鄧 茜綜述，肖影群審校

（1.南昌大學(xué)附屬感染醫(yī)院肝病病理研究室，南昌 330002；2.南昌大學(xué)研究生院醫(yī)學(xué)部2009級(jí)，南昌 330006）

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cell，Treg）是機(jī)體內(nèi)具有免疫抑制功能的一類T細(xì)胞亞群。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在包括感染、腫瘤、自身免疫性疾病等在內(nèi)的多種疾病有密切關(guān)系［1－3］。CD4＋CD25＋Treg是一群專職Treg［4］，是多種疾病研究的熱點(diǎn)之一。本文主要就CD4＋CD25＋Treg的來(lái)源、分類、功能、免疫表型及其在肝病領(lǐng)域的研究進(jìn)行綜述。

1 Treg的來(lái)源和分類

Treg按是否來(lái)源于胸腺可分為在胸腺內(nèi)分化生成的自然調(diào)節(jié)T細(xì)胞（nTreg），如CD4＋CD25＋Treg和在胸腺外誘導(dǎo)產(chǎn)生的適應(yīng)性調(diào)節(jié)T細(xì)胞（aTreg或iTreg），如Tr1和Th3；此外，還有CD8＋Treg、NKT細(xì)胞等，它們與免疫耐受和自身免疫性疾病有關(guān)［5－6］。

1.1 CD4＋CD25＋Treg的功能 CD4＋CD25＋Treg是Sakaguchi等［7］在1995年發(fā)現(xiàn)的，既可以在胸腺內(nèi)分化生成，也可以在外周誘導(dǎo)產(chǎn)生［5］，其主要作用是抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞的功能，抑制CD4＋T細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞的增殖，發(fā)揮免疫自穩(wěn)功能，保持免疫耐受與免疫反應(yīng)的平衡［8］。如果CD4＋CD25＋Treg的數(shù)量、比例或功能發(fā)生一定的變化則易引起多種與免疫有關(guān)的疾病，如炎癥、腫瘤以及自身免疫性疾病等。

1.2 CD4＋CD25＋Treg的免疫表型 根據(jù)CD4＋CD25＋Treg的特異性免疫表型可將其與其他淋巴細(xì)胞亞群區(qū)分，以便單獨(dú)對(duì)CD4＋CD25＋Treg進(jìn)行研究，免疫表型越特異，分選的CD4＋CD25＋Treg越純，研究結(jié)果就越可信。CD4＋CD25＋Treg的免疫表型主要有CD4、IL－2Rα鏈即CD25、叉頭翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子Foxp3、糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子受體（glucocorticoid－inducible tumor necrosis factor receptor，TGFGITR）、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（cytotoxie T lymphocyte－associated antigen－4，CTLA－4）、CD45RO、CD62L、Neuropilin－1（Nrp1）、Toll－like receptors（TLRs）、CD103及多種趨化因子受體（CCR），另外還低表達(dá)CD45RA和CD127，可用 CD45RAlow、CD127low表示［8］。

1.3 CD25 人的CD4＋T細(xì)胞中有5%～10%表達(dá)CD25，CD8＋T細(xì)胞中有不到1%的表達(dá) CD25［8］，因此，CD25不是CD4＋CD25＋Treg的特異性免疫表型。但有些學(xué)者認(rèn)為CD25high是CD4＋CD25＋Treg的較為特異的免疫表型，并認(rèn)為CD4＋CD25high Treg才具有免疫抑制作用［9］。

