石云龍，孟祥軍

(1.沈陽醫(yī)學(xué)院沈洲醫(yī)院藥劑科，遼寧沈陽110002;2.沈陽醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院化學(xué)教研室)

甲磺酸托烷司瓊是一種外周神經(jīng)原及中樞神經(jīng)系統(tǒng)5-羥色胺3(5-HT3)受體的高效、高選擇性競(jìng)爭(zhēng)拮抗劑。用于預(yù)防和治療癌癥化療引起的惡心和嘔吐。在控制強(qiáng)致吐化療藥物的急性嘔吐及改善食欲不振方面療效好，不良反應(yīng)少［1］。甲磺酸托烷司瓊注射液現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為國家食品藥品監(jiān)督管理局甲磺酸托烷司瓊注射液試行標(biāo)準(zhǔn)WS-695(X-509)-2002(北京四環(huán)醫(yī)藥科技有限公司)。該標(biāo)準(zhǔn)影響因素較多，試劑配制繁雜且有一定毒害，操作步驟也較繁瑣。該制劑在《中國藥典》化學(xué)藥品標(biāo)準(zhǔn)第二冊(cè)中沒有收載。為了更好地控制本產(chǎn)品質(zhì)量，提高甲磺酸托烷司瓊注射液試行標(biāo)準(zhǔn)，保證產(chǎn)品的療效，本文參照國家食品藥品監(jiān)督管理局鹽酸托烷司瓊注射液進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)(JX20040224)［2］，采用高效液相色譜法對(duì)甲磺酸托烷司瓊注射液中有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行研究，建立了快速、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、靈敏度高的有關(guān)物質(zhì)檢查方法，可更好用于本品的質(zhì)量控制。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 AUW120D型電子天平 (1/10萬)(日本島津儀器有限公司)、檢測(cè)器SPD-20A、高壓泵LC-20A、系統(tǒng)控制器CBM-20Alite高效液相色譜儀 (日本島津儀器有限公司)。

1.1.2 主要試劑 甲磺酸托烷司瓊對(duì)照品 (自制工作對(duì)照品，純度為99.8%)，甲磺酸托烷司瓊注射液 (山西諾成制藥有限公司)，規(guī)格:2 ml∶6 mg(以甲磺酸托烷司瓊計(jì))。(批號(hào)為10101011、10101111、10101211)，乙腈 (色譜純)，甲醇(色譜純)，三乙胺 (色譜純)，水 (純化水)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為甲醇－水－乙腈－三乙胺 (750∶200∶50∶0.2);流速為1.0 ml/min;檢測(cè)波長284 nm;柱溫為室溫;進(jìn)樣量20μl。

1.2.2 溶液的配制 供試品溶液:取本品適量，精密稱定，用流動(dòng)相A溶解并稀釋制成每ml中含有甲磺酸托烷司瓊1 mg的溶液，作為供試品溶液。對(duì)照溶液:精密稱取供試品溶液1 ml，置200 ml量瓶中，加流動(dòng)相A稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。

1.2.3 檢測(cè)波長的選擇 取甲磺酸托烷司瓊對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1ml含有甲磺酸托烷司瓊10μg的溶液，照紫外分光光度法 (中國藥典2010年版二部附錄ⅣA)，在190～400 nm處掃描，甲磺酸托烷司瓊在284 nm處有最大吸收，標(biāo)準(zhǔn)中確定的檢測(cè)波長是本品的特征吸收峰，選擇合理，因此確定標(biāo)準(zhǔn)中的檢測(cè)波長為284 nm。

2 結(jié)果

2.1 線性實(shí)驗(yàn) 精密稱取甲磺酸托烷司瓊對(duì)照品約13.4 mg，置10 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。精密量取貯備溶液0.8、0.9、1.0、1.1、1.2 ml分別置10 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積 (A)對(duì)檢測(cè)量 (μg)進(jìn)行線性回歸 (n=5)，得回歸方程為:Y=2 547.2X+3.456，r=1。結(jié)果表明，以高效液相色譜法測(cè)定甲磺酸托烷司瓊的檢測(cè)量在1.6～2.4μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 甲磺酸托烷司瓊標(biāo)準(zhǔn)曲線圖譜

