齊懿鳴，孫英麗

（1.黑龍江省農(nóng)墾乳品檢測中心，哈爾濱 150090；2.黑龍江完達(dá)山哈爾濱乳品有限公司，哈爾濱，150078）

對羥基苯甲酸酯( parabens) 又名尼泊金酯，是一類由對羥基苯甲酸所形成的酯，因其抗菌譜廣，在空氣中穩(wěn)定、對酸堿穩(wěn)定、低毒和價格低廉等諸多優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用做食品、藥品、化妝品等的防腐抗菌劑。對羥基苯甲酸酯雖然可以被人體快速吸收、代謝并排泄，但近年來有研究顯示，該類物質(zhì)和其代謝物具有弱雌激素活性，可能是乳房癌和男性不育等疾病的誘因[1]。對羥基苯甲酸酯最大允許使用量（以對羥基苯甲酸計(jì)），醬油、果醬（罐頭除外）、醬及醬制品、果蔬汁（肉）飲料、風(fēng)味飲料0.25g/kg、經(jīng)表面處理的鮮水果、新鮮蔬菜0.012g/kg；焙烤食品餡料（僅限糕點(diǎn)餡）0.5g/kg；熱凝固蛋制品（如蛋黃酪、松花蛋腸）、碳酸飲料0.2g/kg；醋0.1 g/kg。對羥基苯甲酸也用作染料、農(nóng)藥的中間體。在農(nóng)藥中用于合成有機(jī)磷殺蟲劑GYAP、CYP；在染料工業(yè)中用于合成熱敏染料的顯色劑；還可用于彩色膠片及合成油溶性成色劑“538”及尼龍12中用作增塑劑的生產(chǎn)原料。另外，還用于液晶聚合物和塑料。

本文所采用的方法參考了GB/T 5009.31-2003[2]，對樣品前處理和色譜分析方法進(jìn)行優(yōu)化改進(jìn)，并用GB/T 5009.1-2003附錄A計(jì)算檢出限、精密度、回收率等。該法適用于檢測醋、果汁、果醬及含乳飲料等食品中對羥基苯甲酸酯類的檢測。

1 材料與方法

1.1 方法提要

試樣酸化后，對羥基苯甲酸酯類用乙醚提取濃縮后，用氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進(jìn)行分離測定，外標(biāo)法定量。

2.2 試劑

2.2.1 乙醚、重蒸。

2.2.2 無水硫酸鈉。

2.2.3 飽和氯化鈉溶液。

2.2.4 無水乙醇。

2.2.5 10g/L碳酸氫鈉溶液。

2.2.6 1：1鹽酸：量取50mL鹽酸，用水稀釋至100mL。

2.2.7 對羥基苯甲酸乙酯、丙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取對羥基苯甲酸乙酯、丙酯各0.1000g溶于100mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，該溶液1mg/mL。

2.2.8 對羥基苯甲酸乙酯、丙酯使用溶液：分別吸取0.5mL、1mL、2mL、4mL、6mL、8mL對羥基苯甲酸乙酯、丙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液于10mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，此時濃度分別為0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.40mg/mL、0.60mg/mL、0.80mg/mL。

2.3 儀器和設(shè)備

2.3.1 氣相色譜儀：配有FID檢測器。

2.3.2 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。

2.4 測定步驟

2.4.1 提取凈化

稱取5g的醬油于125mL分液漏斗中。加入1：1鹽酸酸化，10Mlbaohe 氯化鈉溶液，搖勻，分別以75mL、50 mL、50 mL乙醚提取三次，每次2min，放置片刻，棄去水層，合并乙醚層于250mL分液漏斗中，加10mL飽和氯化鈉溶液洗滌一次，再分別以10g/L碳酸氫鈉溶液30mL、30mL、30mL、洗滌三次，棄去水層。將提取液經(jīng)事先裝有15—20g無水硫酸鈉的漏斗濾入250mL 瓶底燒瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸干，然后轉(zhuǎn)移定容至5mL容量瓶中，供氣相色譜儀用。

2.4.2 測定

2.4.2.1 色譜條件

色譜柱：DB-1701毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 um）；

進(jìn)樣量：1 μL；

分流比：20：1

進(jìn)樣口溫度：230 ℃；

載氣：氮?dú)猓? mL/min；

升溫程序：100 ℃保持1 min，以10 ℃/min進(jìn)行升溫，達(dá)到250 ℃保持2 min；

檢測器溫度：250 ℃；

H2流速：45 mL/min；

Air流速：450 mL/min。

2.4.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

將對羥基苯甲酸乙酯、丙酯標(biāo)準(zhǔn)系列溶液分別進(jìn)樣后，以標(biāo)樣濃度對峰面積作標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性相關(guān)系數(shù)為0.9990以上。