1.4 Foxp3 Foxp3是CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞特異的免疫標(biāo)記物，也是決定CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育、功能發(fā)揮的關(guān)鍵基 因 （位 于 X 性 染 色 體 上 ）［10－11］。Foxp3 缺 失 可 導(dǎo) 致CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞生成障礙而引起自身免疫性疾病，F(xiàn)oxp3過度表達(dá)則會(huì)導(dǎo)致免疫耐受或免疫缺陷［12－13］。有研究表明，轉(zhuǎn)染和表達(dá)Foxp3基因的CD4＋CD25－T細(xì)胞可以使其成為具有調(diào)節(jié)功能的 CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞［11，14］。目前，大部分學(xué)者聯(lián)合使用CD4、CD25和Foxp3組合分選出CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg亞群進(jìn)行相關(guān)的研究。但是由于Foxp存在于細(xì)胞內(nèi)，分選CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg亞群要進(jìn)行胞內(nèi)染色，會(huì)破壞細(xì)胞膜，分選后的細(xì)胞不能再培養(yǎng)而用于研究。

1.5 CD127low／－最近，又有一些學(xué)者提出CD127low／－也是CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞較特異的免疫表型。Liu等［15］的研究證明CD127low／－的表達(dá)與Foxp3＋的表達(dá)有很好的相關(guān)性，聯(lián)合使用CD4、CD25和CD127組合分選出的Treg的純度比其他組合（如CD4、CD25和Foxp3組合）的高，有很強(qiáng)的免疫抑制功能。而且，分選出的CD4＋CD25＋CD127low／－Treg沒有破壞細(xì)胞，可以再培養(yǎng)研究?，F(xiàn)在已經(jīng)有不少研究使用該組合分選Treg亞群進(jìn)行研究。

2 CD4＋CD25＋Treg與肝臟疾病

2.1 CD4＋CD25＋Treg與病毒性肝炎 CD4＋CD25＋Treg與病毒性肝炎的關(guān)系是目前的該領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。研究發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎患者外周血中CD4＋CD25＋Treg的數(shù)量高于健康人和恢復(fù)期患者，與病毒載量成正比［16－17］。Franzese等［18］通過體外實(shí)驗(yàn)證明CD4＋CD25＋Treg通過細(xì)胞間接觸和（或）細(xì)胞因子途徑，調(diào)節(jié)乙肝病毒（HBV）特異性CD8＋效應(yīng)T細(xì)胞的增殖和功能發(fā)揮免疫抑制效應(yīng)，使抗病毒的免疫反應(yīng)低下，導(dǎo)致病程慢性化，并指出這種情況同時(shí)出現(xiàn)在慢性乙型病毒性肝炎和慢性丙型病毒性肝炎患者中。此外，CD4＋CD25＋Treg也可以通過誘導(dǎo)和維持機(jī)體免疫耐受使慢性乙型病毒性肝炎患者體內(nèi)病毒難以完全清除，病程慢性化［19］。

2.2 CD4＋CD25＋Treg與肝細(xì)胞癌 CD4＋CD25＋Treg與肝細(xì)胞癌的關(guān)系也是現(xiàn)階段研究熱點(diǎn)之一。Sasaki等［20］運(yùn)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)164例原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者的手術(shù)切除標(biāo)本癌組織浸潤(rùn)的Foxp3＋Treg數(shù)量，發(fā)現(xiàn)這些患者癌組織浸潤(rùn)的Foxp3＋Treg數(shù)量較對(duì)照組顯著增高且與患者血清AFP值呈正相關(guān)，F(xiàn)oxp3＋Treg數(shù)量多者比少者的5年生存率低，并指出Foxp3＋Treg數(shù)量高是原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者的獨(dú)立預(yù)后不良因素［20］。Ju等［21］運(yùn)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)207例原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者的術(shù)后癌旁組織中浸潤(rùn)的Foxp3＋Treg數(shù)量的研究表明：癌旁組織中浸潤(rùn)的Foxp3＋Treg數(shù)量多者肝內(nèi)轉(zhuǎn)移可能性大。什么原因?qū)е赂渭?xì)胞癌組織和外周浸潤(rùn)的CD4＋CD25＋Treg數(shù)量增高呢？可能的原因有：（1）認(rèn)為增多的CD4＋CD25＋Treg來(lái)自胸腺外，即腫瘤誘導(dǎo)CD4＋CD25＋Treg增殖；（2）認(rèn)為增多的CD4＋CD25＋Treg來(lái)自胸腺，即 CD4＋CD25＋Treg在胸腺內(nèi)對(duì)腫瘤抗原刺激發(fā)生增殖后，遷移至外周腫瘤部位發(fā)揮作用。至今尚無(wú)定論是那種原因?qū)е翪D4＋CD25＋Treg增 殖。Beyer和 Schultze［2］認(rèn) 為 CD4＋CD25＋Treg的增殖的可能原因兩者都有：包括經(jīng)CCL22／CCR4途徑吸引CD4＋CD25＋Treg至腫瘤部位和經(jīng)PGE2或H－ferritin途徑誘導(dǎo)CD4＋CD25＋Treg增殖，進(jìn)而抑制主要由腫瘤特異性效應(yīng)T細(xì)胞（腫瘤反應(yīng)性淋巴細(xì)胞）介導(dǎo)的抗腫瘤免疫反應(yīng)，降低機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視作用，導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)、進(jìn)展。

