談曉紅，馬 鵬

（1.延安市衛(wèi)生學(xué)校；2.延安大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西延安71600）

AKT2在胃癌中的表達(dá)及意義

談曉紅1，馬 鵬2

（1.延安市衛(wèi)生學(xué)校；2.延安大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西延安71600）

目的探討胃癌中AKT2表達(dá)情況及臨床病理意義。方法采用免疫組化法（S-P法）檢測(cè)80例胃癌組織及癌旁組織中AKT2及的表達(dá)情況。結(jié)果AKT2在胃癌中的表達(dá)率72.5%，癌旁組織中表達(dá)率為12.5%，胃癌中的表達(dá)明顯高于癌旁組織，二者之間差異具有顯著性（P＜0.05），AKT2的表達(dá)與有無淋巴轉(zhuǎn)移、分化程度及臨床分期有關(guān)（P＜0.05），與年齡、性別及腫瘤大小無關(guān)（P＞0.05）。結(jié)論AKT2在胃癌組織中的蛋白表達(dá)顯著低于癌旁組織，提示：AKT2的異常表達(dá)與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，檢測(cè)AKT2達(dá)蛋白表達(dá)可作為判定胃癌生物學(xué)行為的的輔助指標(biāo)。

胃癌；AKT2；蛋白表達(dá)；免疫組化

絲／蘇氨酸激酶（serine／threoninekinase，AKT，又名為蛋白激酶proteinkinase B，PKB）在許多人類腫瘤組織中都存在高表達(dá)，與多種人類腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)。AKT2是AKT的亞型之一，可引起細(xì)胞轉(zhuǎn)化，故被確定為癌基因［1］，研究發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤組織中都存在AKT2基因擴(kuò)增、蛋白的過度表達(dá)或活化［2］。我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)AKT2蛋白在胃癌組織中的表達(dá)，以探討其在胃癌發(fā)生和發(fā)展過程中的作用及意義。

1 材料和方法

1.1 材料

收集2008～2010年延安大學(xué)附屬醫(yī)院普外科術(shù)后胃癌大體標(biāo)本80例，術(shù)前均未化放療，男56例，女24例。年齡23～72（平均54歲）。經(jīng)蘇木素伊紅染色，病理醫(yī)生診斷。兔抗人AKT2多克隆抗體，購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)公司，（S～P）試劑盒及（DAB）購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

檢測(cè)AKT2蛋白在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)情況。標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4μm厚的石蠟切片65℃烘烤，脫蠟，3%過氧化氫滅活內(nèi)源性過氧化物酶，微波修復(fù)抗原，10%正常山羊血清封閉，AKT2多克隆抗體及PTEN單克隆抗體（1∶50）4℃過夜孵育，磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗，加生物素標(biāo)記抗人IgG藥置于室溫下30 min，沖洗，辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素室溫下孵育30 min，沖洗后DAB顯色，蘇木素染色，封片。光鏡觀察。用已知陽性胃癌切片作陽性對(duì)照，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

AKT2陽性染色主要定位于細(xì)胞漿，呈棕黃色細(xì)小顆粒，以細(xì)胞漿呈棕黃色顆粒為陽性。由兩位病理科醫(yī)師隨機(jī)選擇5個(gè)有代表性的視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，按陽性細(xì)胞占同類記數(shù)細(xì)胞的百分比將免疫組化結(jié)果分為陰性，即百分比＜10%；陽性即百分比＞10%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果拍攝成像。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用χ2檢驗(yàn)對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行分析處理，以P＜0.05為差異具有顯著意義。

2 結(jié)果

所檢測(cè)的80例胃癌中AKT2表達(dá)率為72.5%，癌旁組織中AKT2表達(dá)率為12.5%，可見AKT2在胃癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁組織（P＜0.05）。詳見表1。

AKT2在胃癌中的表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤的大小無相關(guān)性（P＜0.05），與組織分化程度、有無淋巴轉(zhuǎn)移及臨床分期相關(guān)（P＜0.05）。詳見表2。

表1 胃癌及癌旁組織中AKT2陽性表達(dá)情況

表2 AKT2表達(dá)與胃癌臨床病理特征指標(biāo)關(guān)系

3 討論

AKT是一種絲氨酸／蘇氨酸激酶分子，是PI3K／AKT通路的重要成分，近年來研究表明，許多人類腫瘤組織中都存在磷酸化AKT，的高表達(dá)，該通路在腫瘤細(xì)胞惡性增值，血管生成和轉(zhuǎn)移以及對(duì)放化療拮抗中起重要作用?；罨腁KT啟動(dòng)一系列與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期調(diào)控、端粒酶活性、血管生成、細(xì)胞侵襲遷移相關(guān)的程序［3］。因此，AKT作為細(xì)胞生存的一個(gè)關(guān)鍵性因子，對(duì)于腫瘤的形成模式及其診斷與治療具有十分重要的意義，在腫瘤發(fā)生和抗藥性方面也起著重要作用［4］。

作為AKT家族3個(gè)成員（AKT1、AKT2、AKT3）之一的AKT2更多地參與了人類腫瘤的發(fā)生和發(fā)展［5，6］，基因擴(kuò)增后發(fā)現(xiàn)在很多的人類腫瘤組織中存在AKT2基因擴(kuò)增和mRNA過表達(dá)，AKT2的過表達(dá)可以使NIH3T3細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，因而被確定為癌基因［6］，它與人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展更為密切。研究證實(shí)AKT2是參與結(jié)直腸癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌等腫瘤發(fā)生發(fā)展的主要形式［3］；AKT2其活化還是依賴于PI3K對(duì)含有肌醇的膜磷脂酰肌醇環(huán)上3位羥基的特異磷酸化，AKT2主要介導(dǎo)體內(nèi)PI3K依賴的細(xì)胞的粘附、運(yùn)動(dòng)、侵襲和轉(zhuǎn)移效應(yīng)［7］。

胃癌是常見的消化道腫瘤，在胃癌的發(fā)生中，從正常胃黏膜上皮轉(zhuǎn)化成癌是一個(gè)多步驟的過程，是由于多種基因異常在多年的階段中積累的結(jié)果，其中涉及到多種癌基因，抑癌基因，端粒及端粒酶，細(xì)胞黏附因子及DNA錯(cuò)配修復(fù)基因的異常和積累，本結(jié)果表明，在80例胃癌組織中，AKT2陽性表達(dá)72.5%，明顯高于癌旁組織12.5%，差異有顯著性（P＜0.001），可見在胃癌組織中存在AKT2的高比率表達(dá)，提示：AKT2基因的激活在胃癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用；實(shí)驗(yàn)還結(jié)果顯示：AKT2蛋白在胃癌組織中的表達(dá)與組織分化程度明顯相關(guān)，低分化胃癌中陽性率為85.4%，明顯高于高分化癌的陽性表達(dá)率53.1%，差異有顯著性（P＜0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組AKT2陽性率為82.6%，明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組58.1%，差異有顯著性（P＜0.05）。提示：AKT2陽性表達(dá)可能與胃癌的惡性行為有關(guān)，是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)。

總之，AKT2表達(dá)上調(diào)對(duì)于胃癌的發(fā)生、發(fā)展可能起重要作用，可能有助于胃癌的預(yù)后判斷。提示AKT2達(dá)蛋白表達(dá)可作為判定胃癌生物學(xué)行為的的輔助指標(biāo)，對(duì)AKT2的深入探討有望為胃癌發(fā)病機(jī)制的研究及治療提供新靶點(diǎn)。

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1672－2639（2012）02－0011－02

2012－02－05；責(zé)任編輯 王景鴻］