盧國光 方美丹 阮 奕 徐士相 付 水 紀東輝

(1.浙江省臺州醫(yī)院,浙江 臨海 317000；2.紹興文理學院醫(yī)學院,浙江 紹興 312000)

尿液細菌培養(yǎng)是診斷尿路感染的“金標準”,但細菌培養(yǎng)從采集取樣到結果報告至少需要3天,且影響因素多,陽性率低,費用相對昂貴,延緩了疾病的診斷與治療。因此,需要一種靈敏度高、檢測更快、實施方便且結果可靠的篩檢方法。UF-1000i尿有形成分分析儀(UF-1000i)是臨床新近投入的全自動尿液分析儀,能快速、定量、較準確地分析尿液中包括細菌在內(nèi)的多種有形成分?，F(xiàn)將UF-1000i與尿細菌培養(yǎng)進行診斷價值的比較,報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 400份標本均來自2010年9～12月浙江省臺州醫(yī)院做尿細菌培養(yǎng)的住院患者。其中男225例,女 175例,年齡15～96歲,平均(57±17)歲。嚴格按照臨檢操作規(guī)程,留取患者清潔中段尿10mL置于帶蓋無菌試管中,立即送檢。

1.2 儀器與材料 UF-1000i全自動尿液分析儀及配套試劑(包括質(zhì)控品)來自日本希森美康醫(yī)用電子有限公司；血平板由上海伊華醫(yī)學科技有限公司提供,1μ L定量接種環(huán)為Oxoid公司產(chǎn)品；細菌鑒定儀(VITEK-60)及配套細菌鑒定板條為法國生物梅里埃公司產(chǎn)品。

1.3 方法 以尿液細菌培養(yǎng)為金標準,UF-1000i尿液分析儀的白細胞數(shù)和細菌數(shù)通過ROC曲線得出最佳臨界值,再進行比較分析。(1)尿液定量細菌培養(yǎng)∶將尿液標本做定量培養(yǎng)和分離培養(yǎng),根據(jù)臨床和檢驗標準化研究所(CLSI)的要求整個過程采取無菌操作。將清潔中段尿充分混勻,用定量接種環(huán)取尿液標本劃線于血瓊脂平板上,在35℃的孵育箱中培養(yǎng)24小時后,計數(shù)生長菌落,乘以稀釋倍數(shù),求出每毫升生長菌落。凡革蘭陰性菌＞105cfu/mL、革蘭陽性菌＞104cfu/mL為尿定量細菌培養(yǎng)結果陽性,并對這些菌株進一步鑒定到種。無細菌生長的標本繼續(xù)培養(yǎng)；(2)用UF-1000i尿液分析儀進行分析(2小時內(nèi)完成),記錄白細胞數(shù)和細菌數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行處理。采用ROC曲線分析尿液有形成分的篩查診斷試驗,并通過計算靈敏性、特異性、陽性預測值、陰性預測值、假陽性率、假陰性率、準確性等對儀器篩查尿路感染進行預測與評價。

2 結 果

2.1 尿定量細菌培養(yǎng)結果 400份培養(yǎng)標本共培養(yǎng)出陽性標本122例,陽性率為30.5%,共分離出致病菌30種,其中革蘭陽性菌35例(占28.7%),革蘭陰性菌71例(占58.2%),真菌16例(占13.1%)；其中大腸埃希菌50例(占41.0%)。

2.2 UF-1000i檢測白細胞和細菌的ROC曲線對400例UF-1000i檢測的白細胞數(shù)和細菌數(shù)使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件制作篩選尿路感染的ROC曲線。以曲線左上角距離最近點,即約登(Youden)指數(shù)最大者作為最佳陽性判斷值。計算確認UF-1000i測定白細胞最佳臨界值為≥18/μ L,其曲線下面積為0.801；細菌定量最佳臨界值為≥117/μ L,曲線下面積為0.921(圖1),詳見表1。

表1 白細胞和細菌定量的ROC曲線指標

圖1 UF-1000i檢測尿液白細胞和細菌的ROC

2.3 UF-1000i流式尿有形成分分析儀結果 以最佳臨界值白細胞≥18/μ L和細菌≥117/μ L作為篩選的閾值,400份標本檢出白細胞陽性142例,細菌陽性123例。兩者與尿細菌定量培養(yǎng)之間的關系詳見表2。同時計算各指標的靈敏性、特異性、陽性預測值、陰性預測值、假陽性率、假陰性率和準確性,詳見表3。

表2 UF-1000i檢測白細胞和細菌數(shù)與尿定量細菌培養(yǎng)的關系

表3 白細胞、細菌單獨或聯(lián)合在篩選尿路感染中的價值(%)

