蔡曉明,劉 云,母 波,曾 梅,楊俊寶,申躍武,陳保鋒,梁素華
(川北醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,四川 南充 637007)
高血脂會(huì)誘發(fā)心腦血管疾病,加重糖尿病、脂肪肝、腎病綜合征等的發(fā)生和發(fā)展,對(duì)人體的健康非常有害。筋骨草 Ajuga decumbens Thunb.為唇形目唇形科植物,資源豐富,全草均可入藥,性寒、味苦,具有止咳化痰、清熱涼血、解毒消腫、止痢的功效,主要用于治療上呼吸道感染引起的急慢性咽炎、支氣管炎、扁桃體炎以及肺炎、痢疾、咳血、療瘡、癰腫、跌打損傷等癥。筋骨草還有調(diào)血脂、降血糖、降血壓、收縮血管、促進(jìn)紅細(xì)胞生成、抗HIV、利膽、抑菌、抗腫瘤、強(qiáng)心等藥理作用。本試驗(yàn)中研究筋骨草初提液對(duì)小鼠調(diào)血脂作用效果,為開發(fā)筋骨草提供可靠的試驗(yàn)依據(jù)。
四川產(chǎn)筋骨草,將其莖、葉清洗干凈,分別用水提法和醇提法抽取初提物;膽固醇為成都科龍化工試劑廠生化產(chǎn)品。
取筋骨草的莖、葉樣品,洗凈、切碎后,煎煮2次,各30 min,濃縮制水提液備用。取筋骨草樣品,將莖、葉洗凈,粉碎、勻漿后,加無水乙醇4℃放置過夜,以3000 r/min的速度離心10 min,棄渣,取上清液濃縮,于4℃低溫保存?zhèn)溆谩?/p>
高血脂小鼠模型用基礎(chǔ)飼料加5%膽固醇、2%豬油建立。模型建立5周后,檢測(cè)不同提取方法、不同給藥方法、給藥時(shí)間長短的調(diào)血脂作用。小鼠靜脈血用摘眼取血法獲取,每組試驗(yàn)對(duì)照、高血脂昆明小鼠雌雄各4只,作好標(biāo)簽,于川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)血清血脂指標(biāo),檢測(cè)數(shù)據(jù)由SAS軟件作方差分析。
取川北醫(yī)學(xué)院試驗(yàn)動(dòng)物中心5周齡昆明小鼠,雌雄各50只,其中雌雄各10只作空白對(duì)照,另雌雄各40只作建模,空白對(duì)照用普通飼料喂養(yǎng),建模小鼠用高脂飼料喂養(yǎng)。建模小鼠與空白對(duì)照小鼠血脂檢驗(yàn)指標(biāo)見表1。可見,建模小鼠血脂水平與空白對(duì)照相比達(dá)到極顯著或顯著差異水平,說明高血脂模型建立成功。
表1 高血脂小鼠及空白對(duì)照血脂平均指標(biāo)(mmol/L)
取筋骨草的莖、葉樣品3 kg清洗干凈,切碎后煎煮2次各30 min,濃縮至水提液5000 mL。取筋骨草樣品3 kg,將莖、葉清洗干凈,粉碎、勻漿后,加無水乙醇4℃放置過夜,3000 r/min離心10 min,棄渣,取上清液濃縮至5000 mL,于4℃低溫保存。分別將兩種初提液拌入小鼠常規(guī)飼料中,喂養(yǎng)模型小鼠,10 d后檢測(cè)兩種初提液調(diào)血脂效果。結(jié)果見表2??梢?,水提液調(diào)總膽固醇效果比醇提液好,差異有顯著性,而雌雄小鼠間無明顯差異;調(diào)甘油三酯效果水提液與醇提液、雌雄小鼠間均無明顯差異;調(diào)高密度脂蛋白效果水提液與醇提液無明顯差異、而雌雄小鼠間達(dá)顯著差異水平;調(diào)低密度脂蛋白效果水提液與醇提液、雌雄小鼠間均無顯著差異;調(diào)極低密度脂蛋白效果水提液與醇提液無差異,雌雄小鼠間達(dá)顯著差異水平。調(diào)總膽固醇效果水提液與醇提液達(dá)顯著差異水平,水提液效果較好,可能是兩種提取方法初提液中成分差異的結(jié)果。調(diào)高密度脂蛋白與極低密度脂蛋白效果雌雄小鼠間達(dá)顯著差異水平,高密度脂蛋白雄鼠含量高,極低密度脂蛋白雌鼠含量高,可能是由于兩種提取方法初提液成分差異與雌雄鼠基因差異相互作用的結(jié)果。
