牛慶偉　孔秋生　黃遠(yuǎn)　別之龍

摘 要： 西瓜細(xì)菌性果斑?。˙FB）是西瓜上的毀滅性病害，研究其侵染途徑及防治方法對于西瓜生產(chǎn)具有重要意義。本研究通過對育苗基質(zhì)人工接種西瓜細(xì)菌性果斑病菌，發(fā)現(xiàn)基質(zhì)帶菌能夠?qū)е挛鞴嫌酌鏐FB的發(fā)生。通過室內(nèi)試驗(yàn)評估了可殺得叁仟、加瑞農(nóng)、加收米、注射用硫酸鏈霉素、90% 新植霉素5種藥劑對西瓜細(xì)菌性果斑病菌的抑菌和殺菌效果，發(fā)現(xiàn) 90% 新植霉素（100、200、300 mg·L-1）對西瓜細(xì)菌性果斑病菌有較強(qiáng)的抑制效果，加瑞農(nóng)（600、800倍液）處理細(xì)菌5 h，對西瓜細(xì)菌性果斑病菌的室內(nèi)殺滅效果達(dá)到100%。在此基礎(chǔ)上，研究在基質(zhì)帶菌量為109 cfu·kg-1的情況下，不同藥劑消毒育苗基質(zhì)對西瓜幼苗細(xì)菌性果斑病的防治效果。結(jié)果表明，每1 m3基質(zhì)噴淋100 kg藥劑，播種后的第15天，加瑞農(nóng)600倍液和加收米400倍液對西瓜幼苗細(xì)菌性果斑病的防效分別達(dá)到 46.4% 和30.4%。

關(guān)鍵詞： 藥劑； 西瓜； 育苗基質(zhì)； 細(xì)菌性果斑病

西瓜細(xì)菌性果斑?。˙acterial Fruit Blotch）又稱細(xì)菌性斑點(diǎn)病、西瓜水漬病、果實(shí)腐斑病等，病原菌是燕麥?zhǔn)人峋鞴蟻喎N（Acidovorax avenae subsp. citrulli）。該病最早于1969年由Crall和Schenck[1]在美國佛羅里達(dá)州發(fā)現(xiàn)，我國1985年發(fā)現(xiàn)并開始報(bào)道瓜類細(xì)菌性果斑病的發(fā)生和危害[2-4]。該病是典型的由種子帶菌引起的傳染性病害，是我國規(guī)定的檢疫性病害之一。在田間，該病菌可為害果實(shí)、葉片和嫩莖，引起果實(shí)腐爛變褐，嫩莖、葉腐爛，幼苗坍塌死亡，為害嚴(yán)重[5]。

細(xì)菌性果斑病是目前西瓜育苗中一種新的毀滅性病害。部分育苗場育苗時(shí)，因?yàn)樵摬〉那秩驹斐伤烂纾瑩p失在80% 以上[6]。由于病菌主要通過種子傳播[7-8]，病瓜種子帶菌率較高[9]，病原菌從被感染的種子傳播到幼苗的幾率很高[8]。育苗前選用健康種子或?qū)ΨN子進(jìn)行防病處理是控制西瓜細(xì)菌性果斑病傳播的主要途徑。西瓜細(xì)菌性果斑病初侵染源除了種子之外，還有土壤、病殘?bào)w、其他雜草和寄主[10]。由于目前西瓜集約化嫁接育苗生產(chǎn)中主要采用基質(zhì)育苗，育苗基質(zhì)是否能傳播西瓜細(xì)菌性果斑病，以及采用何種藥劑具有較好的防效是西瓜育苗生產(chǎn)中亟待解決的問題。本研究旨在分析帶菌育苗基質(zhì)與西瓜幼苗果斑病之間的關(guān)系，并篩選適合對育苗基質(zhì)進(jìn)行噴淋消毒的藥劑，探討科學(xué)合理的育苗基質(zhì)消毒技術(shù)，以期為西瓜健康種苗的生產(chǎn)提供技術(shù)支撐。

