莫迎

(南寧食品藥品檢驗(yàn)所，530001)

裸花紫珠為馬鞭草科植物裸花紫珠(CallicarpanudifloraHook.et Arn.)的干燥葉，被《中華人民共和國(guó)藥典》1977年版收載，以后歷版《中華人民共和國(guó)藥典》均未收載。目前裸花紫珠單味制劑在臨床上主要用于抗炎、止血，應(yīng)用較廣的劑型有薄膜衣片、分散片、膠囊、栓劑等，國(guó)內(nèi)研究該藥多集中在總黃酮類(lèi)[2]、木犀草素[3-5]、熊果酸[6-7]、齊墩果酸[8]等方面，而測(cè)定該藥中毛蕊花糖苷含量的研究筆者尚未見(jiàn)報(bào)道。筆者在本研究以高效液相色譜法測(cè)定裸花紫珠分散片、裸花紫珠片、裸花紫珠膠囊中毛蕊花糖苷的含量，以期為科學(xué)評(píng)價(jià)裸花紫珠制劑質(zhì)量提供新的參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器LC-2010AHT高效液相色譜儀(日本島津)，紫外檢測(cè)器，LCsolution色譜工作站。

1.2 試藥毛蕊花糖苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):111530-200505，含量測(cè)定用)，乙腈(色譜純)，磷酸(色譜純)，水(超純水)，其余試劑均為分析純。裸花紫珠分散片(成都華宇制藥有限公司，批號(hào):091008，091201，規(guī)格:每片0.5 g，含干浸膏0.25 g)、裸花紫珠片(海南九芝堂有限公司，批號(hào):100700，800490，規(guī)格:每片含干浸膏0.5 g)、裸花紫珠膠囊(江西杏林白馬藥業(yè)有限公司，批號(hào):20100101，20110202，規(guī)格:每粒0.3 g，含干浸膏0.2 g)均為南寧食品藥品檢驗(yàn)所抽驗(yàn)及市售藥品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱:Shimadzu vp-ods(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈-0.5%磷酸溶液(18∶82);流速:1.0 mL·min－1;檢測(cè)波長(zhǎng):332 nm;柱溫:35℃;進(jìn)樣量10 μL;理論板數(shù)按毛蕊花糖苷計(jì)不低于5 000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取毛蕊花糖苷對(duì)照品9.98 mg，置10 mL量瓶，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液貯備液。精密量取貯備液1 mL至20 mL量瓶，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備取裸花紫珠分散片20片，裸花紫珠片20片(除去包衣)，裸花紫珠膠囊(10粒)內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，分別取0.5，0.1，0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇溶液50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，用50%甲醇補(bǔ)足質(zhì)量，搖勻，過(guò)孔徑0.45 μm濾膜，作為供試品溶液。色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 4種溶液HPLC圖

2.4 線性關(guān)系考察分別取9.98，29.94，49.90，69.86，89.92 μg·mL-1對(duì)照品溶液進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸，回歸方程Y=1.202 1×106X－9 486，r=0.999 8。表明毛蕊花糖苷在0.1～0.9 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)取裸花紫珠片(批號(hào):100700)供試品溶液1份，重復(fù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算得RSD為0.96%。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取裸花紫珠分散片、裸花紫珠片、裸花紫珠膠囊樣品，分別按供試品溶液制備方法各平行制備6份溶液，測(cè)定毛蕊花糖苷含量，結(jié)果其含量RSD分別為1.81%，1.05%和1.29%。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取重復(fù)性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下供試品溶液，分別于0，5，10，16，24 h測(cè)定含量，結(jié)果RSD分別為0.95%，0.77%，0.71%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取裸花紫珠分散片(批號(hào):091201)、裸花紫珠片(批號(hào):100700)、裸花紫珠膠囊(批號(hào):20100101)樣品各6份，分別精密加入1.002 8 mg·mL－1對(duì)照品溶液適量，揮干溶劑，按供試品溶液制備方法各制備供試品溶液6份，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1～3。裸花紫珠分散片中毛蕊花糖苷平均加樣回收率98.68%，RSD=1.97%;裸花紫珠片中毛蕊花糖苷平均加樣回收率99.43%，RSD=1.95%;裸花紫珠膠囊毛蕊花糖苷平均加樣回收率100.09%，RSD=1.60%。

表1 裸花紫珠分散片中毛蕊花糖苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 裸花紫珠片中毛蕊花糖苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 裸花紫珠膠囊中毛蕊花糖苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定取裸花紫珠分散片、裸花紫珠片、裸花紫珠膠囊各2批，按供試品溶液的制備方法依法操作，分別測(cè)定3種制劑中毛蕊花糖苷的含量，按上述色譜條件進(jìn)樣10 μL，以外標(biāo)法計(jì)算毛蕊花糖苷含量，結(jié)果見(jiàn)表4。

3 討論

毛蕊花糖苷為極性化合物，筆者曾選用甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果不同濃度的乙醇提取效果不佳且雜質(zhì)干擾多，而50%甲醇提取效果較佳。通過(guò)比較加熱回流、超聲處理樣品兩種方式，結(jié)果提取效果無(wú)明顯差異，從節(jié)約能源角度出發(fā)，采用超聲處理。

表4 樣品測(cè)定結(jié)果

紫珠制劑為臨床各科的常用止血藥物[9]，目前裸花紫珠制劑標(biāo)準(zhǔn)大部分都是采用分光光度法測(cè)定總黃酮類(lèi)含量，專屬性差。從不同生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的裸花紫珠劑型中毛蕊花糖苷含量測(cè)定結(jié)果來(lái)看，明顯存在較大差異，薄膜衣片含量較高，分散片含量較低，相差十多倍，提示藥材質(zhì)量及生產(chǎn)工藝都有可能影響制劑質(zhì)量。筆者在本實(shí)驗(yàn)建立的含量測(cè)定方法專屬性強(qiáng)，為裸花紫珠藥材及其制劑的活性成分研究提供了新的理論依據(jù)。

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