2.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取本品 (批號(hào)10101011)，取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，精密量取適量，加流動(dòng)相稀釋制成每1ml含0.1 mg的溶液，精密量取20 μl注入液相色譜儀，連續(xù)測(cè)定6次，記錄色譜圖;另取甲磺酸托烷司瓊對(duì)照品適量，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。RSD為0.15%，結(jié)果表明，保留時(shí)間及含量測(cè)定結(jié)果的 RSD≤2.0%，本方法重復(fù)性良好。

2.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液分別于配制后0、1、2、3、4 h時(shí)內(nèi)按“3.2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，連續(xù)測(cè)定5次，記錄色譜圖;另取甲磺酸托烷司瓊對(duì)照品適量，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。RSD為0.15%，結(jié)論:5次進(jìn)樣所得的含量結(jié)果的RSD值均＜2.0%，表明供試品溶液在4 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 耐用性實(shí)驗(yàn) 分別考察流動(dòng)相比例變化±2%、流動(dòng)相 pH值變化±0.2、柱溫變化 ±5℃、檢測(cè)變化±2 nm、流速變化±5%以及采用三根不同批號(hào)的色譜柱進(jìn)行測(cè)定時(shí)，每個(gè)條件下各測(cè)試兩次，可接受的標(biāo)準(zhǔn)為:主成分峰的拖尾因子不得大于2.0，主成分峰與其他成分峰必須達(dá)到基線分離;各條件下的含量結(jié)果 (n=18)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。結(jié)論:試驗(yàn)結(jié)果表明，RSD均小于2%，本測(cè)定方法穩(wěn)定，不會(huì)受到客觀因素的影響，準(zhǔn)確度高。

2.5 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn) 按處方量的80%、100%、120%精密稱取甲磺酸托烷司瓊對(duì)照品 (含量99.8%)各3份，加入相同輔料，再加流動(dòng)相稀釋制成甲磺酸托烷司瓊質(zhì)量濃度分別為0.08、0.10、0.12 mg/ml的溶液，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖;另取甲磺酸托烷司瓊對(duì)照品適量，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得X(平均值)=99.99%，RSD=0.51%。

結(jié)論:本法回收率RSD＜2.0%，準(zhǔn)確度良好。表明本方法準(zhǔn)確可靠。

2.6 含量測(cè)定 含量測(cè)定結(jié)果10101011、10101111、10101211分別為99.8%、99.8%、99.6%。

3 討論

對(duì)于高效液相色譜法含量測(cè)定，原采用以甲醇 －水 －乙腈 －三乙胺 (750∶200∶50∶0.3)為流動(dòng)相，色譜峰形較好，但是考慮到三乙胺加入量較多會(huì)對(duì)色譜柱損害較大，所以采用以甲醇－水－ 乙腈 － 三乙胺 (750∶200∶50∶0.2)為流動(dòng)相。

經(jīng)上述方法學(xué)驗(yàn)證，本標(biāo)準(zhǔn)中最后確定的色譜條件及檢測(cè)方法能夠準(zhǔn)確檢測(cè)產(chǎn)品含量及其相關(guān)雜質(zhì)，符合國家食品藥品監(jiān)督管理局甲磺酸托烷司瓊注射液試行標(biāo)準(zhǔn)中相關(guān)雜質(zhì)的限度要求，可以有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。本文建立了專屬、靈敏、快速、準(zhǔn)確的甲磺酸托烷司瓊注射液的含量測(cè)定，可以更好的控制該藥品的質(zhì)量。

［1］王宏宇，馮奉儀，李青.甲磺酸托烷司瓊預(yù)防化療藥物引起的惡心嘔吐 (Ⅱ期臨床試驗(yàn)報(bào)告) ［J］.中國新藥雜志，2001，10(3):226－227.

［2］鹽酸托烷司瓊注射液.JX20040224.國家食品藥品監(jiān)督管理局.國家進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn) ［S］.2005，1－3.