Treg如何被吸引到腫瘤部位并增殖的一種說(shuō)法是：可能是腫瘤細(xì)胞和腫瘤浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞釋放CCL22和H－ferritin導(dǎo)致CCR4＋的天然Treg在腫瘤微環(huán)境中積累；在PEG2誘導(dǎo)的致耐受性樹突狀細(xì)胞（DC）作用下，天然的Treg分化、增殖成為記憶性Treg，記憶性Treg與致耐受性樹突狀細(xì)胞一起抑制效應(yīng)性T細(xì)胞的產(chǎn)生，導(dǎo)致抗腫瘤免疫耐受。

2.3 CD4＋CD25＋Treg與肝衰竭 肝衰竭是多種因素引起的嚴(yán)重肝臟損害，表現(xiàn)為肝臟合成、解毒、排泄和生物轉(zhuǎn)化等功能發(fā)生嚴(yán)重障礙或失代償。在我國(guó)引起肝衰竭的主要病因是乙型肝炎病毒引起的肝炎、肝硬化和肝癌。如上所述，病毒性肝炎和肝細(xì)胞癌都與CD4＋CD25＋Treg數(shù)量和功能的變化有密切關(guān)系，那么，CD4＋CD25＋Treg在肝衰竭中是否也有重要作用呢？Wang等［22］的研究表明：慢性乙肝患者外周血中CD4＋CD25＋Treg占CD4＋T細(xì)胞的比例顯著高于健康人；慢性乙肝病毒感染的肝衰竭患者外周血中CD4＋CD25＋Treg占CD4＋T細(xì)胞的比例明顯低于慢性乙肝患者的。同時(shí)，他們通過CD4＋CD25＋Treg體外抑制實(shí)驗(yàn)證明肝衰竭患者體內(nèi)的高水平HMGB1通過減少TregFoxp3的表達(dá)來(lái)抑制Treg的免疫活性，并提出對(duì)抗HMGB1和免疫調(diào)節(jié)是治療肝衰竭可行方案的假設(shè)，但有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

2.4 CD4＋CD25＋Treg與肝移植 各種原因引起的肝臟疾病發(fā)展到晚期危及生命時(shí)，肝移植是有效的治療手段。移植后的排斥反應(yīng)多為發(fā)生在1周以后的急性排斥反應(yīng)，由免疫系統(tǒng)介導(dǎo)，是患者移植后生存期的重要影響因素，而發(fā)生在1周內(nèi)的排斥反應(yīng)較少。Demirkiran等［23］探究了供者肝臟中CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞在肝移植后的作用，發(fā)現(xiàn)供者肝臟中的CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞的比例比健康人血液中的高；在單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR）中，發(fā)現(xiàn)供者肝臟灌注液中的CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞有抑制供者和受者T細(xì)胞的增殖和干擾素的產(chǎn)量；肝移植后的1周內(nèi)受者血液中有高達(dá)5%的CD4＋CD25＋Treg來(lái)自供者肝臟，但此后受者血液中來(lái)自供者肝臟的這部分有抑制免疫反應(yīng)的細(xì)胞明顯減少。作者認(rèn)為，這部分細(xì)胞對(duì)肝移植后早期（1周內(nèi)）的免疫耐受有重要意義，以致不發(fā)生排斥反應(yīng)。不過，通過這個(gè)研究或許可以推測(cè)1周后有免疫抑制活性的Treg的減少是發(fā)生急性排斥反應(yīng)的可能因素之一。這也為防治肝移植后的排斥反應(yīng)提供了一些理論依據(jù)和新思路。