1 材料和方法

1.1 供試材料

供試西瓜種子為早佳（84-24，由新疆明鑫科鴻農(nóng)業(yè)科技有限責(zé)任公司提供）。西瓜果斑病菌株為pslbtw20，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所趙廷昌先生惠贈。供試培養(yǎng)基為KBA培養(yǎng)基（硫酸鎂1.5 g、磷酸氫二鉀1.5 g、瓊脂20 g、甘油10 g、蛋白胨20 g、蒸餾水1 000 mL、pH值7.0～7.2）。育苗基質(zhì)為V（草炭） ∶ V（珍珠巖）=2 ∶ 1。藥劑為可殺得叁仟（美國杜邦公司生產(chǎn)）、加瑞農(nóng)（北興化學(xué)工業(yè)株式會社生產(chǎn)）、加收米（北興化學(xué)工業(yè)株式會社生產(chǎn)）、注射用硫酸鏈霉素（華北制藥股份有限公司生產(chǎn)）、90% 新植霉素（石家莊曙光制藥廠生產(chǎn)）。試驗(yàn)于2011年8月18日至11月1日在華中農(nóng)業(yè)大學(xué)校內(nèi)進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 藥劑的室內(nèi)抑菌和殺菌試驗(yàn) 抑菌作用采用紙碟法進(jìn)行測定[11]，殺菌效果測定按照趙廷昌等的方法進(jìn)行[12]。

1.2.2 帶菌育苗基質(zhì)與西瓜幼苗細(xì)菌性果斑病間的關(guān)系試驗(yàn) 細(xì)菌性果斑病菌的接種參考秦芳玲等[13]解磷細(xì)菌的接種方法并進(jìn)行改進(jìn)。采用KBA液體培養(yǎng)基對西瓜細(xì)菌性果斑病菌進(jìn)行培養(yǎng)（28 ℃，220 r·min-1），當(dāng)菌液濃度OD600值達(dá)到0.3～0.4（濃度約為108 cfu·mL-1）時(shí)，用無菌水分別稀釋成107、106、105 cfu·mL-1；然后把各濃度水平的細(xì)菌懸浮液接種到育苗基質(zhì)，1 kg基質(zhì)拌600 mL菌液，即基質(zhì)的帶菌量分別約為109、108、107 cfu·kg-1，以不接菌為對照。然后播種已經(jīng)催芽的早佳種子，4次重復(fù)，完全隨機(jī)排列，每個(gè)重復(fù)50株，每天統(tǒng)計(jì)西瓜幼苗發(fā)病率，15 d后稱量各處理西瓜苗地上部鮮質(zhì)量并計(jì)算病害等級。

1.2.3 藥劑消毒帶菌基質(zhì)對西瓜苗期細(xì)菌性果斑病的防治效果試驗(yàn) 按照1.2.2的結(jié)果，選取109 cfu·kg-1為育苗基質(zhì)的接菌量。將西瓜細(xì)菌性果斑病菌接種到育苗基質(zhì)后，藥劑噴淋基質(zhì)并混合均勻，藥劑用量為100 kg·m-3基質(zhì)[14]。供試藥劑及濃度為：加收米400倍液、加瑞農(nóng)600倍液、90% 新植霉素300 mg·L-1、注射用硫酸鏈霉素300 mg·L-1和可殺得叁仟1 500倍液，以不消毒為空白對照，共6個(gè)處理。完全隨機(jī)排列，重復(fù)4次，每個(gè)重復(fù)50株。試驗(yàn)采用 50孔穴盤，每個(gè)穴盤容納約0.004 m3基質(zhì)，藥劑消毒處理后播種已經(jīng)催芽的早佳種子，每天統(tǒng)計(jì)西瓜幼苗的發(fā)病率，15 d后稱量各處理西瓜苗地上部鮮質(zhì)量并計(jì)算病害等級。

