侯生庫

（青海省果洛州瑪沁縣獸醫(yī)站，青海 瑪沁814000）

口蹄疫（FMD）是一種高度接觸性傳染病，對(duì)國際貿(mào)易具有深遠(yuǎn)的影響，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）和聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）將口蹄疫列為A類烈性傳染病之首?？刂坪拖麥鏔MD策略包括疫苗免疫和屠宰可疑畜群?？梢尚笕壕褪潜籉MDV感染動(dòng)物和帶毒動(dòng)物。只有將感染動(dòng)物和隱性帶毒動(dòng)物與疫苗免疫動(dòng)物加以區(qū)分才能為FMD的控制和消滅提供科學(xué)的依據(jù)。3ABC－I－ELISA方法不但可以檢測隱性感染動(dòng)物而且可以區(qū)分感染動(dòng)物和免疫動(dòng)物。

1 材料與方法

1.1 待檢血清 血清來源地多年用口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型二價(jià)滅活疫苗春秋兩季注射成年牦牛。秋季注苗后21d采血高倍離心后提取血清，達(dá)日46份，久治30份。

1.2 檢測試劑 口蹄疫O型正向血凝抗原，批號(hào)：100408，來源于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。檢測牛血清專用的口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體檢測ELISA試劑盒，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所國家口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室研制，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號(hào)：2010012208。

1.3 檢測方法 按照青海省動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)培訓(xùn)班教材中的O型口蹄疫正向間接血凝試驗(yàn)中的操作進(jìn)行。按檢測牛血清專用的口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體檢測ELISA試劑盒使用說明書進(jìn)行。

2 檢測結(jié)果

2.1 正向間接血凝試驗(yàn) 在對(duì)照孔合格的前提下，待檢血清免疫抗體效價(jià)達(dá)到1∶32呈現(xiàn)“＋＋”凝集判定為免疫合格，血清合格率為100%。

2.2 3ABC抗體檢測ELISA試驗(yàn) 通過試驗(yàn)得到標(biāo)準(zhǔn)陰性血清OD值為0.488，標(biāo)準(zhǔn)陽性血清OD值為0.053 5。按照判定標(biāo)準(zhǔn)公式：樣品OD值＜0.2（陽性O(shè)D值－陰性O(shè)D值）＋陰性O(shè)D值（即0.140 3）為陰性；樣品OD值＞0.3（陽性O(shè)D值－陰性O(shè)D值）＋陰性O(shè)D值（即0.183 85）為陽性；它們之間為可疑。對(duì)76份為被檢血清OD值進(jìn)行了比對(duì)。結(jié)果共檢出陽性血清4份，可疑血清14份，陰性血清58份。

3 結(jié)果分析

用兩種試驗(yàn)檢測免疫牛血清76份，正向間接血凝試驗(yàn)血清免疫合格率100%，說明被檢血清來源的牛能夠抵御FMDV的侵襲，不再是帶毒動(dòng)物。3ABC抗體檢測ELISA試驗(yàn)檢出陽性血清4份，陽性率5.2%，可疑血清14份，說明有4份血清來源的牛已經(jīng)感染了FMDV或曾經(jīng)感染過FMDV并產(chǎn)生了抗體；其他陰性血清來源的牛已被進(jìn)行了疫苗預(yù)防，得到了合格的免疫抗體。

4 討論及建議

對(duì)正向間接血凝試驗(yàn)陽性率為100%，血清通過口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測試驗(yàn)，出現(xiàn)陽性血清4份，其原因：一是注射疫苗后感染了FMDV；二是長期注射疫苗且劑量過大，疫苗中殘留的非結(jié)構(gòu)蛋白抗體有所顯現(xiàn)；三是血清來源于感染FMDV后已消滅了病毒的動(dòng)物；四是動(dòng)物正處于隱性感染期。建議加強(qiáng)本地區(qū)檢疫防疫工作，排查FMDV的帶毒動(dòng)物，嚴(yán)防對(duì)傳染源留有死角。另一方面改進(jìn)血清學(xué)試驗(yàn)，使其能夠可靠地確定動(dòng)物是否已感染了FMD病毒，不管它們是否注射過疫苗。最好還應(yīng)當(dāng)能把感染后已經(jīng)消滅了病毒的動(dòng)物與形成持續(xù)性感染的動(dòng)物區(qū)分開。