白靜麗，姜海燕，劉慶彬

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130021)

目前研究表明，肝纖維化的形成與氧自由基介導(dǎo)的肝損傷有關(guān)，其中SOD、MDA及GSH-PX的異常與發(fā)病關(guān)系尤為密切。本研究通過(guò)觀察化纖通絡(luò)顆粒對(duì)肝纖維化大鼠血清SOD、MDA、GSH-PX和HYP的影響，進(jìn)一步探討其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 正常雄性Wistar大鼠60只(清潔級(jí))，體質(zhì)量(220±20)g，吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥品及試劑 化纖通絡(luò)顆粒(由丹參、三七、地龍、虎杖、大黃、鱉甲、黃芪、當(dāng)歸組成)，由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑室制備；復(fù)方鱉甲軟肝片:福瑞制藥內(nèi)蒙古集寧制藥廠生產(chǎn)，用蒸餾水溶解為0.3 g/mL的溶液，冷藏備用。四氯化碳(CCl4分析純):北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱苷肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)試劑盒購(gòu)自南京建成生物制品公司。

1.3 動(dòng)物模型的建立 受試大鼠隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組(15只)，模型組(15只)，復(fù)方鱉甲軟肝片組(15只)，化纖通絡(luò)顆粒組(15只)。正常喂養(yǎng)1周后，應(yīng)用40%CCl4豆油溶液，皮下注射給藥，首次按0.5 mL/100 g，以后按0.3 mL/100 g體質(zhì)量，每周注射2次，連續(xù)8周[1]。

1.4 動(dòng)物分組 正常對(duì)照組：從實(shí)驗(yàn)第1天開始，灌胃生理鹽水1.5 mL/100 g，每日1次；模型組：造模同時(shí)，每天灌服等量生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照組：造模同時(shí)，灌服復(fù)方鱉甲軟肝片溶液1.5 mL/100 g，日1次；治療組：造模同時(shí)開始每天以1.5 mL/100 g灌服化纖通絡(luò)顆粒溶液，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

1.5 標(biāo)本的采集 各組于8周末，禁食12 h后斷頭取血，離心，取血清，-20 ℃保存，留做血清學(xué)檢查；取血后立即去頭取肝，一部分迅速投入液氮，之后轉(zhuǎn)入-70 ℃冰箱保存，備肝組織勻漿，測(cè)組織生化。

1.6 實(shí)驗(yàn)方法 肝勻漿制備：肝組織解凍后，生理鹽水反復(fù)沖洗，濾紙吸干，切取小塊，電子分析天平稱重(100～300 mg)，置于試管內(nèi)，按1∶9加入生理鹽水，高速分散器勻漿，低溫高速離心機(jī)3 000 r/15 min，取上清液，以上操作均于冰浴中進(jìn)行。按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行SOD、MDA、GSH-PX檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)肝纖維化大鼠SOD、MDA和GSH-PX的影響 見表1。

2.2 對(duì)肝纖維化大鼠HYP含量的影響 見表2。

3 討論

化纖通絡(luò)顆粒是根據(jù)中醫(yī)傳統(tǒng)理論和多年臨床探索研制而成的復(fù)方中藥制劑，具有保肝降酶，改善肝臟微循環(huán)，降低細(xì)胞因子等水平，修復(fù)增生變性的肝纖維結(jié)締組織，保護(hù)肝細(xì)胞和抑制膠原合成的作用。方中丹參、三七、地龍活血化瘀、益氣養(yǎng)血通絡(luò)；虎杖清熱利濕、解毒活血；大黃活血化瘀、通腑泄熱，配以黃芪益氣升陽(yáng)、鼓舞氣機(jī)，生地黃滋陰補(bǔ)腎，二藥合用扶正補(bǔ)虛。諸藥合用共奏化纖通絡(luò)之功。

表1 各組大鼠肝組織SOD、MDA和GSH-PX變化(n=15，±s)

表2 各組大鼠肝組織羥脯氨酸含量變化(±s)

自由基引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)是誘發(fā)肝損傷的重要原因[2-3]。HYP是膠原蛋白所特有的，肝纖維化時(shí)，膠原蛋白可增加50%左右，而肝硬化時(shí)可高達(dá)6倍[4]。因此，測(cè)定HYP的含量可成為反映肝纖維化程度的直接指標(biāo)。

本研究結(jié)果表明，化纖通絡(luò)顆粒可提高SOD、GSH-PX活性，降低MDA及HYP的生成，從而減少ECM積聚，對(duì)肝纖維化的形成具有明顯防治作用，其機(jī)制可能與抗脂質(zhì)過(guò)氧化損傷及降低膠原蛋白含量有關(guān)。

[1]程明亮,劉三都.肝硬化細(xì)胞模型的研究及診療評(píng)價(jià)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1996:291.

[2]齊寶寧,易建華,唐國(guó)慧,等.正己烷致大鼠脂質(zhì)過(guò)氧化及肝細(xì)胞DNA損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2007,28(2):145.

[3]馬蘭軍,毛雁.沙苑子對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練大鼠肝臟自由基代謝的影響[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2007,28(4):409.

[4]Gressner AM,Weiskirchen R,Breitkopf K,et al.Roles of TGF-beta in hepatic fibrosis[J].Front Biosci,2002(7):793.