陳衛(wèi)紅，王 欣，李 瀚，袁衛(wèi)東，程風(fēng)華，劉大基

(1.黃石中醫(yī)醫(yī)院，湖北 黃石 435000；2.武漢同濟(jì)醫(yī)學(xué)院同濟(jì)醫(yī)院 膽胰外科，湖北 武漢 430030)

近年來我國重癥急性胰腺炎(Severest Acute Pancreatitis，SAP)發(fā)病率呈上升趨勢，臨床起病急、病死率高達(dá)20%～30%[1-3]。對其發(fā)病機(jī)制至今未完全闡明，臨床亦缺乏有效的特異性藥物。而借助SAP動物模型是研究的重要手段[4]。本文通過對30只大鼠誘導(dǎo)SAP模型進(jìn)行復(fù)方丹參治療對照研究，通過檢測C反應(yīng)蛋白(CRP)、血清淀粉酶(Amy)、乳酸脫氫酶(LDH)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)等免疫因子變化，探討復(fù)方丹參注射液對SAP治療的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動物 二級清潔健康大鼠40只，體質(zhì)量220～250 g，均由湖北醫(yī)學(xué)動物中心提供。

1.2 試劑 Amy、CRP和LDH試劑盒均購于上?？迫A生物試劑公司；IL-1和IL-6檢測試劑盒購于美國R-D公司；蘇木素、伊紅(HE)染色試劑盒購于珠海貝索生物技術(shù)有限公司。

1.3 模型制備 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，于術(shù)前12 h禁食不禁水。30只大鼠間隔1 h，連續(xù)7次腹腔內(nèi)注射雨蛙素50 mg/kg，并在首次注射雨蛙素5 h后腹腔注射10 mg/kg脂多糖。蛋白酶體抑制劑Ps-341陽性對照組：注射脂多糖前0.5 h腹腔注射50% DMSO 0.2 mL(生理鹽水稀釋)。復(fù)方丹參注射液治療組：復(fù)方丹參注射液20 mL加0.9%氯化鈉150 mL靜脈滴注每日1次，共7 d。對照組：用生理鹽水代替雨蛙素和脂多糖，依上述同樣方法腹腔注射。

1.4 檢測指標(biāo) 觀察各組大鼠一般情況及病死率。

1.5 血清淀粉酶及血漿內(nèi)毒素測定 各組大鼠于術(shù)后24 h乙醚吸入麻醉后開胸，迅速心臟穿刺取血液5 mL，4 ℃靜置1 h，3 000 r/min離心10 min，取500 μL上清，日本東芝120全自動生化分析儀檢測Amy、LDH、CRP。

1.6 血清細(xì)胞因子檢測 同上處理，取500 μL上清，-20 ℃保存，ELISA法檢測IL1-β、IL-6。

1.7 胰腺組織病理學(xué)檢查 術(shù)后12 h取部分胰腺組織，4%多聚甲醛固定。常規(guī)石蠟切片，HE染色，由2位專業(yè)病理醫(yī)師雙盲閱片，每張切片隨機(jī)選取10個視野，參照RONGIONE等[5]組織學(xué)病理分級法按水腫、炎細(xì)胞浸潤、出血壞死進(jìn)行評分，取各項積分總和為最終得分，10個視野的平均分?jǐn)?shù)為每張切片的最后評分。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血清淀粉酶、乳酸脫氫酶、C反應(yīng)蛋白水平比較 見表1。

2.2 各組大鼠對血清白介素IL-1和IL-6的水平比較 見表2。

2.3 Ps-341各組大鼠胰腺組織評分比較 見表3。

表1 各組大鼠血清淀粉酶、乳酸脫氫酶和C反應(yīng)蛋白水平比較(±s)

表2 各組大鼠血清IL-1和IL-6水平比較(±s) ng/mL

表3 各組大鼠胰腺組織評分比較(±s)

3 討論

SAP的發(fā)病過程中出現(xiàn)的組織壞死、大量滲出和繼發(fā)性感染均可刺激抗體釋放大量炎癥介質(zhì)和各種細(xì)胞因子，包括TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等。主要介導(dǎo)免疫和炎癥反應(yīng)，其大量釋放時會破壞炎癥和抗炎癥細(xì)胞因子之間的平衡，導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)和多器官功能障礙(MODS)。SIRS是多器官功能障礙(MODS)的主要誘因。因此預(yù)防與治療SIRS是治療SAP的重要措施。目前，中西醫(yī)結(jié)合治療和機(jī)制研究有一些報道[1-4],但是尚未發(fā)現(xiàn)一種特效的藥物。本文就復(fù)方丹參注射液的抗炎和啟動細(xì)胞抗炎因子平衡作了對比研究，結(jié)果均獲得同抗蛋白酶一樣的效果。

復(fù)方丹參注射液是以丹參為主的中藥復(fù)方制劑?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究[6-8]表明，丹參的主要成分是丹參酮，具有抑制血小板凝聚、降低血黏度、抗血栓形成，改善微循環(huán)和血液流變學(xué)的作用，同時還抑制溶酶體的釋放和中性粒細(xì)胞的趨化作用，有抗氧化和鈣通道阻滯作用。其作用機(jī)制可能在于：1)為活血化瘀中藥，具有抑制血小板黏附、聚集和釋放的作用，能有效降低紅細(xì)胞聚集指數(shù)，改善血液流變性，調(diào)節(jié)血液黏稠度，改善壞死區(qū)局部微循環(huán)及血液流變學(xué)的作用。2)具有良好的清除氧自由基、抗脂質(zhì)過氧化作用，鈣通道阻滯劑作用。3)有保護(hù)細(xì)胞膜、調(diào)節(jié)組織修復(fù)與再生作用。4)對重要臟器的缺血再灌注損傷有較好的保護(hù)作用。謝敏等[9]研究表明，在西醫(yī)治療重癥急性胰腺炎的基礎(chǔ)上加用復(fù)方丹參注射液能夠提高SAP治療效果，顯著降低患者血清中的淀粉酶、白細(xì)胞水平和使血鈣恢復(fù),使患者的癥狀、體征能較快緩解，有效阻止了胰腺炎病變進(jìn)一步惡化，加速機(jī)體康復(fù)。

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