李毅竦，唐 建，刁培淵，楊武寧，覃雪斌，何 瓊

(廣西獸藥監(jiān)察所，南寧 530001)

大黃產地和商品規(guī)格較多，正品價格為山大黃的3～4倍。部分獸藥生產企業(yè)對大黃與山大黃區(qū)別認識模糊，誤將山大黃入藥大黃制劑的情況時有發(fā)生。為鑒別制劑中的大黃與山大黃，本實驗室選用某企業(yè)報送的大黃末為供試品，進行了紙層析和硅膠薄層鑒別的實驗研究，現報告如下:

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 試藥 供試品:某獸藥生產企業(yè)大黃末報批樣品，登記號53201109529;大黃對照藥材:中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供，批號Z0040809;大黃酸對照品和土大黃苷對照品:中國藥品生物制品檢定所提供，批號分別為0757－9804和794－200103。

1.1.2 薄層板及濾紙 硅膠H薄層板為青島海洋化工廠生產，規(guī)格10 cm×10 cm，厚度0.20～0.25 mm;濾紙為杭州新華紙業(yè)有限公司產品，標準號GB∕T1914－2007。

1.1.3 試劑 化學試劑均為分析純。

1.2 實驗方法

1.2.1 紙層析鑒別 取供試品粉末0.2 g，加甲醇2 mL，溫浸10 min，放冷，上清液作為供試品溶液。另取大黃對照品藥材0.2 g，同法制成對照藥材溶液。再取土大黃苷對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。取供試品溶液及對照藥材溶液各5 μL、對照品溶液2 μL、對照藥材溶液(5 μL)加對照品溶液(2 μL)，分別點于同一濾紙上，以45﹪乙醇展開，取出，晾干，放置10 min，置紫外光燈(365 nm)下檢視［1］。

此鑒別方法是《中國獸藥典》收載的山大黃藥材質量標準的鑒別(1)，大黃藥材和大黃末質量標準把此方法的結果判斷改為不得顯持久的亮紫色熒光作為土大黃苷的檢查方法［1］。山大黃應檢出土大黃苷，大黃則不應檢出土大黃苷。為方便理解，本實驗在藥典的方法上增加大黃對照藥材、土大黃苷對照品和二者混合等三個供試品。

1.2.2 硅膠薄層鑒別 此鑒別方法是《中國獸藥典》收載的大黃藥材和單味制劑大黃末質量標準的鑒別(3)。取供試品粉末0.1 g，加甲醇20 mL，浸泡1 h，濾過，取濾液5 mL，蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，再加鹽酸1 mL，加熱回流30 min，立即冷卻，用乙醚分二次振搖提取，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取大黃對照藥材0.1 g，同法制成對照藥材溶液。再取大黃酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照中國獸藥典2010年版二部附錄32頁的薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各4 μL，分別點于同一硅膠H薄板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15∶5∶1)的上層液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視［1］。薄層圖上，大黃對照藥材應有蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃素甲醚和大黃酚五個斑點;山大黃通常不含大黃酸及蘆薈大黃素［2］。

2 結果

2.1 紙層析鑒別結果 紙層析結果顯示，大黃對照藥材無土大黃苷一樣持久的亮紫色熒光，而供試品大黃末和大黃對照藥材加土大黃苷對照品都有土大黃苷一樣的持久亮紫色熒光，表明大黃不含土大黃苷，大黃末報批樣品含土大黃苷，提示企業(yè)使用的大黃原料藥材為山大黃或混雜有山大黃。

2.2 硅膠薄層鑒別結果 供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的五個橙黃色熒光斑點，置氨蒸氣中熏后，斑點變?yōu)榧t色，表明供試品含大黃的大黃酸等五種成分。結合紙層析鑒別檢出土大黃苷的結果，認為大黃末報批樣品是大黃和山大黃的混合物。

3 分析與討論

實驗認為，山大黃含土大黃苷，大黃不含土大黃苷［2］，而土大黃苷在紫外光燈(365 nm)下顯持久容易觀察判斷的亮紫色熒光，是紙層析鑒別山大黃和大黃的要點。

本實驗也表明，大黃中摻混山大黃的樣品用《中國獸藥典》的硅膠薄層鑒別不能檢出山大黃。若企業(yè)的質檢員把檢查土大黃苷排除在常規(guī)檢查項目之外，則可能會漏檢大黃中參雜山大黃的情況。目前，生產、流通和使用單位的質量監(jiān)督常規(guī)檢驗項目僅有性狀、鑒別和含量測定，導致不管是單味制劑大黃末不按標準檢查土大黃苷，還是眾多的大黃復方制劑標準沒有土大黃苷檢查方法，都使摻混山大黃的大黃制劑置于獸藥監(jiān)管之外。

紙層析鑒別無分離功能，僅能把供試品展開以方便觀察到土大黃苷的亮紫色熒光。在復方中由于可能存在有熒光藥材的干擾，影響土大黃苷亮紫色熒光的判斷，用上述的紙層析鑒別檢查土大黃苷已不適用。2010年版《中國藥典》收載的三黃(大黃、鹽酸小檗堿、黃芩浸膏)片質量標準用薄層色譜法檢查土大黃苷［3］，提供了復方制劑中檢查土大黃苷的思路，該方法用硅膠G板分離供試品中土大黃苷后在對照品同板對照下檢查土大黃苷的存在，可有效避免復方中其他成分的熒光干擾而得到真實的結果，是鑒別復方制劑中大黃和山大黃可靠方法。

4 結論

制劑中藥材已粉碎成粉末或提取為浸膏，傳統(tǒng)藥工的大黃性狀鑒別已失去意義。用上述實驗的方法檢查土大黃苷簡單、準確，建議把檢查土大黃苷作為中獸藥制劑中大黃與山大黃鑒別的關鍵技術和方法，單味制劑用紙層析法，復方制劑參考2010年版《中國藥典》收載的三黃片質量標準用硅膠薄層色譜法;對已有檢查土大黃苷標準的制劑，要落實為必檢項目，對無檢查土大黃苷方法的復方制劑，其質量標準要考慮增加檢查土大黃苷。

［1］ 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典二○一○年版二部［S］.

［2］ 中國醫(yī)學科學院藥物研究所.中藥志［M］.第一冊第二版.人民衛(wèi)生出版社，1993.

［3］ 國家藥典委員會.中國藥典二○一○年版一部［S］.