1.2.4 幼苗生長環(huán)境條件 試驗(yàn)期間溫室溫度為20～30 ℃，平均相對空氣濕度80%，無補(bǔ)光措施，早佳在溫室中生長15 d。

1.2.5 病害等級分級和相對防效計(jì)算 病害等級的分級標(biāo)準(zhǔn)參考Bahar等[15]的方法：按照“處理地上部鮮質(zhì)量/對照地上部平均鮮質(zhì)量”的百分比把病害等級分為8個(gè)等級：0級，>90%；1級，76%～90%；2級，61%～75%；3級，46%～60%；4級，31%～45%；5級，16%～30%；6級，≤15%；7級，全部死苗。

防治效果的計(jì)算公式參考王欽英等[16]的方法：防治效果/%=（對照發(fā)病率-處理發(fā)病率）/對照發(fā)病率×100

1.2.6 數(shù)據(jù)分析 用SAS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和多重比較。對于發(fā)病率數(shù)據(jù)，用平方根反正弦轉(zhuǎn)換后，再進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 5種藥劑對西瓜細(xì)菌性果斑病菌的室內(nèi)抑菌和殺滅效果

室內(nèi)應(yīng)用圓形濾紙法測定結(jié)果表明，加瑞農(nóng)（600、800、1 000倍液）、加收米（400、600、800倍液）、可殺得叁仟（1 500倍液）、注射用硫酸鏈霉素（100、200、300 mg·L-1）對西瓜細(xì)菌性果斑病菌無抑菌作用。90% 新植霉素（100、200、300 mg·L-1）對西瓜細(xì)菌性果斑病菌有較好的抑菌作用，抑菌圈直徑分別為15.3、19.3、22.5 mm，濃度高抑菌效果顯著。

表1試驗(yàn)結(jié)果顯示，加瑞農(nóng)、加收米、注射用硫酸鏈霉素、可殺得叁仟、90% 新植霉素對西瓜細(xì)菌性果斑病菌均有不同程度的殺滅效果。對西瓜細(xì)菌性果斑病菌的殺菌作用為100% 的供試藥劑為加瑞農(nóng)（600、800倍液）、注射用硫酸鏈霉素（200、300 mg·L-1）；殺滅效果為75% 的有新植霉素（200、300 mg·L-1）、加瑞農(nóng)（1 000倍液）、注射用硫酸鏈霉素（100 mg·L-1）、可殺得叁仟（1 500倍液）；殺滅效果為 50% 的有加收米（400、600倍液）；殺滅效果為25% 的有加收米（800倍液）。

2.2 帶菌育苗基質(zhì)與西瓜幼苗細(xì)菌性果斑病間的關(guān)系

播種后第15天，不同基質(zhì)帶菌量（109、108、107 cfu·kg-1）下西瓜幼苗細(xì)菌性果斑病的病害等級分別為5、2和0.75，處理間存在顯著差異。不同基質(zhì)帶菌量下幼苗細(xì)菌性果斑病發(fā)病率隨時(shí)間的延長而增加（圖1）。隨著基質(zhì)帶菌量的增加，幼苗細(xì)菌性果斑病發(fā)病率逐漸增加。播種后第6天，西瓜幼苗子葉開始出現(xiàn)水漬狀病斑。播種后第10 天，不同基質(zhì)帶菌量下幼苗細(xì)菌性果斑病發(fā)病率分別為71.5%、30.5% 和6.5%?；|(zhì)帶菌量為109 cfu·kg-1時(shí)，播種后病情發(fā)展迅速，到第15 天時(shí)，幼苗細(xì)菌性果斑病發(fā)病率達(dá)到97%。

