何志鵬 吳琪 章順安（等）

[摘要] 目的 研究阿魏酸鈉對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈的影響。 方法 以等長(zhǎng)張力的形式記錄鼠主動(dòng)脈及去內(nèi)皮鼠主動(dòng)脈對(duì)去氧腎上腺素和高鉀的反應(yīng)，以及阿魏酸鈉對(duì)鼠主動(dòng)脈及去內(nèi)皮鼠主動(dòng)脈的舒張作用。 結(jié)果阿魏酸鈉（0.1～30 mmol/L）能使預(yù)先用濃度為（2.73±0.02）的去氧腎上腺素和濃度為（2.57±0.06）的高鉀預(yù)收縮的離體主動(dòng)脈環(huán)舒張（P < 0.05）；機(jī)械去除內(nèi)皮后，阿魏酸鈉對(duì)主動(dòng)脈環(huán)的舒張效應(yīng)沒有明顯改變。 結(jié)論 阿魏酸鈉是一種非內(nèi)皮依賴性的血管平滑肌細(xì)胞松弛劑。

[關(guān)鍵詞] 阿魏酸鈉；主動(dòng)脈；血管舒張

[中圖分類號(hào)] R961[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1673—9701（2012）25—0021—02

Endothelium—independent vasorelaxant effect of sodium ferulate on rat thoracic aorta

HE Zhipeng WU Qi ZHANG Shunan TANG Yantian HU Ze SHI Peijia

Department of Cardiology， the Peoples Hospital of Beilun District， Ningbo 315800， China

[Abstract] Objective To investigate the effects of sodium ferulate （SF） on rat isolated thoracic aortas. Methods Isometric tension was recorded the reaction that rat aorta and endothelium—denuded aorta response to phenylephrine and high potassium， and the effect of sodium ferulate on rat aorta and de—endothelialized rat aortic diastolic function. Results SF （0.1—30 mmol/L） relaxed the isolated aortic rings precontracted with phenylephrine（PE） and high—K+ in a concentration—dependent manner with respective pD2 of 2.73±0.02 and 2.57±0.06（P < 0.05）. Mechanical removal of endotheliumdid not significantly modify the SF—induced relaxation. Conclusion These results indicate that SF acts directly as a non—selective relaxant to vascular smoothmuscle.

[Key words] Sodium ferulate；Aorta；Vasorelaxation

阿魏酸鈉（SF），即3—甲氧基—4—羥基肉桂鈉（C10H9O4Na），是阿魏酸（FA）的一種鈉鹽。體外和體內(nèi)研究表明，阿魏酸鈉或阿魏酸具有有益的藥理作用，包括其較強(qiáng)的抗氧化、抗炎、抑制血小板聚集、清除自由基作用[1]。近年來，有報(bào)道阿魏酸通過提高NO的生物利用度來修復(fù)自發(fā)性高血壓大鼠主動(dòng)脈的內(nèi)皮功能，從而降低其血壓[2]，對(duì)于阿魏酸鈉對(duì)血管是否有此作用報(bào)道不多，本文對(duì)此進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1 主要材料

①阿魏酸鈉（SF，純度99.54%）由中國(guó)的香氣化工（中國(guó)杭州）提供。去氧腎上腺素（phenylephrine，PE），乙酰膽堿（acetylcholine， ACh）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司（St Louis， MO，USA）。②SD大鼠，雄性，體重250～300 g，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)研究院（中國(guó)上海）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。研究的程序和協(xié)議按照我們的制度指南進(jìn)行。動(dòng)物房里溫度恒定在（23±2）℃和濕度（55±5）%，暴露12 h光照、黑暗交替周期，喂食標(biāo)準(zhǔn)飲食，不限制飲水。

