劉家秀，許國瑩，徐 彬，王莉娟，潘繼承

(1淮陰衛(wèi)生高等職業(yè)技術(shù)學校，江蘇淮安 223300;2淮安市傳染病醫(yī)院;3江蘇省省級機關(guān)醫(yī)院)

長期以來，在乙型病毒性肝病(HB)的發(fā)病機制中，免疫應(yīng)答及細胞因子的作用一直受到國內(nèi)、外學者的廣泛關(guān)注。Th17細胞(Thelp cell 17)是一類新發(fā)現(xiàn)的效應(yīng)性CD+4Th細胞亞群，獨立于Th1和Th2［1］。其發(fā)現(xiàn)彌補了傳統(tǒng)的Th1/Th2模式在解釋疾病免疫病理機制中的局限性，成為近年來研究的熱點。研究發(fā)現(xiàn)，Th17細胞分泌的 IL-17、IL-17F、IL-21、IL-6、IL-22 和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等細胞因子參與了肝臟損傷及再生過程，在脂肪肝、自身免疫性肝病及肝臟腫瘤中發(fā)揮重要作用［2］。2010年1月～2011年6月，我們檢測了HB患者外周血IL-17、IL-22變化，并分析其與肝纖維化指標的關(guān)系，旨在為HB的診療提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 84例HB患者為2010年1月～2011年6月淮安市傳染病防治院門診和住院患者，男52例，女32例;年齡26～78歲，平均42.5歲。急性肝炎18例(急性肝炎組)，慢性肝炎26例(慢性肝炎組)，肝硬化24例(肝硬化組)，肝癌16例(肝癌組)。所有病例均符合2000年中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學分會制定的《病毒性肝炎防治方案》中的診斷標準［3］，并排除合并感染其他病毒性肝炎，排除心、腦、腎、肺等器官疾病及高血壓、糖尿病等。健康組為40例健康體檢者，其中男28例，女12例，年齡26～67，平均39.3歲。各組性別及年齡有可比性。

1.2 相關(guān)指標檢測 各組均取空腹靜脈分離血清，于－80℃保存，行以下指標檢測。

1.2.1 IL-17及 IL-22水平 IL-17檢測采用單克隆抗體夾心ELISA法，由全自動酶免分析儀測定結(jié)果，試劑盒由Sigma公司提供，嚴格按試劑說明書操作。血清IL-22檢測采用IL-22抗體(Santa Cruz，美國)包被于反應(yīng)板微孔，于4℃過夜;用含10 g/dL BSA的封閉液37℃封閉2 h，于每孔中加入待檢樣本并于37℃孵育2 h，洗滌后加入HRP標記的羊抗人IgG(Zymed Laboratories，美國)于37℃孵育1 h，加人TMB顯色液，采用酶聯(lián)儀450 nm波長進行比色分析，讀取A值，并與標準曲線比較進而獲取IL-22血清表達水平。

1.2.2 透明質(zhì)酸(HA)、層黏蛋白(LN)和Ⅳ型膠原蛋白(ⅣC)水平采用ELISA法測定，試劑盒由中科院上海細胞生物研究所提供。

1.2.3 總膽紅素(TBIL)和 γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶((γ-GT)水平 采用常規(guī)自動生化分析儀測定。

1.2.4 相關(guān)性分析 對IL-17及IL-22水平與ⅣC、LN和HA及肝癌組IL-22水平與TBIL、γ-GT水平的相關(guān)性進行分析。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS14.0軟件進行統(tǒng)計學處理。計量資料采用±s表示，均數(shù)間比較采用方差分析和t檢驗，相關(guān)性分析采用Spear-man線性相關(guān)分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 IL-17及IL-22水平 見表1。

表1 各組IL-17、IL-22水平比較(±s)

表1 各組IL-17、IL-22水平比較(±s)

注:與健康組比較，▲P ＜0.01;與急性肝炎組比較，#P ＜0.05;與慢性肝炎組比較，*P ＜0.05;與肝硬化組比較，△P ＜0.05

組別 n IL-17(ng/mL) IL-22(pg/mL)急性肝炎組 18 123.32±32.62▲△ 450.68±43.26▲△慢性肝炎組 26 106.63±35.21▲△ 530.14±24.23▲△肝硬化組 24 401.41 ±25.27▲#* 683.42 ±76.28▲#*肝癌組 16 1462.58 ±10.02▲#＊△ 824.53 ±64.20▲#＊△健康組 40 35.24±11.25#＊△ 384.32±86.83#＊△

2.2 ⅣC、LN、HA及TBIL、γ-GT水平 見表2。

2.3 相關(guān)性分析 IL-17、IL-22分別與HA、LN和ⅣC水平呈正相關(guān)，見表3;肝癌組 IL-22水平與TBIL、γ-GT 水平均呈正相關(guān)，r分別 =0.384、0.358，P 均 ＜0.05。

表2 各組ⅣC、LN、HA及TBIL、γ-GT水平比較(±s)

表2 各組ⅣC、LN、HA及TBIL、γ-GT水平比較(±s)

