張培環(huán)

環(huán)孢霉素A（cyclosporine A，CsA）是一種高效免疫抑制藥，臨床上廣泛應(yīng)用于預(yù)防器官移植的排斥反應(yīng)和自身免疫性疾病的治療。CsA檢測(cè)方法有多種，本文通過(guò)化學(xué)發(fā)光微粒 子 免 疫 分 析 （chemicalluminescencemicro-particle immune analysis，CMIA）與熒光偏振免疫分析（fluorescence polarization immunoassay，F(xiàn)PIA）檢測(cè) CsA血藥濃度，比較其結(jié)果的偏倚及相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 2011-06～2011-07在筆者所在醫(yī)院復(fù)查CsA濃度的腎移植患者全血樣本40份，其中男24份，女16份；年齡18~69歲。標(biāo)本采集時(shí)間：口服CsA后10~12 h，采集靜脈血4 ml，分2管，EDTA-K2抗凝。標(biāo)本存放時(shí)間室溫（20~25℃）不超過(guò)2 h，當(dāng)日檢測(cè)。

1.2 方法 儀器選用ARCHITECTi1000分析儀與AXSYM分析儀，均為美國(guó)雅培公司產(chǎn)品。ARCHITECT分析儀檢測(cè)原理基于化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析，AXSYM分析儀檢測(cè)原理基于熒光偏振免疫分析。試劑分別為雅培公司配套的試劑盒，均在有效期內(nèi)應(yīng)用。以FPIA檢測(cè)結(jié)果為X軸，CMIA檢測(cè)結(jié)果為Y軸，通過(guò)Deming法進(jìn)行回歸分析[1]。

表 1 CMIA和FPIA檢測(cè)結(jié)果（n=40）

2 結(jié) 果

40份標(biāo)本分別用CMIA和FPIA方法檢測(cè)，結(jié)果存在偏倚,二者的平均濃度偏倚為-42.6 ng/ml，CMIA檢測(cè)結(jié)果比FPIA檢測(cè)結(jié)果普遍偏低。見(jiàn)表1。檢測(cè)濃度范圍20~230 ng/ml的樣本時(shí)，Y=0.88X－27.13，相關(guān)系數(shù)≥0.9（表 2），說(shuō)明二者存在相關(guān)性。散點(diǎn)分析圖見(jiàn)圖1。

表 2 CMIA與FPIA檢測(cè)環(huán)孢霉血藥濃度的比較

圖 1 散點(diǎn)分析圖

3 討 論

CsA是用于器官移植中預(yù)防排斥反應(yīng)和治療自身免疫性疾病的有效免疫抑制藥[2]。由于血CsA濃度治療窗狹窄[3]、個(gè)體差異、器官移植后時(shí)間、其它藥物的結(jié)合應(yīng)用等多種因素的存在，臨床要求器官移植術(shù)后定期測(cè)定CsA血濃度，為臨床調(diào)整免疫抑制藥物的治療方案提供參考。

CsA濃度檢測(cè)方法較多，有高效液相色譜法（HPLC）、高效液相質(zhì)譜聯(lián)用法（HPLC/MS）、放射免疫法（RIA）、FPIA 等。不同的檢測(cè)方法之間存在很大的偏倚，此次實(shí)驗(yàn)CMIA原理采用的是兩步法，第一步是包被CsA抗體的順磁微粒與待測(cè)標(biāo)本反應(yīng)，第二步是添加CsA吖啶酯標(biāo)記結(jié)合物，如待測(cè)標(biāo)本中含CsA較高，則CsA吖啶酯標(biāo)記結(jié)合物與順磁微粒的結(jié)合量少；如待測(cè)標(biāo)本中含CsA較低或不含CsA，則CsA吖啶酯標(biāo)記結(jié)合物與順磁微粒的結(jié)合量多，測(cè)量其產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。FPIA采用的是競(jìng)爭(zhēng)法，即待測(cè)標(biāo)本與分析物示蹤劑競(jìng)爭(zhēng)與CsA抗體結(jié)合，如果待測(cè)標(biāo)本含CsA較高，則很多分析物示蹤劑無(wú)法與CsA抗體結(jié)合，在收到偏振垂直光激發(fā)后，這些小的熒光分子快速旋轉(zhuǎn)，向各個(gè)角度發(fā)射熒光，結(jié)果導(dǎo)致偏振光下降；如如待測(cè)標(biāo)本中含CsA較低或不含CsA，則分析物示蹤劑與CsA抗體結(jié)合，這些結(jié)合物分子量大，旋轉(zhuǎn)較慢，以致于光向單一角度發(fā)射，結(jié)果導(dǎo)致偏振光增強(qiáng)。此兩種方法均為免疫檢測(cè)法，由于其是非特異性的，可與代謝物發(fā)生交叉反應(yīng)。目前已知的環(huán)孢霉素代謝物有30多種[4]。有資料顯示，部分代謝產(chǎn)物有免疫抑制活性，兩個(gè)主要活性代謝物AM1和AM9其免疫抑制活性占母體作用的10%~20%[5]。由雅培CsA測(cè)定試劑盒特異性一節(jié)可知，ARCHITECT環(huán)孢霉素項(xiàng)目與CsA代謝產(chǎn)物的交叉反應(yīng)率要比AxSYM低，其抗體特異性比AxSYM要高，所以ARCHITECT系統(tǒng)測(cè)試結(jié)果普遍低于AxSYM系統(tǒng)測(cè)試結(jié)果，二者的平均濃度偏倚為-42.6 ng/ml。由此可以看出，方法學(xué)的不同及與代謝產(chǎn)物發(fā)生交叉反應(yīng)的非特異性是產(chǎn)生偏倚的主要原因。

由表2可以看出，檢測(cè)濃度范圍20～230 ng/ml的樣本時(shí)，相關(guān)系數(shù)≥0.9，二者之間存在相關(guān)性，但由于樣本量大小和樣本群體的差異等變量會(huì)影響檢測(cè)相關(guān)性，因此，各個(gè)實(shí)驗(yàn)室得到的結(jié)果可能會(huì)與這些數(shù)據(jù)存在差異。

根據(jù)本文檢測(cè)結(jié)果，得知目前常用的此兩種儀器的檢測(cè)結(jié)果存在偏倚，這可能也給臨床醫(yī)師的治療帶來(lái)一定的困惑。有些建議應(yīng)用校正系數(shù)達(dá)到二者之間的結(jié)果互換使用，但筆者認(rèn)為，由于臨床狀態(tài)的復(fù)雜性，最好建立不同方法的參考范圍，建議單個(gè)患者連續(xù)使用同一種檢測(cè)方法，或者是連續(xù)在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，醫(yī)師應(yīng)根據(jù)患者情況及臨床經(jīng)驗(yàn)確立單個(gè)患者的血藥濃度范圍。

[1]Passing H,Bablok W.A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods[J].J Clin Chem Clin Biochem,1983,21(11):709-20.

[2]Cohen DJ,Loert Scher R,Rubin MF,et al.Cyclosporine A:a new immuno-suppressive agent for organ transplantation[J].Ann Inter Med,1984,101（24）:6671.

[3]Julia M.Potter pharmacoeconomics of therapeutic drug monitoring in transplantation[J].Therapeutic Drug Monitoring,2000,22（4）：361.

[4]Christians U,Sewing KF.Cyclosporin metabolism in transplant patients[J].Pharmac Ther,1993,57（3）:291-345.

[5]朱有華，石炳毅．腎臟移植手冊(cè)[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2010.7-243.