1.2 方法

1.2.1 胸主動(dòng)脈環(huán)的制備分離出胸主動(dòng)脈，并放置在4℃ Krebs—Henseleit液（K—H，mmol/L：Nacl 118.3，KCl 4.7，MgSO4 1.2，KH2PO4 1.2，NaHCO3 25.0，CaCl2 1.25，葡萄糖11.0）。小心除去脂肪和結(jié)締組織，將主動(dòng)脈切成3～4 mm寬的環(huán)。據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，采用棉簽?zāi)ゲ裂墉h(huán)內(nèi)表面的方法制備去內(nèi)皮血管環(huán)。

1.2.2 等距血管張力的測(cè)量在37℃裝有5 mL K—H溶液的器官浴槽中，主動(dòng)脈環(huán)水平懸掛于兩根不銹鋼絲上。用壓力移動(dòng)傳感器連接醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的6.0的多道記錄儀（中國(guó)南京制造）記錄等距離的張力。主動(dòng)脈環(huán)被2.0 g的靜息張力拉長(zhǎng)，并允許其平衡保持60～90 min，在每個(gè)實(shí)驗(yàn)之前用氯化鉀（60 mmol/L）刺激環(huán)至少3次直到獲得可重現(xiàn)的最大收縮反應(yīng)。初步評(píng)定現(xiàn)有內(nèi)皮功能：用氯化鉀60 mmol/L重復(fù)刺激3次，以誘發(fā)血管的最大收縮幅度。待血管環(huán)重新穩(wěn)定后，用去氧腎上腺素1 μmol/L收縮血管環(huán)達(dá)峰值，加入ACh 10 μmol/L檢驗(yàn)血管內(nèi)皮完整性。若加ACh后使PE預(yù)收縮的血管環(huán)舒張80%以上認(rèn)為內(nèi)皮完整，舒張10%以下則認(rèn)為內(nèi)皮去除。

1.2.3 阿魏酸鈉對(duì)去氧腎上腺素和氯化鉀誘導(dǎo)的收縮的影響在標(biāo)準(zhǔn)K—H溶液中進(jìn)行兩種不同的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。第一個(gè)實(shí)驗(yàn)：用去氧腎上腺素（1 μmol/L）和高鉀（60 mmol/L）對(duì)主動(dòng)脈環(huán)進(jìn)行預(yù)收縮處理，一旦達(dá)到停滯期，往浴槽中加入阿魏酸鈉，劑量由0.1 mmol/L逐漸增加到30 mmol/L，就可以得到阿魏酸鈉誘導(dǎo)松弛的濃度—效應(yīng)曲線。第二個(gè)實(shí)驗(yàn)：將（1，3，10 mmol/L）阿魏酸鈉加入浴槽中，培養(yǎng)10 min后，將氯化鉀（0～60 mmol/L） 或去氧腎上腺素1 nmol/L～10 μmol/L加入浴槽中可以得到高鉀或去氧腎上腺素的濃度—效應(yīng)曲線。在這兩組實(shí)驗(yàn)中采用的都是內(nèi)皮完整的主動(dòng)脈環(huán)，采用去氧腎上腺素或氯化鉀誘導(dǎo)收縮的百分比表示張力。

1.2.4 內(nèi)皮細(xì)胞在阿魏酸鈉誘導(dǎo)的松弛中的作用為了闡明內(nèi)皮細(xì)胞在阿魏酸鈉誘導(dǎo)松弛中的作用，我們研究了阿魏酸鈉對(duì)用去氧腎上腺素（1 μmol/L）或氯化鉀（60 mmol/L）預(yù)收縮的內(nèi)皮完整的主動(dòng)脈環(huán)和去內(nèi)皮的主動(dòng)脈環(huán)的濃度—效應(yīng)關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用（x±s）表示。阿魏酸鈉使預(yù)收縮環(huán)達(dá)到最大松弛的50%時(shí)的濃度定義為半最大有效濃度（EC50）。由非線性回歸的濃度效應(yīng)曲線（曲線擬合）計(jì)算出pD2（EC50值的負(fù)對(duì)數(shù)）。采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，用兩組非配對(duì)Student t—檢驗(yàn)進(jìn)行比較，P < 0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

