吳宏赟 胡志強山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，山東 濟南 250011

據(jù)2010年國內(nèi)流行病學調(diào)查發(fā)布數(shù)據(jù)顯示，目前在我國18～65歲人口中，緊張型頭痛 （tension-type headache，TTH）發(fā)病率為10.77%，約占原發(fā)性頭痛的45.00%，是最常見的原發(fā)性頭痛。隨著生活習慣的改變，工作學習壓力的增加，其發(fā)病率逐年增加。緊張型頭痛發(fā)病機制尚不清楚，目前認為是顱周肌筋膜組織傷害性痛覺傳入增強[1]，而內(nèi)源性一氧化氮（NO）的生成則與血管周圍傳入神經(jīng)纖維激活有關[2]。根據(jù)這一機制，參照Makowska等[3]的動物模型，筆者通過頸部雙側半棘肌局部注射ATP模擬傷害性刺激增強，采用神經(jīng)電生理記錄張頜反射（Jaw-opening Reflex，JOR）改變，定量分析柔筋方對緊張型頭痛的療效及可能的療效機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF 級 Wistar大鼠 40 只，雌雄各半，體質(zhì)量（254±28）g，購于山東大學實驗動物中心[許可證號SCXK（魯）20080002]。動物分籠飼養(yǎng)，自由飲水。實驗動物配合飼料（鼠）：山東省實驗動物中心提供[許可證號：SCXK（魯）20090014]。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器與試劑 電子天平，大鼠固定器，大鼠手術臺，BNI-A精密電子天平（臺灣櫻花），秒表，玻璃勻漿器，721分光光度計 （上海第三分析分析儀），YLS-9A電子刺激儀（Moorlab Serer），WZ-50C66T單通道微量注射泵 （浙江史密斯醫(yī)學儀器有限公司），BioPAC多導生理信號采集分析系統(tǒng)，EMG100C放大器（美國BioPAC公司）。ATP（廣東天豐藥業(yè)有限公司，批號：090303）臨用前用生理鹽水配制成1μmol/L溶液；10%水合氯醛 （購于山東省齊魯兒童醫(yī)院）；一氧化氮合成酶 （NOS）抑制劑左旋硝基精氨酸 （L-NNA）（sigma產(chǎn)品，進口分裝，購于上海信然生物技術有限公司）。

1.2.2 分組 假手術組10只（頸部注射生理鹽水），模型組10只（頸部注射ATP），柔筋方組10只（頸部注射ATP+柔筋方煎劑灌胃），NOS抑制劑組10只 （頸部注射ATP+腹腔注射LNNA）。所有大鼠正常飼養(yǎng)15 d后開始實驗。

1.2.3 方藥制備 柔筋方煎劑按成人每日服用劑量：白芍40 g、炙甘草 10 g、木瓜 15 g、天麻 12 g、卷柏 10 g、羌活 10 g，以蒸餾水煎煮30 min，提取2次，再合并煎液，濃縮成含生藥濃度為1 g/mL的混懸液[4]，避光貯于4℃冰箱中備用。

1.2.4 實驗步驟 ①柔筋方組大鼠按每天1 mL/100 g體重灌胃用藥，1次/d，連續(xù)用藥1周。假手術組、模型組、NOS抑制劑組均給予等容積的動物飲用水。于末次給藥后1 h進行實驗。②麻醉采用10%水合氯醛3.5 mL/100 g腹腔注射，以應用鈍鉗對前后爪進行捏夾刺激不會引起任何反射活動為宜。③分離出大鼠雙側半棘肌及二腹肌，將大鼠右側臥位，將兩根不銹鋼針刺激電極（直徑150μm）縱向插入舌右側，將兩根記錄電極插入右側二腹肌前腹（兩電極間距3～5 mm）肌肉內(nèi)，以記錄舌刺激誘發(fā)的二腹肌肌電反應(dEMG)，即JOR；同時將兩臺單道微量注射泵頭皮針插入雙側半棘肌。NOS抑制劑組首先腹腔注射L-NNA溶液10 mg/kg，休息30 min后造模。④給予肌電刺激（刺激參數(shù)：方波刺激，頻率為1次/s，波寬200 μs，強度0～10 mA），記錄雙側半棘肌泵入 ATP前的JOR。5 min后假手術組予以雙側半棘肌同時以20 μL/min的速度泵入生理鹽水，其余各組以同樣速度泵入ATP，均持續(xù)1 min，然后給予舌肌電刺激，記錄并測定JOR出現(xiàn)的閾值、潛伏期，連續(xù)測定3次，間隔2 min，取其平均值。給予舌電刺激后，可記錄出一組復合波。以復合波中第一個峰出現(xiàn)的潛伏期來反映疼痛出現(xiàn)的潛伏期，以復合波中第一個峰出現(xiàn)的閾值作為JOR的閾值來代表痛閾。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（）表示，采用配對t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

