李忠權(quán)，黃右軍，楊炳壯，陳明棠，鄭 威

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 水牛研究所，廣西 南寧530001)

我國是沼澤型水牛(役用水牛) 飼養(yǎng)大國，但良種極少。摩拉、尼里/ 拉菲(簡稱尼里) 水牛屬河流型乳用水牛品種，原產(chǎn)地在印度和巴基斯坦，是當(dāng)?shù)刈詈玫娜榕Ｆ贩N，被世界上許多國家引進以改良本地牛。挖掘良種水牛繁殖潛力，加快良種繁殖，能夠提高種源供應(yīng)能力，對促進我國水牛品種改良和水牛奶業(yè)開發(fā)具有重大意義。本研究旨在通過以摩拉、尼里水牛凍精與本地水牛卵母細胞進行體外受精生產(chǎn)的胚胎移植到本地母水牛、摩拉、尼里母水牛，探討水牛體外胚胎質(zhì)量、安全性、移植方法以及移植效果，推動試管水牛技術(shù)應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 水牛體外胚胎生產(chǎn)

在當(dāng)?shù)赝涝讏鍪占镜厮Ｂ殉?，保存于盛?5 ～35 ℃生理鹽水的保溫瓶中，6 h內(nèi)運回實驗室，采集卵母細胞。精液為廣西畜禽品種改良站生產(chǎn)的摩拉、尼里水牛細管凍精。按黃右軍等水牛卵母細胞體外受精與早期胚胎發(fā)育的研究［1］方法生產(chǎn)的新鮮全胚135 枚、雙半胚65 枚。

按張秀芳等水牛體外受精胚胎的玻璃化冷凍［2］方法進行水牛胚胎冷凍與解凍。冷凍全胚56 枚、雙半胚10 枚。

1.2 受體母牛

從農(nóng)村購進7 ～10 歲本地水牛27 頭，本所水牛種畜場提供6 ～10 歲摩拉和尼里水牛31 頭，共計58 頭。所有水牛按常規(guī)奶牛舍飼飼養(yǎng)。

1.3 移胚器械

為法國IMV 卡蘇公司生產(chǎn)。

1.4 方法

將鮮胚和凍胚分別移入本地水牛和摩拉、尼里水牛等不同受體。具體方法: 胚胎移植的時間為受體母牛出現(xiàn)站立發(fā)情后第4～6 天進行移植。胚胎移植的部位: 移胚槍頭部通過子宮頸，進入黃體側(cè)子宮角，達到子宮大彎部位。移植胚胎的數(shù)目和胚齡: 每頭受體牛每次移植鮮胚(凍胚) 2 枚，胚齡為6 ～8 d的早期囊胚、囊胚、擴展囊胚。

2 結(jié)果與分析

2.1 胚胎移植的受胎率

本研究利用水牛體外雜種胚胎移植受體母牛106 頭次，其中鮮胚移植81 頭次，受胎36 頭次，受胎率44.4%; 凍胚移植25 頭次，受胎8 頭次，受胎率32%，詳見表1。

表1 水牛體外胚胎移植受胎率

從表1 看出，受體為本地母牛移植受胎率，鮮胚為38.0%(19/50) ，凍胚為20.0 %(3/15) ，均顯著低于受體為摩拉和尼里母牛的54.8%(17/31) 和50.0%(5/10) 。

2.2 不同移胚時間受胎結(jié)果

表2 不同移胚時間受胎結(jié)果

從表2 可以看出，移胚結(jié)果，鮮胚的受胎率分別是: 4 d為53.1%(17/32) ，5 d為37.0%(10/27) ，6 d為52.9%(9/17) 。而凍胚在3 d的時候移植為0，因為在此時，胚胎的發(fā)育還處在8 ～16 細胞左右，根據(jù)黃右軍［1］報道，在4 ～8 d的體外胚胎與發(fā)情母牛子宮環(huán)境同期化有關(guān)。

2.3 鮮胚移植受體母牛的繁殖狀況

表3 鮮胚移植受體母牛繁殖狀況

從表3 可以看出，本地母牛的繁殖率和育成率為70.0%(14/20) 和100%(14/14) ;摩拉、尼里水牛的繁殖率和育成率為86.9%(20/23) 和100%(20/20) 。本地母牛繁殖率低于摩拉和尼里水牛。究其原因為本地母牛野性尚存，在懷孕初期奔跑以及部分母牛懷雙胎，又未能滿足其雙胎發(fā)育對營養(yǎng)的供給而造成流產(chǎn)。19 頭受胎本地母牛中有6 頭流產(chǎn)，流產(chǎn)率為31.6%，其中有3 頭為流產(chǎn)雙胎。17 頭本所長期飼養(yǎng)的摩拉和尼里水牛，無論懷雙胎或單胎，均未發(fā)生流產(chǎn)，流產(chǎn)率為0，其原因為摩拉和尼里水牛經(jīng)過長期的圈養(yǎng)馴化，野性得到了改變，懷孕初期奔跑減少。另外，摩拉和尼里水牛個體比本地水牛個體壯大，能承受雙胎對子宮和腹腔的壓力。