阿魏酸鈉（直到劑量達(dá)30 mmol/L）對(duì)大鼠主動(dòng)脈環(huán)的基礎(chǔ)張力沒有影響。數(shù)據(jù)沒有顯示，見圖1、2。阿魏酸鈉對(duì)去氧腎上腺素和氯化鉀誘導(dǎo)的收縮的影響見表1、圖1A、圖1B、圖2A及圖2B。內(nèi)皮細(xì)胞在阿魏酸鈉誘導(dǎo)的松弛中的作用見表1和圖1。

表1 阿魏酸鈉對(duì)去氧腎上腺素和氯化鉀誘導(dǎo)的收縮的影響（x±s）

3 討論

擴(kuò)血管藥物可分為內(nèi)皮依賴和非內(nèi)皮依賴兩類。內(nèi)皮依賴性血管擴(kuò)張劑如乙酰膽堿引起血管舒張，需要內(nèi)皮層的存在及它分泌的一氧化氮、前列環(huán)素、內(nèi)皮依賴性超極化因子的作用[3，4]。內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙主要表現(xiàn)為舒張和收縮因子、促凝和抗凝物質(zhì)、生長(zhǎng)抑制和生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)的生成釋放不平衡，引起生理系統(tǒng)多方面的變化，是多種血管性疾病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[5]。研究表明，吸煙、缺乏運(yùn)動(dòng)、年齡增加、雌激素減少、動(dòng)脈硬化、高血壓、糖尿病、血脂異常、冠心病、心力衰竭、血管外科與介入治療等多種因素，均可造成內(nèi)皮細(xì)胞損傷[6]。內(nèi)皮素是血管內(nèi)皮釋放的肽類物質(zhì)，具有很強(qiáng)烈的收縮血管作用。過量?jī)?nèi)皮素釋放可引起冠狀動(dòng)脈痙攣，促進(jìn)心肌收縮，加重心肌缺血和心肌再灌注損傷，導(dǎo)致冠心病心絞痛的發(fā)生，冠狀動(dòng)脈痙攣還與心肌梗死和猝死的發(fā)生高度相關(guān)[7]。有研究顯示，SF在改善心肌缺血的同時(shí)，可明顯降低內(nèi)皮素釋放，增加體內(nèi)一氧化氮含量，維持心血管系統(tǒng)恒定舒張，調(diào)節(jié)冠狀動(dòng)脈基本張力，保持心肌血流灌注[8]。王怡練等[9]在常規(guī)治療不穩(wěn)定型心絞痛基礎(chǔ)上加用SF，結(jié)果該組心臟事件發(fā)生率顯著降低，心電圖改善和減少含服硝酸甘油例數(shù)均優(yōu)于加用其他藥物組（P < 0.05）。有研究顯示，應(yīng)用SF靜脈注射2周后，心絞痛的發(fā)作次數(shù)明顯少于對(duì)照組（P < 0.05），心電圖缺血性ST—T改善優(yōu)于對(duì)照組，且不影響心率、血壓等指標(biāo)，對(duì)改善不穩(wěn)定型心絞痛有良好的效果，尤其是與硝酸酯類、β受體阻滯劑等合用可以增強(qiáng)這些藥物的抗缺血作用[10]。本實(shí)驗(yàn)顯示，阿魏酸鈉呈劑量依賴性的舒張去氧腎上腺素和高鉀預(yù)收縮的內(nèi)皮完整的主動(dòng)脈環(huán)，且機(jī)械的去除內(nèi)皮后，阿魏酸鈉對(duì)去氧腎上腺素和氯化鉀的預(yù)收縮主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用沒有明顯的降低，提示阿魏酸鈉的舒血管作用是非內(nèi)皮依賴性的，是通過阿魏酸鈉直接作用于血管平滑肌細(xì)胞實(shí)現(xiàn)的。

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（收稿日期：2012—05—03）