陳大鵬

（黑龍江農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)院，黑龍江佳木斯154007）

家蠅幼蟲蛋白質(zhì)含量豐富，其干基蛋白含量高達(dá)59%～65%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過聯(lián)合國(guó)WHO/FAO規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。家蠅幼蟲蛋白質(zhì)中氨基酸種類比較齊全，用特異的蛋白酶水解就有可能釋放出有活性的小分子肽段。小分子家蠅肽段具有多種生物功能。

近年來，國(guó)內(nèi)外研究人員對(duì)家蠅幼蟲所產(chǎn)生肽的生理活性的研究主要集中在抗菌肽上，關(guān)于其抗氧化肽的研究較少，尤其是體內(nèi)抗氧化活性還有待于進(jìn)一步證實(shí)[1-4]。

本試驗(yàn)主要研究家蠅幼蟲蛋白酶解物的體內(nèi)抗氧化性能，旨在為其進(jìn)行藥理研究及相關(guān)產(chǎn)品開發(fā)提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料與設(shè)備

家蠅幼蟲酶解液凍干粉由黑龍江農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品加工實(shí)驗(yàn)室自制；40只健康昆明小鼠由哈爾濱獸醫(yī)研究所提供；谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）測(cè)試盒、超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)試盒、過氧化氫酶（CAT）測(cè)試盒均購于南京建成生物工程研究所；其他試劑均為分析純。

SpectrumLab54紫外可見光分光光度計(jì)為上海棱光技術(shù)有限公司產(chǎn)品；TGL-IGC高速臺(tái)式離心機(jī)為上海安亭科學(xué)儀器廠產(chǎn)品；MTS-3020真空冷凍干燥機(jī)為三洋電機(jī)有限公司產(chǎn)品。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 家蠅幼蟲酶解液凍干粉的制備 將脫脂家蠅幼蟲粉溶于一定量的蒸餾水，配制成質(zhì)量濃度為6%的脫脂家蠅幼蟲懸浮液，用2%NaOH調(diào)至一定pH值，攪拌均勻，放入恒溫水浴鍋中，保溫至所需溫度，加入反應(yīng)所需酶并低速攪拌，開始水解。每隔30 min測(cè)定1次pH值，以0.5 mol/L的NaOH維持pH值恒定，水解至預(yù)定時(shí)間后，采用沸水浴10 min滅酶，終止反應(yīng)。冷卻后以2%HCl溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，在4 000 r/min的條件下離心15 min，取上清液濃縮至一定濃度，真空冷凍干燥得到家蠅幼蟲酶解液凍干粉。

1.2.2 動(dòng)物的分組及給藥 選用健康昆明種小鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為4組，分別為空白對(duì)照組、低劑量組（200 μg/g）、中劑量組（400 μg/g）和高劑量組（800 μg/g），每組 10 只。低、中、高劑量組小鼠每天灌胃1次家蠅幼蟲酶解液，每次0.5 mL，空白對(duì)照組每天灌胃1次等量的生理鹽水，各組自由飲水、自由攝食。重復(fù)3次。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo) 飼喂30 d后，禁食2 h，處死動(dòng)物，分別取小鼠血液及肝、腦組織，以預(yù)冷的PBS緩沖液（0.2 mol/L，pH值為7.4）為勻漿介質(zhì)在冰浴下將各器官組織機(jī)械勻漿（1.0 g濕組織加9.0 mL緩沖液），于4℃，6 000 r/min離心10 min，分離上清，-20℃保存待測(cè)[5]。小鼠血清和肝、腦組織中SOD，GSH-PX，CAT測(cè)定按照試劑盒上的方法進(jìn)行。

1.2.4 計(jì)算公式 試驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算公式為：

1.2.5 數(shù)據(jù)分析 數(shù)據(jù)采用SPSS軟件處理，結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 家蠅蛋白酶解物對(duì)小鼠肝、腦組織中蛋白質(zhì)含量的影響

試驗(yàn)結(jié)果（表1）表明，中劑量組和高劑量組小鼠肝臟和大腦組織中蛋白質(zhì)的含量均顯著高于對(duì)照組和低劑量組（P＜0.05），家蠅蛋白酶解物可提高肝、腦組織蛋白質(zhì)含量，促進(jìn)體內(nèi)蛋白質(zhì)合成，對(duì)預(yù)防小鼠組織及細(xì)胞結(jié)構(gòu)衰退、維持其細(xì)胞功能健全、延緩衰老具有重要意義。