2.4.2.3 將試樣進(jìn)樣，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間定性樣品中對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的色譜峰。根據(jù)樣品的峰面積，查標(biāo)準(zhǔn)曲線得出對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的含量。

2.5 結(jié)果計(jì)算

樣品中對羥基苯甲酸酯類含量按式計(jì)算：

式中：X——樣品中對羥基苯甲酸酯類的含量，單位為毫克每千克（g/kg）；

C——從標(biāo)準(zhǔn)曲線求得測定溶液中對羥基苯甲酸酯類的含量，單位為微克每毫升（mg/mL）；

V——試樣的定容體積，單位為毫升（mL）；

m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

所得結(jié)果保留兩位小數(shù)。

在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算數(shù)平均值的10%。

5 檢測方法評價

5.1 線性分析范圍評價

將標(biāo)準(zhǔn)使用液按照色譜條件，注入氣相色譜儀，以峰面積進(jìn)行定量，繪制成曲線。見圖1、圖2。Y1= (-5542.225053) +(915976.434764) X；R2=0.999827；Y2= (-5898.232289) +(974952.472964)X；R2= 0.999898

圖1 對羥基苯甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 對羥基苯甲酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 對羥基苯甲酸乙酯測定結(jié)果統(tǒng)計(jì)（空白樣品測定含量為0g/kg）

表2 對羥基苯甲酸丙酯測定結(jié)果統(tǒng)計(jì)（空白樣品測定含量為0g/kg）

從圖1和圖2中可以看出對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的檢測范圍在0.05—0.80mg/mL范圍內(nèi)，線性良好，相關(guān)系數(shù)R=0.9998。

5.2 方法的準(zhǔn)確度，精密度評價

用標(biāo)準(zhǔn)加入回收實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確度，用平行試驗(yàn)的精密度驗(yàn)證方法的重復(fù)性。按照方法要求來處理樣品，所有樣品均稱取5g，在樣品中分別添加0.4mg、0.6mg、0.8mg三個梯度的對羥基苯甲酸酯類混合溶液，同時測定空白樣品，按照方法進(jìn)行處理。按以上方法的色譜條件下進(jìn)樣，結(jié)果見表1、表2。

0.4 ppm標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)7次分析匯總報告：如表3、表4所示。

表3 對羥基苯甲酸乙酯精密度分析結(jié)果

表4 對羥基苯甲酸丙酯精密度分析結(jié)果

要求在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對值不得超過算術(shù)平均值的10%，所以此方法的精密度很高。

5.3 方法的檢測底限評價

根據(jù)3倍信噪比所對應(yīng)的濃度，計(jì)算得到對羥基苯甲酸乙酯的檢出限為1mg/kg，對羥基苯甲酸丙酯的檢出限為1mg/kg。

5.4 重現(xiàn)性

在本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，通過人員比對實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證方法的重現(xiàn)性。實(shí)驗(yàn)員甲和乙用同一檢測方法，同一檢測儀器在不同時間，做一批樣品，結(jié)果見表5、表6。

表5 實(shí)驗(yàn)員甲乙實(shí)驗(yàn)結(jié)果比對（對羥基苯甲酸乙酯）

表6 實(shí)驗(yàn)員甲乙實(shí)驗(yàn)結(jié)果比對（對羥基苯甲酸丙酯）

表3、表4結(jié)果表明：濃度在0.082g/kg時，實(shí)驗(yàn)員甲對羥基苯甲酸乙酯RSD%=2.21%、對羥基苯甲酸丙酯RSD%=1.71%，實(shí)驗(yàn)員乙對羥基苯甲酸乙酯RSD%=1.23%、對羥基苯甲酸丙酯RSD%=0.81%。對甲乙兩人的檢驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)行F檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)，結(jié)果表明兩人的對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯檢驗(yàn)結(jié)果無顯著差異。

6 結(jié)論

通過驗(yàn)證，對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯測定濃度在0.05—0.80mg/mL范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)R=0.9998，檢出限為1mg/kg，加標(biāo)回收率在93.51%～95.94%之間，RSD%在所要求范圍內(nèi)，對雙人比對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行F檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)，結(jié)果表明其檢驗(yàn)結(jié)果無顯著差異。

從以上數(shù)據(jù)可以看出該方法檢測醬油中對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可以適用于本實(shí)驗(yàn)室在實(shí)際工作運(yùn)用此方法檢測醬油中對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯的含量。

[1] 岳強(qiáng).對羥基苯甲酸酯在人體中的暴露研究進(jìn)展，北方環(huán)境，第23 卷第3 期2011 年3 月

[2] GB/T 5009.31－2003 食品中對羥基苯甲酸酯類的測定。