表2 不同提取方法初提液調(diào)血脂作用效果(mmol/L)
取筋骨草的莖、葉樣品5kg清水洗凈,切碎后煎煮2次各30 min,濃縮至水提液8000 mL。將濃縮液分成2份各4000 mL,其中用于拌料的直接將4000 mL濃縮液拌入常規(guī)飼料中,用于灌胃的4000 mL用烘干法濃縮至2000 mL,每天早、晚由熟練飼養(yǎng)員對(duì)小鼠各灌胃1 mL,10 d后檢測(cè)兩種初提液調(diào)血脂效果。結(jié)果見表3??梢姡{(diào)總膽固醇效果拌料組與灌胃組、雌雄小鼠間均無明顯差異;調(diào)甘油三酯效果拌料組與灌胃組、雌雄小鼠間均無明顯差異;調(diào)高密度脂蛋白效果拌料組與灌胃組無顯著差異,但雌雄小鼠間達(dá)極顯著差異水平;調(diào)低密度脂蛋白效果拌料組與灌胃組達(dá)顯著差異水平,雌雄小鼠間無明顯差異。調(diào)極低密度脂蛋白效果拌料組與灌胃組、雌雄小鼠間均無明顯差異。不同給藥方法試驗(yàn)表明,調(diào)低密度脂蛋白效果拌料組與灌胃組達(dá)到顯著差異水平,拌料組效果較好,可能是由于拌料組小鼠攝取藥物量比灌胃組小鼠多的結(jié)果。調(diào)高密度脂蛋白效果雌雄小鼠間達(dá)極顯著差異水平,高密度脂蛋白雄鼠含量高,可能是由于兩種給藥方法小鼠藥物攝食量差異與雌雄鼠基因差異相互作用的結(jié)果。
表3 不同給藥方法調(diào)血脂作用效果(mmol/L)
取筋骨草的莖、葉樣品5 kg清水洗凈,切碎后煎煮2次各30 min,濃縮至水提液8000 mL。全部將初提液拌入小鼠常規(guī)飼料中,喂養(yǎng)模型小鼠,給料3 d、10 d后檢測(cè)兩種給藥時(shí)間調(diào)血脂效果。結(jié)果見表4。可見,調(diào)總膽固醇效果3 d組與10 d組未達(dá)顯著差異水平,而雌雄小鼠間達(dá)極顯著差異水平;調(diào)甘油三酯效果3 d組與10 d組未達(dá)顯著差異水平,而雌雄小鼠間達(dá)顯著差異水平;調(diào)高密度脂蛋白效果3 d組與10 d組無明顯差異,而雌雄小鼠間達(dá)極顯著差異水平;調(diào)低密度脂蛋白效果3 d組與10 d組達(dá)極顯著差異水平,而雌雄小鼠間無顯著差異;調(diào)極低密度脂蛋白效果3 d組與10 d組達(dá)顯著差異水平、而雌雄小鼠間未達(dá)顯著差異水平。給藥時(shí)間試驗(yàn)表明,給藥時(shí)間長短影響調(diào)血脂作用效果。3 d組與10 d組調(diào)低密度脂蛋白達(dá)極顯著差異、調(diào)極低密度脂蛋白效果達(dá)顯著差異水平,說明初提物調(diào)血脂作用有一個(gè)藥效過程,10 d左右血脂可達(dá)正常水平。調(diào)總膽固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白效果,雌雄鼠間達(dá)顯著或極顯著差異水平,可能是藥效時(shí)間與雌雄鼠基因差異相互作用的結(jié)果。