2.3 不同藥劑噴淋帶菌基質(zhì)對西瓜幼苗細(xì)菌性果斑病的防治效果

在基質(zhì)帶菌量為109 cfu·kg-1的情況下，采用不同藥劑噴淋帶菌基質(zhì)后幼苗細(xì)菌性果斑病發(fā)病率隨時(shí)間的變化見圖2。采用90% 新植霉素、注射用硫酸鏈霉素和可殺得叁仟分別噴淋帶菌基質(zhì)，播種后15 d，幼苗細(xì)菌性果斑病發(fā)病率與對照無顯著差異；用加瑞農(nóng)600倍液和加收米400倍液處理后幼苗細(xì)菌性果斑病發(fā)病率顯著低于對照。加瑞農(nóng)600倍液和加收米400倍液2種處理相比，播種后11 d內(nèi)，幼苗細(xì)菌性果斑病的發(fā)病率無顯著差異，播種后11～15 d，加瑞農(nóng)600倍液的防治效果優(yōu)于加收米400倍液。播種后第15天，不同藥劑噴淋帶菌基質(zhì)對西瓜幼苗細(xì)菌性果斑病的防治效果見表2。在基質(zhì)未消毒處理（帶菌量109 cfu·kg-1）的情況下，幼苗細(xì)菌性果斑病發(fā)病率97%，病害等級為5；加瑞農(nóng)600倍液消毒基質(zhì)后幼苗細(xì)菌性果斑病發(fā)病率為52%，病害等級為1.75，防效達(dá)46.4%；加收米400倍液消毒基質(zhì)后幼苗細(xì)菌性果斑病發(fā)病率為67.5%，病害等級為2.5，防效達(dá)30.4%，其他藥劑基本無效。

3 討 論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，帶菌育苗基質(zhì)能夠作為初侵染源，從而使西瓜幼苗發(fā)生細(xì)菌性果斑病，而且基質(zhì)帶菌量越多，西瓜幼苗發(fā)病越嚴(yán)重，表明基質(zhì)帶菌也是西瓜感染細(xì)菌性果斑病的重要途徑。在細(xì)菌性果斑病發(fā)生的育苗區(qū)，即使對新購買的育苗基質(zhì)進(jìn)行消毒處理也是非常必要的。

比較藥劑室內(nèi)抑菌和殺菌試驗(yàn)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)5種藥劑對細(xì)菌性果斑病菌均有一定的殺滅效果，但是僅90% 新植霉素具有抑菌作用，其他4種藥劑均無抑菌作用，這可能與藥劑在培養(yǎng)基上的擴(kuò)散性有關(guān)，如果僅使用抑菌圈法篩選藥劑，可能會漏選藥劑。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同藥劑處理的室內(nèi)結(jié)果與田間結(jié)果存在不一致的問題，如加收米400倍液在室內(nèi)的殺菌效果僅達(dá)到50%，但是在田間的防效達(dá)到了30.4%，相反，在室內(nèi)殺菌效果優(yōu)于加收米的可殺得叁仟、注射用硫酸鏈霉素和90% 新植霉素，在帶菌基質(zhì)的消毒處理中卻幾乎沒有防效，具體原因尚待進(jìn)一步研究。

本試驗(yàn)研究了高劑量帶菌基質(zhì)（帶菌量為109 cfu·kg-1）條件下不同藥劑處理的效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加瑞農(nóng)600倍液和加收米400倍液具有一定的防治效果，考慮到育苗工廠中通過基質(zhì)高劑量帶菌的情況很少，多數(shù)情況下可能是低劑量帶菌，因此上述2種藥劑可以作為基質(zhì)消毒的推薦藥劑。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，通過育苗基質(zhì)帶菌是西瓜感染細(xì)菌性果斑病的重要途徑，當(dāng)基質(zhì)帶菌量 107～109 cfu·kg-1時(shí)，隨著基質(zhì)帶菌量的增大，西瓜發(fā)生細(xì)菌性果斑病的程度越重。室內(nèi)抑菌試驗(yàn)表明，90% 新植霉素（100、200、300 mg·L-1）對西瓜細(xì)菌性果斑病菌有較好的抑制效果；加瑞農(nóng)（600、800倍液）處理西瓜細(xì)菌性果斑病菌5 h，對西瓜細(xì)菌性果斑病菌的室內(nèi)殺滅效果達(dá)到100%。在基質(zhì)帶菌量為109 cfu·kg-1的情況下，加瑞農(nóng)600倍液和加收米400倍液噴淋消毒基質(zhì)具有減輕西瓜幼苗細(xì)菌性果斑病的作用，其防治效果分別為46.4% 和30.4%，加瑞農(nóng)600倍液處理的效果最佳。

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