2.4 不同水牛后代的發(fā)育情況

本地水牛與胚胎移植摩雜、尼雜一代水牛從初生至12月齡體尺比較。從表4 和表5可以看出，利用摩拉水牛和尼里水牛的凍精分別和本地水牛卵母細胞進行體外受精成胚，并行胚胎移植后，其后代在保持母牛原有優(yōu)勢的基礎(chǔ)上，生長發(fā)育速度顯著地高于本地同齡牛，與文獻［5］報道相似。表4表明，摩雜一代公、母牛周歲的平均體重為264.2 kg和238.96 kg; 尼雜一代公、母周歲的平均體重為256.18 kg和239.97 kg，均較本地公、母牛周歲的平均體重172.93 kg和157.76 kg有顯著提高。表5 表明，摩雜一代公、母牛和尼雜一代公、母牛在初生、6月齡和12月齡3 個時期的體高、體斜長、胸圍和管圍都比本地水牛在這3 個時期有顯著提高。經(jīng)顯著性分析，尼雜1 代公、母牛和本地公、母牛之間，初生、6月齡和12月齡3 個時期的體高差異、體斜長差異、胸圍差異和管圍差異都極為顯著(P ＜0.01) 。利用摩拉水牛和尼里水牛的凍精改良本地水牛，有非常顯著的改良效果，與文獻［5］報道相符。

表4 本地水牛與胚胎移植摩雜、里雜1 代水牛初生至12月齡體重比較

表5 本地水牛與胚胎移植摩雜、里雜一代水牛從初生至12月齡體尺比較 /cm

3 討論

我國引進摩拉和尼里水牛并進行水牛雜交試驗，取得一定的成效［3，4］。但是，利用本地母牛的卵母細胞與摩拉和尼里水牛凍精進行體外受精成胚，行胚胎移植術(shù)并成功生產(chǎn)試管水牛的報道甚少。本研究應(yīng)用本地母牛的卵母細胞與摩拉和尼里水牛凍精進行體外受精成胚，并進行移植，成效顯著。

3.1 摩拉、尼里水牛雜交的改良效果顯著

利用摩拉水牛和尼里水牛凍精分別與本地水牛卵母細胞進行體外受精成胚進行移植，結(jié)果表明，雜交水牛生長速度明顯優(yōu)于本地水牛。本地水牛完全可以利用摩拉水牛和尼里水牛進行改良。

3.2 轉(zhuǎn)變飼養(yǎng)方式，加強改良牛的培育

從表4 和表5 的結(jié)果可以看出，雜交水牛生長發(fā)育比本地水牛好，但是由于其飼養(yǎng)管理水平較純種摩拉水牛和尼里水牛低，雜交水牛的遺傳性能尚未得到充分發(fā)揮。因此，必需轉(zhuǎn)變犢牛、成牛的飼養(yǎng)方法，采用科學(xué)的飼養(yǎng)管理技術(shù)，加強雜交牛的早期培育技術(shù)，充分發(fā)揮其生產(chǎn)潛力［6］。

3.3 雜交改良的經(jīng)濟效益

摩拉水牛、尼里水牛雜交改良后代和本地水牛在同等的飼養(yǎng)管理條件下，摩拉水牛雜交后代可多增重20.36 ～56.45 kg、尼里水牛雜交改良后代可多增重19.45 ～50.66 kg，可縮短飼養(yǎng)周期，提高出欄率。水牛飼養(yǎng)成本低，發(fā)病率低，其產(chǎn)品綠色環(huán)保; 水牛奶營養(yǎng)價值高而且沒有腥膻味，風(fēng)味宜人，消費者十分喜愛，水牛奶在市場上供不應(yīng)求。水牛奶酪深受歐美消費者的歡迎，價格較高，經(jīng)濟效益十分顯著［6］。

3.4 加強遺傳資源的保護

雜交水牛具有耐粗飼性能好，抗病力強，母性好，生活能力強，利用年限長、性情溫順和性成熟較早的特性，是十分寶貴的遺傳資源［7］。

胚胎移植研究方興未艾，技術(shù)漸趨完善，在奶水牛的育種工作中，日益顯示出其意義和生命力。它是畜牧業(yè)繼人工授精之后又一次新的技術(shù)革命，胚胎移植技術(shù)將成為水牛品種改良的一個有力的手段。

［1］黃右軍，黃芬香，張秀芳，等.水牛卵母細胞體外受精與早期胚胎發(fā)育的研究［J］.中國畜牧雜志，2002，38(4) : 10-12.

［2］張秀芳，黃右軍，李忠權(quán)，等.水牛體外受精胚胎的玻璃化冷凍［J］.草食家畜，2003，(1) : 23-25.

［3］廖英才，馬啟文，刀榮祥，等.摩拉水牛凍精改良本地水牛試驗研究［J］.中國草食動物，2006，26(5) : 34-36.

［4］趙家才，何華川，王春蘭，等.摩拉水牛改良云南本地水牛的效果研究［J］.中國牛業(yè)科學(xué)，2007，33(1) : 4-7.

［5］唐呈祥.摩拉水牛改良本地水牛增重效果的調(diào)查［J］.草業(yè)與畜牧2007，7: 49.

［6］趙開典，趙家民，王鵬武，等.世界水牛奶業(yè)的開發(fā)動態(tài)及其對我們的啟示［J］.黃牛雜志，2004，30(5) : 76-80.

［7］章純熙.中國水牛業(yè)科技發(fā)展特點和趨向［M］.畜牧獸醫(yī)事業(yè)的發(fā)展和人類的健康-21 世紀畜牧獸醫(yī)生產(chǎn)和科學(xué)技術(shù)論壇會文集，1999: 67-79.