實驗結果表明注射后模型組痛閾減低（P＜0.01）；而柔筋方組和NOS抑制劑組痛閾變化差異無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），但顯示升高的趨勢，同時，這兩組潛伏期延長（P＜0.05或P＜ 0.01）。 見表 1～2。

表1 不同組別刺激誘發(fā)大鼠張頜反射的疼痛潛伏期的變化（，ms）

表1 不同組別刺激誘發(fā)大鼠張頜反射的疼痛潛伏期的變化（，ms）

注：與注射前比較，*P＜0.01，**P＜0.05

組別 例數(shù) 疼痛潛伏期注射前 注射后假手術組模型組柔筋方組NOS抑制劑組10 10 10 10 4.42±0.58 4.64±0.44 3.97±0.53 4.09±0.33 4.41±0.59 4.58±0.52 4.20±0.47*4.18±0.29**

表2 不同組別刺激誘發(fā)大鼠張頜反射的疼痛閾值的變化（，mA）

表2 不同組別刺激誘發(fā)大鼠張頜反射的疼痛閾值的變化（，mA）

注：與注射前比較，*P＜0.01

組別 例數(shù) 疼痛閾值注射前 注射后假手術組模型組柔筋方組NOS抑制劑組10 10 10 10 6.50±2.56 5.34±1.88 5.73±1.85 7.25±1.85 6.60±2.31 4.54±2.12*5.42±2.09 6.89±1.85

3 討論

JOR是一種在傷害和抗傷害研究中比較實用的模型，JOR的抑制作為鎮(zhèn)痛指標是可行的[5]，該反射不能被芬太尼、納洛酮和木防己苦毒素阻斷[6]。本實驗是通過給舌肌一定強度的電刺激來誘發(fā)JOR，將其出現(xiàn)的閾值代表痛閾，痛閾的提高說明動物對傷害性電刺激變得不敏感，起到了一定的鎮(zhèn)痛作用[5]。實驗結果表明造模后痛閾減低（P＜0.01）；而柔筋方組或NOS抑制劑組痛閾變化無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），但顯示升高的趨勢，同時，這兩組潛伏期延長（P＜0.05或P＜0.01），說明二者均可降低頭頸部肌肉敏感性。實驗結果表明，緊張型頭痛可由NOS抑制劑部分阻斷，結合既往研究緊張型頭痛大鼠腦組織及血漿中NO、NOS含量均異常升高，說明緊張性頭痛與NO相關，調(diào)節(jié)NO濃度是柔筋方干預緊張性頭痛的靶點之一。

柔筋方干預緊張性頭痛的具體機制仍不清楚，可能與NO濃度導致緊張型頭痛模型大鼠痛敏機制有關。大量的實驗證據(jù)表明NO在外周及中樞的不同水平的痛覺調(diào)制中起著重要作用。NO在外因傷害性信息傳遞中起促進作用。緊張性頭痛患者血小板NOS活性的增加，反映了脊髓或三叉神經(jīng)及脊髓上參與對肌筋膜傷害性刺激調(diào)節(jié)從而導致中樞致敏的NOS活性上調(diào)[7]。因此，給予NOS抑制劑后減弱了肌筋膜傷害性刺激致敏的影響。而Inoue等[8]發(fā)現(xiàn)NOS抑制劑必須通過環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）途徑減弱由N-甲基-右旋-天門冬氨酸(NMDA)誘發(fā)的熱性痛覺過敏，抑制NO的生成是這個機制的一部分。提示柔筋方對大鼠痛覺的調(diào)制作用至少部分是通過NO-cGMP途徑實現(xiàn)的[9]。

經(jīng)臨床觀察，柔筋方加減治療緊張型頭痛具有療效好、花費低的優(yōu)勢[10]，本研究顯示該方藥療效機制之一是提高痛閾，降低頭頸部肌筋膜敏感性，療效與NOS近似。但柔筋方與NO濃度降低的因果尚不明確，可能是柔筋方通過降低NO濃度緩解緊張性頭痛，抑或緊張性頭痛緩解后減低NO濃度，孰因孰果需要進一步研究。

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