陳 芳,李 麗
1.河南大學淮河醫(yī)院腎內科,河南 開封 475001;2.河南大學護理學院,河南 開封 475001
膀胱移行細胞癌 (bladder transitional cell carcinoma,BTCC)是泌尿系常見的惡性腫瘤,其特點是易復發(fā)和易侵襲轉移。因此積極尋求膀胱腫瘤的特殊標志物成為膀胱癌無創(chuàng)檢查和治療的極有價值的方法。新近研究發(fā)現(xiàn)乙酰肝素酶(heparanase,HPA)也稱作乙酰肝素酶或類肝素酶,其能夠酶解基底膜(basement membrane,BM)和細胞外基質(extracellular matrix,ECM)中的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖成分,從而參與腫瘤侵襲轉移過程。因此,HPA成為近幾年腫瘤研究新熱點[1]。腫瘤細胞的浸潤轉移是一個復雜過程,其中最重要的一步是降解細胞外基質及基底膜,這一步驟主要依賴于蛋白水解酶。MMPs(matrix metalloproteniase)就是這種鋅離子依賴性內肽酶,它能降解細胞外基質所有成分,MMP-9是MMPs中降解基底膜最重要的蛋白酶之一。MMP-9主要降解以Ⅳ型膠原為主的基底膜屏障,對于腫瘤形成是非常重要的[2]。本研究采用免疫組化法檢測膀胱移行細胞癌和正常膀胱組織中的HPA和MMP-9的表達情況,以探討二者在膀胱移行細胞癌中的表達和相關性。
病例取自2005~2010年我院膀胱移行細胞癌手術(經開放性膀胱腫瘤全切或部分切除及經尿道膀胱腫瘤電切患者)病例共92例,其中,男58例,女34例;年齡38~89歲,平均61.8歲。全部病例均經組織病理學診斷為膀胱移行細胞癌。組織學分級:高分化腺癌45例,中分化腺癌36例,低分化腺癌11例;另外同期選取34例正常膀胱組織作為對照(因輸尿管癌或腎盂癌而行膀胱部分切除的正常膀胱組織,經病理證實膀胱無腫瘤細胞)。組織均經福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋。
采用免疫組化鏈酶抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP)法。兔抗人HPA單克隆抗體、兔抗人MMP-9單克隆抗體、均購自武漢博士德生物工程有限公司;兔抗SP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。用已知的膀胱移行細胞癌陽性片作為陽性對照,以0.05 mol/L PBS液代替一抗作為陰性對照。HPA和MMP-9均以細胞胞漿中有清晰棕黃色或棕褐色顆粒為陽性。陽性結果判定標準:染色切片中計數(shù)每10個高倍視野陽性細胞百分率,陽性細胞率≥70%為強陽性(+++)病例,50%~69%為陽性(++)病例,30%~49%為弱陽性(+)病例,<30%為陰性病例[3]。
所有數(shù)據均采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件包處理,統(tǒng)計方法采用χ2檢驗、Pearson相關分析等處理。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
HPA蛋白呈棕黃色或棕褐色顆粒,團塊狀分布,主要位于腫瘤細胞胞漿內。HPA在膀胱移行細胞癌組織陽性率為77.2%(71/92),多數(shù)為“+~++”表達(61/92);10 例正常膀胱組織中均呈“-”表達(0/10)。HPA在膀胱移行細胞癌組織中表達陽性率明顯高于正常膀胱組織(P<0.05)。
HPA蛋白在BTCC中的表達與性別、年齡、組織學分級及1年存活率無關,而與患者周圍臟器浸潤、淋巴結轉移有關(P<0.05)。 見表 1。
MMP-9蛋白呈棕黃色或棕褐色顆粒,陽性細胞主要位于腫瘤細胞胞漿內。MMP-9在BTCC中表達陽性率為70.7%(65/92),多數(shù)為“+~++”表達(46/92);10 例正常膀胱組織中有2例呈“+”表達(2/10)。HPA在BTCC中表達陽性率明顯高于正常膀胱組織(P<0.05)。
MMP-9在BTCC中的表達與性別、年齡、組織學分級及1年存活率無關,而與患者周圍臟器浸潤、淋巴結轉移有關(P<0.05)。 見表 2。
HPA表達陽性率高的患者其MMP-9的表達也顯著升高,經Spearman等級相關性檢驗分析,在BTCC中HPA和MMP-9 常常聯(lián)合表達,兩者具有相關性(r=0.729,P<0.05)。
膀胱移行細胞癌90%具有浸潤性生長、容易復發(fā)、易侵襲轉移等生物學特性[4]。膀胱癌治療關鍵仍然是早期診斷??傊R床需要有良好的判斷指標和合理的治療靶點。腫瘤侵襲轉移是一個多步驟的、序貫的復雜過程。MMP-9和HPA均參與惡性腫瘤的侵襲轉移,是其惡性生物學潛能的主要調節(jié)蛋白[5]。HPA能特異性破壞細胞外基質和基底屏障,從而促進惡性腫瘤浸潤轉移。目前國內外有關研究報道顯示,乙酰肝素酶可能成為腫瘤治療的一個新靶點[6]。且其可通過降解硫酸乙酰肝素糖蛋白,改變細胞外基質和基底膜結構,促進腫瘤細胞侵襲轉移。本研究結果發(fā)現(xiàn)HPA在有周圍臟器浸潤及有淋巴結轉移的BTCC患者中明顯高于無浸潤無轉移者。MMPs目前已發(fā)現(xiàn)了至少26個成員,其中MMP-9主要降解明膠從而導致腫瘤細胞向周圍組織浸潤轉移。有資料顯示MMP-9不僅參與ECM的降解,而且還對腫瘤細胞的黏附能力有影響[7]。通常MMP-9以酶原形式在細胞內合成并最終被分泌到細胞外,改變分子構型后被激活,能降解多種細胞外基質成分,其中對ECM的降解和破壞是其中最關鍵的一步。大量研究表明,MMP-9在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)過度表達,在惡性腫瘤浸潤轉移過程中扮演著重要角色。本文顯示MMP-9在BTCC中的表達與腫瘤侵犯周圍臟器、淋巴結轉移有密切關系[8-9]。本文說明MMP-9在BTCC的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用,且MMP-9陽性表達可作為BTCC浸潤轉移的重要分子標志之一[10]。目前關于HPA與MMP-9關系的研究尚不統(tǒng)一[11]。本研究同時證實HPA與MMP-9在BTCC浸潤轉移過程中有明顯協(xié)同作用。因此,聯(lián)合檢測二者表達不僅可以作為早期發(fā)現(xiàn)和判斷膀胱移行細胞癌的有效方法,同時還可作為評價膀胱移行細胞癌預后的重要指標??傊?,HPA和MMP-9在膀胱移行細胞癌組織中共同表達增高,并均與腫瘤浸潤轉移過程相關,表明其可作為預測膀胱移行細胞癌的臨床聯(lián)合檢測指標。
表1 BTCC中HPA的表達與臨床病理學因素的相關性
表2 膀胱移行細胞癌組織中MMP-9的表達與臨床病理特征的關系
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