高血脂小鼠模型建立試驗(yàn)表明,總膽固醇高14.83%,低密度脂蛋白建模小鼠平均1.31 mmol/L,比空白對(duì)照高523.81%,達(dá)極顯著差異水平,說明高血脂模型建立成功。在高血脂小鼠建模過程中發(fā)現(xiàn),隨著建模時(shí)間的延長,高血脂小鼠的皮毛逐漸蓬松、暗淡。取高血脂小鼠肝臟觀察,其肝葉及肝臟表面發(fā)白,而空白對(duì)照小鼠肝葉及肝臟表面色澤鮮紅,表明建模小鼠效果明顯。
表4 不同給藥時(shí)間長短調(diào)血脂作用效果(mmol/L)
水提法與醇提法初提液調(diào)高血脂試驗(yàn)表明,調(diào)高血脂效果兩種方法差異不大,但調(diào)總膽固醇水提液效果略好,可能是兩種提取方法初提液中成分有差異的結(jié)果。調(diào)高密度脂蛋白與極低密度脂蛋白效果雌雄小鼠間達(dá)顯著差異水平,高密度脂蛋白雄鼠含量高,極低密度脂蛋白雌鼠含量高,可能是由于兩種提取方法初提液成分差異與雌雄鼠基因差異相互作用的結(jié)果。不同給藥方法試驗(yàn)表明,調(diào)低密度脂蛋白效果拌料組與灌胃組達(dá)到顯著差異水平,拌料組效果較好,可能是由于拌料組小鼠攝取藥物量比灌胃組小鼠多的結(jié)果。調(diào)高密度脂蛋白效果雌雄小鼠間達(dá)極顯著差異水平,高密度脂蛋白雄鼠含量高,可能是由于兩種給藥方法小鼠藥物攝食量差異與雌雄鼠基因差異相互作用的結(jié)果。以上試驗(yàn)表明,筋骨草初提液確有調(diào)血脂作用效果,但其調(diào)血脂作用藥效成分目前尚不清楚。大量研究發(fā)現(xiàn),筋骨草含有二萜、環(huán)烯醚萜、甾酮、筋骨草內(nèi)酯、筋骨草糖、黃酮苷、皂苷、生物堿、有機(jī)酸、酚性化合物、鞣質(zhì)、木犀草素等[1-3],其中甾酮、黃酮苷、皂苷等可能會(huì)有調(diào)血脂效果,需要進(jìn)一步深入研究。
給藥時(shí)間試驗(yàn)表明,給藥時(shí)間長短影響調(diào)血脂作用效果。3 d組與10 d組調(diào)低密度脂蛋白達(dá)極顯著差異、調(diào)極低密度脂蛋白效果達(dá)顯著差異水平,說明初提物調(diào)血脂作用有一個(gè)藥效過程,給藥10 d左右血脂可達(dá)正常水平。調(diào)總膽固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白效果,雌雄鼠間達(dá)顯著或極顯著差異水平,可能是藥效時(shí)間與雌雄鼠基因差異相互作用的結(jié)果。高血脂在體內(nèi)形成及其降解比較復(fù)雜,涉及過氧化物增殖物激活受體(PPAR)調(diào)節(jié)脂肪生成及脂代謝、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(SREBP)脂肪細(xì)胞決定和分化因子、脂肪酸合成酶(FAS)、激素敏感脂酶(HSL)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)、脂蛋白脂肪酶(LPL)、載脂蛋白(APO)等多種調(diào)控過程[4-6]。本試驗(yàn)證明,筋骨草初提液具有調(diào)血脂效果,但其調(diào)控機(jī)制尚需進(jìn)一步深入研究。
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