2.5 CD4＋CD25＋Treg與自身免疫性肝病 自身免疫性肝病是一組與自身免疫有關(guān)的慢性肝病，主要包括自身免疫性肝炎（AIH）和原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）。有研究表明，AIH患者外周血中CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞的比例和功能比健康者的降低，從而不能有效抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞，導(dǎo)致自身免疫疾病的發(fā)生［24－25］。Lan等［26］也發(fā)現(xiàn) PBC患者體內(nèi)的 CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞的比例比健康者的降低。Park等［27］的研究表明PBC患者CD4＋CD25＋Treg無(wú)能與Foxp3基因IVS9＋459片段的單核苷酸多態(tài)性有關(guān)。這可能是自身免疫性肝病患者CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞數(shù)量和功能降低的機(jī)制，但有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，CD4＋CD25＋Treg是一群專職 Treg［4］，具有免疫低反應(yīng)性和免疫抑制的功能，該功能對(duì)多種疾病的發(fā)生發(fā)展有重要作用，且具有普遍的一般作用規(guī)律：即維持免疫耐受與免疫反應(yīng)的平衡。當(dāng)CD4＋CD25＋Treg數(shù)量、比例和功能降低時(shí)，機(jī)體免疫耐受減弱和（或）免疫反應(yīng)增強(qiáng)，可致炎癥、自身免疫性疾病、排斥反應(yīng)等，反之，機(jī)體免疫耐受增強(qiáng)和（或）免疫反應(yīng)下降，可致感染持續(xù)，但可能減輕或減少自身免疫性疾病和移植物排斥反應(yīng)的發(fā)生。在上述肝臟疾病中除了這些普遍的作用機(jī)制外，還存在一些具體或特定的作用機(jī)制：例如在慢性乙型病毒性肝炎中CD4＋CD25＋Treg與HBV特異性CD8＋效應(yīng)T細(xì)胞通過CTLA－4與HLA－A2－限制性 HBV抗原決定簇的結(jié)合，調(diào)節(jié)HBV特異性CD8＋效應(yīng)T細(xì)胞的增殖和功能，發(fā)揮免疫抑制效應(yīng)；在慢性乙型病毒感染導(dǎo)致的肝衰竭患者，Treg的免疫活性降低則與其體內(nèi)高水平HMGB1有關(guān)；在肝細(xì)胞癌患者中可能經(jīng)CCL22／CCR4途徑或（和）經(jīng)PGE2或H－ferritin途徑誘導(dǎo)CD4＋CD25＋Treg聚集增殖，從而抑制主要由肝癌細(xì)胞特異性效應(yīng)T細(xì)胞介導(dǎo)的抗肝癌細(xì)胞免疫反應(yīng)；對(duì)于自身免疫性肝病患者則可能與Foxp3基因IVS9＋459片段的單核苷酸多態(tài)性改變有關(guān)的CD4＋CD25＋Treg無(wú)能有關(guān)。然而，因機(jī)體調(diào)控CD4＋CD25＋Treg的機(jī)制復(fù)雜多樣，這些機(jī)制僅僅是眾多機(jī)制的一部分，至今確切而全面的機(jī)制扔有待進(jìn)一步研究。不過，相信謎底終會(huì)揭開，到時(shí)，當(dāng)今的難以治療的肝臟疾病，如慢性乙型病毒肝炎、肝臟腫瘤以及自身免疫性肝病等的治療將會(huì)迎來(lái)新的紀(jì)元。

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