注:與健康組比較，▲P ＜0.05，與急性肝炎組比較，#P ＜0.05，與慢性肝炎組比較，*P ＜0.05，與肝硬化組比較，△P ＜0.05

組別 n ⅣC(ng/mL) LN(ng/mL) HA(ng/mL) TBIL(μmol/L) γ-GT(IU/L)急性肝炎組 18 106.21±21.70＊△ 98.46±10.12＊△ 98.54±31.25＊△ 112.31±15.34＊△ 76.14±21.02＊△慢性肝炎組 26 265.56 ±32.21▲#△ 122.24 ±12.10#△ 148.42 ±22.10▲#△ 68.64 ±22.13# 246.54 ±20.32#肝硬化組 24 450.68 ±52.27▲#* 348.20 ±76.28▲#* 368.39 ±13.27▲#* 70.28 ±31.22# 269.36 ±41.16#肝癌組 16 786.91 ±16.28▲#＊△ 753.45 ±20.15▲#＊△ 743.19 ±58.03▲#＊△ 116.46 ±32.24▲＊△ 501.26 ±42.38▲#＊△健康組 40 94.42 ±56.21 92.43 ±13.22 85.12 ±12.24 14.26 ±6.31 34.26 ±12.23

表3 IL-17、IL-22與ⅣC、LN和HA的相關(guān)性

3 討論

Th17細胞是2005年新發(fā)現(xiàn)的第三種效應(yīng)性Th細胞亞群［4］。Thl7細胞的提出是對Th1和Th2細胞介導(dǎo)的組織損傷假說的第一次修訂，具有里程碑意義［5］。在肝臟相關(guān)疾病中，Th17細胞分泌的IL-17、IL-17F、IL-21、IL-6、IL-22 等細胞因子通路與肝臟損傷的密切關(guān)系得到越來越多的證據(jù)支持。

IL-17是Th17細胞分泌的重要細胞因子之一。具有促炎癥作用，可誘導(dǎo)促炎細胞因子(如IL-6、TNF)、趨化因子和基質(zhì)金屬蛋白酶表達，引起組織細胞浸潤和破壞;亦參與中性粒細胞的增殖、成熟和趨化，對T細胞的活化起協(xié)同刺激作用。IL-22是Th17細胞分泌的另一重要細胞因子，屬IL-10家族成員。在Th17細胞中，IL-22與IL-17一起分泌，有研究顯示，IL-22與IL-17共同表達可以認為是自身攻擊性T細胞的標志，兩者協(xié)同作用促進炎性發(fā)生造成組織損傷［6］;但另有研究顯示，IL-22在急性肝損傷中起保護作用［7］。Th17細胞正是通過其分泌的多種細胞因子參與宿主防御、感染、腫瘤、自身免疫性疾病、移植排斥等病理過程。

本研究結(jié)果顯示，隨著肝病的進展、肝損害嚴重程度加重，外周血IL-17及IL-22水平依次增高，以肝癌患者表達水平最高。肝纖維化或肝硬化是由于膠原和其他細胞外基質(zhì)(ECM)的合成與降解失衡、在肝內(nèi)過量沉積所致。近年來細胞外基質(zhì)HA、LN和ⅣC用于臨床纖維化的輔助診斷。有文獻報道，肝組織內(nèi)Thl7細胞主要集中于匯管區(qū)及纖維化區(qū)［8］，本研究結(jié)果顯示，隨肝病進展，HA、LN 和ⅣC水平逐漸升高，且IL-17、IL-22分別與HA、LN和ⅣC水平呈正相關(guān);IL-22與TBIL、γ-GT均呈正相關(guān)。不僅提示Thl7細胞分泌的IL-17、IL-22在病毒感染后引起的免疫反應(yīng)與組織損傷有關(guān)，也進一步提示IL-17、IL-22可能參與了肝纖維化的發(fā)生，尤其是IL-22在肝癌的形成中起重要作用。有報道，急性肝組織損傷時IL-22有限制肝細胞損傷的作用，此可能與IL-22可保護肝細胞免遭活化T細胞的破壞作用有關(guān)，具體機制有待進一步研究。

目前，臨床上對各種肝病，尤其是肝纖維化、肝癌的診斷主要根據(jù)影像及肝組織活檢。雖然已開展血清學相關(guān)免疫指標及ECM檢查，但尚未能建立全面反映肝病全貌的血清學指標。本研究結(jié)果提示，檢測IL-17、IL-22結(jié)合相關(guān)指標對慢性肝炎、肝纖維化和肝癌流行病學調(diào)查、臨床診斷、病情分析及預(yù)后判斷均具有重要價值;對IL-17、IL-22等細胞因子通路與肝臟損傷機理的深入研究，將為各類肝病的免疫干預(yù)治療提供新的靶點。

［1］Park H，Li I，Yang Xo，et al.A distinct lineage of CD4 T cells regulates tissue inflammation by producing interleukin 17［J］.Nat Immunol，2005，6(11):1133-1141.

［2］Ge J，Wang K，Meng QH，et al.Implication of Th17 and Th1 cells in patients with chronic active hepatitis B［J］.J Clin Immunol，2010，30(1):60-67.

［3］病毒性肝炎防治方案.中華傳染病雜志，2001，19(1):56-62.

［4］Harrington LE，Hatton RD，Mangan PR，et al.Interleukin 17 producingeffector T cells develop via a lineage distinct from the The helper type1 and 2 lineage［J］.Nat Immunol，2005，6(11):1123-1132

［5］Bettelli E，Oukka M，Kuchroo VK.Th17 cells in the circle of immunity and autoimmunity［J］.Nat Immunol，2007，8(4):345-350.

［6］Zheng Y，Danilenko DM，Valdez P，et al.Interleukin-22，a T(H)17 cytokine，mediates IL-23-induced dermal inflammation and acanthosis［J］.Nature，2007，445(7128):648-651.

［7］Zenewicz LA，Yancopoulos GD，Valenzuela DM，et al.Interleukin-22 but not interleukin-17 provides protection to hepatocytes during acute liver inflammation［J］.Immunity，2007，27(4):647-659.

［8］張耿林，高志良.Th17細胞在肝臟疾病的研究進展［J］.中國病毒病雜志，2011，1(3):227-230.