表1 家蠅蛋白酶解物對(duì)小鼠肝、腦組織中蛋白質(zhì)含量的影響

2.2 家蠅蛋白酶解物對(duì)小鼠體內(nèi)SOD活性的影響

由表2可知，隨著家蠅蛋白酶解物劑量的增大，小鼠血清、肝臟和腦組織中SOD活性與對(duì)照組相比均有所增大。其中，低劑量組與對(duì)照組無顯著差異，中、高劑量組與對(duì)照組均達(dá)到了極顯著差異（P＜0.01）。表明服用家蠅蛋白酶解物達(dá)到一定劑量時(shí)，可顯著提高SOD的活性。

表2 家蠅蛋白酶解物對(duì)小鼠體內(nèi)SOD活性的影響

超氧化物歧化酶（SOD）對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡有著重要的作用[9-10]。當(dāng)體內(nèi)自由基水平失衡時(shí)會(huì)導(dǎo)致各種疾病（腫瘤、衰老、炎癥等），SOD能清除超氧離子自由基O2-，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。因此，SOD活力的高低與衰老、腫瘤、炎癥等有著密切的關(guān)系。

2.3 家蠅蛋白酶解物對(duì)小鼠體內(nèi)GSH-PX活性的影響

GSH-PX是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種含硒抗氧化酶，它通過特異性地催化還原型谷胱甘肽對(duì)氫過氧化物的還原反應(yīng)，消除細(xì)胞內(nèi)有害的過氧化物代謝產(chǎn)物，以阻斷脂質(zhì)過氧化連鎖反應(yīng)。由表3可知，家蠅蛋白酶解物低、中、高劑量組小鼠的血清、肝臟、腦組織中GSH-PX活性均顯著或極顯著高于空白對(duì)照組。其中，高劑量組血清組織GSH-PX活性高出空白對(duì)照組近1倍，表明家蠅蛋白酶解物對(duì)血清組織GSH-PX活性的影響最為顯著。GSH-PX對(duì)活性氧和組織產(chǎn)生的·OH及H2O2有較強(qiáng)的清除能力，可減輕脂質(zhì)過氧化對(duì)機(jī)體組織的損傷，在防止畸變、預(yù)防衰老方面有著非常重要的作用。

表3 家蠅蛋白酶解物對(duì)小鼠體內(nèi)GSH-PX活性的影響

2.4 家蠅蛋白酶解物對(duì)小鼠體內(nèi)CAT活性的影響

從表4可以看出，小鼠血清和肝臟中CAT的活性都隨家蠅蛋白酶解物劑量的增大而增大，與對(duì)照組相比，血清中的高劑量組達(dá)到極顯著差異（P＜0.01），肝臟的中、高劑量組均達(dá)到極顯著差異（P＜0.01）。表明服用一定劑量的家蠅蛋白酶解物可提高小鼠血清及肝組織中CAT的活性。

表4 家蠅蛋白酶解物對(duì)小鼠體內(nèi)CAT活性的影響

過氧化氫酶存在于紅細(xì)胞以及某些組織內(nèi)的過氧化體中[11]，它的主要作用就是催化H2O2分解為H2O與O2，使得H2O2不至于與O2在鐵螯合物的作用下反應(yīng)生成非常有害的羥自由基（·OH）。

3 結(jié)論

家蠅蛋白酶解物可以顯著增加小鼠肝、腦組織中蛋白質(zhì)的含量，提高小鼠血清、肝臟、腦組織的SOD，GSH-PX和CAT活性，因此，具有良好的體內(nèi)抗氧化活性。

家蠅幼蟲酶解物屬天然動(dòng)物提取物，提取過程中環(huán)保無污染，且具有無細(xì)胞毒性及其他副作用的優(yōu)點(diǎn)，因此，對(duì)其進(jìn)行研究，將其開發(fā)成天然抗氧化劑或自由基清除劑，對(duì)保障機(jī)體健康、預(yù)防疾病有重要意義。

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