3 討 論

UF-1000i尿有形成分分析儀是采用紅色半導體激光、核酸熒光染色技術和流式細胞技術在鞘液、稀釋液、染液的作用下對尿液有形成分進行多角度散射光和不同級別的熒光的檢測,可以消除大部分干擾因素[1],從而獲得尿液中各有形成份高精度和高可信度的定量數(shù)據(jù)。尿定量細菌培養(yǎng)一直以來都是尿路感染的確診方法,但其檢驗周期長,陰性率高,標本留取要求高,易污染,不利于臨床快速診治。本實驗以革蘭陰性菌＞105cfu/ml或革蘭陽性菌＞104cfu/ml為細菌培養(yǎng)陽性診斷為尿路感染的標準,在400份培養(yǎng)標本中共檢出陽性標本122例,陽性率為 30.5%,以大腸埃希菌多見(占41.0%),與國外文獻報道相近[2]。

本研究采用ROC曲線進行評價,避免了陽性判斷值選取不同時,評價結果不一等問題,通過圖形觀察準確反映某分析指標的診斷準確度。ROC曲線下面積代表了診斷實驗的準確性,ROC曲線上各點離坐標圖左上角距離最近點為此診斷實驗假陽性和假陰性之和最小的值。因此該點就是對應靈敏度和特異度都相對較高的陽性判斷值的點[3]。從表1可以看出各指標的AUC均不等于0.5,且大于0.7,說明各指標對篩查尿路感染具有很大價值。由圖1及表1可知,白細胞篩查尿路感染的AUC為0.801,細菌篩查尿路感染的AUC為0.921,這證明以細菌定量結果作為判斷標本是 否需要培養(yǎng)比白細胞更加準確,這基本符合尿路感染的病理特點。通過ROC曲線,得到白細胞最佳臨界值白細胞≥18/μ L、細菌最佳臨界值細菌≥117/μ L作為篩查標準。

本研究顯示,UF-1000i檢測400例尿培養(yǎng)標本白細胞陽性142例,細菌陽性123例,白細胞或細菌陽性156例。當以白細胞為篩查指標時,其靈敏度為 73.8%,特異性為 81.3%,陽性預測值為63.4%,陰性預測值為87.6%,假陽性率為18.7%,假陰性率為26.2%,準確性為79.0%。因此白細胞可以起到一定程度的篩查作用,但假陰性率太高。當白細胞破裂、腫脹、或成團聚集時,易被儀器誤認為其他有形成分；白細胞成串排列時,會導致儀器所測得的前向散射光強度和熒光強度改變,使結果呈假陰性,漏檢的可能性較大[4]。還有當尿液中有大量粘液絲時,儀器雖具有吹打自動混勻功能,但不能徹底混勻打散附著在粘液絲上的白細胞團,尤其是吸樣時只能定量吸取,如未能吸到白細胞團,就造成了白細胞假性減低[5]。

UF-1000i具有獨立的細菌檢測通道,特殊的細菌檢測試劑系統(tǒng),可以有效避免其它有形成分對細菌產(chǎn)生的干擾,確保UF-1000i能更準確地檢出和定量細菌[6]。當以細菌作為篩查指標時,其靈敏性為 82.0%,特異性為 91.7%,陽性預測值為81.3%、陰性預測值為92.1%,假陽性率為8.3%,假陰性率為18.0%,準確性為88.8%。相關指標較以白細胞檢測為對象時有明顯提高。這也表明細菌作為篩查指標比白細胞更具意義。但UF-1000i細菌計數(shù)還存在18.0%的漏檢。分析原因,當病原菌體積增大或聚成簇時,可能被儀器誤作其他顆粒而使結果呈“陰性”,造成漏檢；另外,腸球菌類細菌因生長要求較高也會造成感染早期尿標本細菌計數(shù)偏低而呈“陰性”[7]。同時細菌結果也受多種因素影響,如細菌種類、菌體大小、標本放置時間等,因此確診尿路感染仍需做培養(yǎng)。當采用UF-1000i的細菌和白細胞2項指標任意1項陽性作為篩查依據(jù)時,靈敏性為91.0%,特異性為83.8%,陽性預測值為71.1%,陰性預測值為 95.5%,假陽性率為16.2%,假陰性率為9.2%,準確性為86.0%。其靈敏性、陰預測值明顯提高,假陰性率明顯降低,兩者聯(lián)合篩查可以有效減少陰性標本的培養(yǎng)數(shù)量,提高工作效率,獲得最佳的篩查效果。

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