中37 ℃1 h.洗滌3 ×3 min.加入兔抗雞IgA 抗體(1∶80)，于濕盒中37 ℃1 h. 洗滌3 ×3 min. 加入酶標(biāo)記的羊抗兔IgG 抗體(1 ∶1 000)，于濕盒中37 ℃3h.洗滌3 ×3 min 后加底物溶液100 μL，室溫下5 ～10 min，每孔加入50 μL 終止劑，酶標(biāo)儀自動(dòng)打印結(jié)果.

1.5 數(shù)據(jù)處理

全部數(shù)據(jù)采用Statistics 和Microsoft Excel 軟件處理.

2 結(jié) 果

首免后第三周，新城疫組雞的IgA 水平與對照組比較極顯著增加(P ＜0.01);而半胱胺Ⅰ組和半胱胺Ⅱ組與新城疫組相比又呈極顯著增加(P ＜0.01);半胱胺Ⅰ組IgA 水平比半胱胺Ⅱ組顯著增加(P ＜0.05).首免后第四周，新城疫組的IgA 水平與對照組比較差異不顯著;但與半胱胺Ⅰ組比較差異極顯著(P ＜0.01)，新城疫組與半胱胺Ⅱ組比較差異顯著(P ＜0.05);半胱胺Ⅰ組和半胱胺Ⅱ組與對照組比較，IgA 水平均呈極顯著增加(P ＜0.01);首免后第五周，盡管三個(gè)試驗(yàn)組之間IgA 水平無明顯差異，但均保持比對照組有極顯著高的水平(P ＜0.01)(圖1).

圖1 半胱胺對血液中IgA 水平的影響Fig.1 The influence of cysteamine on the IgA level in blood

3 討 論

機(jī)體中IgA 有兩種存在形式:一種是分泌型IgA(SIgA);另一種是血清型IgA(mIgA). 分泌型IgA 為多聚體，是由呼吸道、消化道、泌尿生殖道等處的粘膜固有層中的漿細(xì)胞產(chǎn)生，然后與上皮細(xì)胞產(chǎn)生的糖蛋白分泌片連接完整的SIgA，排至粘膜表面發(fā)揮其免疫作用.血清型IgA 為IgA 單體，主要是由腸系膜淋巴組織中的漿細(xì)胞所分泌的，具有多種抗體活性［4］.

血清中免疫球蛋白含量是反映全身免疫水平或免疫應(yīng)答水平的重要指標(biāo).粘膜局部的SIgA 抗體水平是否與血液中的IgA 水平有關(guān)目前尚有爭議.有研究證明消化道粘膜免疫能引起血液中IgA 水平的升高，血液中IgA 濃度可以反應(yīng)腸道分泌物中特異IgA 的水平，血液IgA 和粘膜局部SIgA 存在密切的關(guān)系［5］.血液中的IgA 單體除了由腸系膜淋巴組織中的漿細(xì)胞分泌外，小腸固有膜中也有少量漿細(xì)胞產(chǎn)生IgA 單體，作為血清型IgA 進(jìn)入到血液中［6］.試驗(yàn)表明，消化道粘膜免疫可使小腸粘膜中sIgA 陽性細(xì)胞數(shù)量大量增加［3，7］，從而提高了動(dòng)物的局部粘膜免疫力.從本試驗(yàn)結(jié)果可以看出消化道粘膜免疫也可提高血液中IgA 和新城疫血凝抑制抗體的水平(IgG).進(jìn)一步說明粘膜免疫不僅刺激局部粘膜產(chǎn)生免疫應(yīng)答，可引起全身體液免疫反應(yīng).

SS 是一種腦腸肽，除了可以抑制生長激素的釋放外，還具有廣泛的免疫抑制作用. 在免疫反應(yīng)過程中SS 不僅能抑制T 淋巴細(xì)胞的活動(dòng)，還可抑制免疫球蛋白的合成，特別是對IgA 的合成抑制作用可達(dá)20 ～50%［8］.半胱胺作為一種SS 耗竭劑可以降低動(dòng)物血漿中SS 水平.本實(shí)驗(yàn)在應(yīng)用半胱胺的基礎(chǔ)上進(jìn)行了消化道粘膜免疫，結(jié)果血清中IgA 含量比只用新城疫弱毒苗的明顯升高，而且持續(xù)時(shí)間較長，表明血清中IgA 受半胱胺的影響較大，這與小腸中IgA 細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致.因此，半胱胺能夠通過減低血漿中SS 的水平增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體的系統(tǒng)免疫力，有希望發(fā)展成為通過神經(jīng)內(nèi)分泌途徑發(fā)揮作用的一種粘膜免疫佐劑，在預(yù)防傳染病中應(yīng)用.

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［2］王艷玲，韓正康.半胱胺對肉用仔雞增重和生長抑素、β-內(nèi)啡肽含量的影響［J］. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1993，16(Z):5-8.

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［4］石美鑫，熊汝成，李鴻儒，等. 實(shí)用外科學(xué)(上冊)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1992:718.

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［6］成令忠，鐘翠平，蔡文琴.現(xiàn)代組織學(xué)［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2003.

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