孔德榮，張小明，趙星梅，張巖濱，胡海濤，王體賓，李 崢，袁 海，趙青霞，胡 雄，霍 軍，周夢煜，高新立，宋春聯(lián)，李恒芬

1)鄭州市第八人民醫(yī)院鄭州450006 2)新鄉(xiāng)醫(yī)學院應(yīng)用心理系新鄉(xiāng)453003 3)鄭州大學第一附屬醫(yī)院精神醫(yī)學科鄭州450052

載脂蛋白 E(apolipoprotein E，APOE)［1］是人體內(nèi)主要的脂蛋白之一，它有3種異構(gòu)體(即ε2～4)和6種基因型(E2/2、E2/3、E2/4、E3/3、E3/4、E4/4)，在人腦中分布廣泛，主要由星形膠質(zhì)細胞合成，通過調(diào)節(jié)腦內(nèi)膽固醇及其脂類物質(zhì)的代謝而參與神經(jīng)系統(tǒng)的正常生長和損傷修復(fù)，從而維持腦部結(jié)構(gòu)和功能的正常。研究［2-3］發(fā)現(xiàn)，APOE基因與血管性癡呆和阿爾茨海默病的認知功能缺陷均有關(guān)，而臨床中發(fā)現(xiàn)多達50%的精神分裂癥患者存在廣泛的認知缺陷［4］，且有研究［5］報道精神分裂癥患者存在中樞神經(jīng)元的丟失和腦邊緣系統(tǒng)結(jié)構(gòu)的異常，提示APOE基因可能參與了精神分裂癥的發(fā)病。作者探討了精神分裂癥患者APOE基因多態(tài)性分布，報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2009年1月至2010年9月于鄭州市第八人民醫(yī)院就診的首發(fā)精神分裂癥患者180例，其中男116例，女64例，均未服用過任何抗精神病藥物，符合《國際疾病和相關(guān)健康問題統(tǒng)計分類第十版》精神分裂癥的診斷標準，年齡18～55(29.51±4.55)歲，病程不限。健康對照組為鄭州市第八人民醫(yī)院職工，既往無重大軀體疾病史，無神經(jīng)精神疾病史，無神經(jīng)精神藥物服用史，共180例，其中男 102例，女 78例，年齡 20～53(28.92±4.36)歲。該研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會專家論證同意，患者監(jiān)護人和健康對照者簽訂知情同意書。

1.2 精神癥狀的評定 根據(jù)Andreasen和Olsen評定標準［6］，對研究組采用陰性和陽性癥狀量表評定精神癥狀，量表評定由兩名統(tǒng)一培訓(xùn)的主治醫(yī)師進行操作。將陽性量表中有3項或以上評為中度(4分或以上)、但陰性量表評為中度的項目不足3項者納入“陽性癥狀組”;將陰性量表有3項或以上評為中度、但陽性量表評為中度的項目不足3項者納入“陰性癥狀組”;兩個量表均至少有3項評為中度者納入“混合型”，被排除。評分結(jié)果顯示，陽性癥狀組有59例，陰性癥狀組有74例。

1.3 APOE基因多態(tài)性的測定 收集研究組和健康對照組的外周靜脈血3 mL，－80℃冰箱保存，采用美國QIAGEN公司提供的FlexiGene DNA試劑盒提取DNA，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。APOE上游 引 物 序 列 5’-TAAGCTTGGCACGGCTGTC CAAGGA-3’，下游引物序列 5’-ACAGAATTCGC CCCGGCCTGGTACAC-3’［7］，反應(yīng)體系 50 μL。PCR反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性5 min;98℃變性30 s，55℃退火50 s，72℃延伸50 s，35個循環(huán);72℃延伸10 min。將PCR產(chǎn)物送上海博尚生物技術(shù)有限公司進行單向測序，與標準序列對比，判定基因多態(tài)性。根據(jù)APOE基因第4外顯子的112位和158位編碼氨基酸密碼子堿基的不同，共檢測出5種基因型，分別為 E2/2、E2/3、E2/4、E3/3、E3/4 和 E4/4。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0進行分析。各組基因型和等位基因分布的比較應(yīng)用行×列表χ2檢驗，兩兩比較應(yīng)用行×列表分隔χ2檢驗，檢驗水準 α =0.05。

2 結(jié)果

2.1 研究組和健康對照組APOE基因型及等位基因分布的比較 經(jīng)擬合優(yōu)度χ2檢驗，研究組與健康對照組基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ2=4.576，P=0.433;χ2=0.579，P=0.979)。2組APOE基因型及等位基因分布的比較見表1。

2.2 研究組男、女患者APOE基因型和等位基因頻率分布的比較 見表2。

2.3 陽性癥狀組、陰性癥狀組APOE基因型和等位基因分布的比較 見表3。陰性癥狀組ε4等位基因及E3/4基因型頻率顯著高于陽性癥狀組，差異有統(tǒng)計學意義 (χ2=4.417，P=0.036;χ2=13.175，P ＜0.001)。

表2 研究組男、女患者APOE基因型和等位基因分布的比較 n(%)

表3 陽性癥狀組、陰性癥狀組APOE基因型和等位基因分布的比較 n(%)

3 討論

該研究未發(fā)現(xiàn)精神分裂癥患者與健康人群的APOE基因型及等位基因分布有差異，與Kecmanovic 等［8］和 Tovilla-Zárate 等［9］的報道一致。Kecmanovic等研究發(fā)現(xiàn)APOE基因型對塞爾維亞人精神分裂癥的發(fā)病風險、治療以及發(fā)病年齡均無明顯影響，Tovilla-Zárate等所做的一項meta分析也發(fā)現(xiàn)APOE基因多態(tài)性與精神分裂癥的發(fā)病無關(guān)。然而Liu等［10］將1 570例精神分裂癥患者與1 528例健康人進行了對照研究，發(fā)現(xiàn)患者中ε4等位基因頻率高于健康人群，而ε3等位基因頻率及E3/3基因型頻率則低于健康人群;劉鐵榜等［11］通過對235例首發(fā)漢族精神分裂癥患者和75例漢族健康人的對照研究也發(fā)現(xiàn)ε4等位基因和E3/4基因型與精神分裂癥存在正關(guān)聯(lián)。

以陰性癥狀為主的精神分裂癥常伴有腦的結(jié)構(gòu)改變和不可逆地慢性進行性衰退，往往具有難治性特點。Martorell等［12］研究發(fā)現(xiàn)攜帶ε4等位基因的女性患者發(fā)病年齡要較男性患者提前4 a，且這些女性患者多以陰性癥狀為主。劉鐵榜等［11］研究也發(fā)現(xiàn)難治性精神分裂癥患者E3/4基因型和ε4等位基因頻率均高于非難治組，且認為陰性癥狀是引起難治性的首要因素。Akanji等［13］對207例精神分裂癥患者和165例健康人群進行了研究，發(fā)現(xiàn)E2/3基因型及ε2等位基因在男性患者中似乎更常見，但這種差異無統(tǒng)計學意義。該研究未發(fā)現(xiàn)男女精神分裂癥患者間APOE基因多態(tài)性存在差異，但以陰性癥狀為主的精神分裂癥患者E3/4基因型和ε4等位基因頻率高于陽性癥狀者。

綜上所述，APOE基因多態(tài)性對精神分裂癥易感性及性別的易感性均無影響，但對精神分裂癥的臨床癥狀表現(xiàn)有影響，尤其E3/4基因型和ε4等位基因可能是導(dǎo)致精神分裂癥陰性癥狀嚴重的危險因素，進而推測可能是導(dǎo)致精神分裂癥難治性和預(yù)后不良的危險因素。但由于APOE基因多態(tài)性存在種族遺傳異質(zhì)性，不同種族的研究結(jié)果不一致，即使是同一種族的研究，由于樣本量的大小、診斷標準及評定工具的選擇以及統(tǒng)計方法等的不同，研究結(jié)果也有較多爭議，因此APOE基因多態(tài)性與精神分裂癥的關(guān)系有待于進一步的研究證實。

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