萬九生，杜曉鵬，徐 虎，毛愛國(guó)，黎立光

(公安部昆明警犬基地，云南 昆明650204)

昆明犬(Kunming Dog) 作為我國(guó)獨(dú)立自主培育的唯一工作犬品種，經(jīng)過50 多年的培育歷程，最終由公安部昆明警犬基地培育定型，并于2007年5月通過了國(guó)家畜禽遺傳資源委員會(huì)的審定，成為國(guó)家級(jí)畜禽新品種。目前，昆明犬因其獨(dú)特的嗅覺靈敏、撲咬兇猛、獵取欲強(qiáng)、馳騁持久、機(jī)警靈活、易于訓(xùn)練、適應(yīng)性強(qiáng)、忠實(shí)主人等優(yōu)勢(shì)，已在全國(guó)各地公安機(jī)關(guān)和工作犬系統(tǒng)全面推廣應(yīng)用。有近10 個(gè)國(guó)家和地區(qū)引進(jìn)昆明犬。

昆明犬的育成填補(bǔ)了我國(guó)工作犬品種培育的空白，在昆明犬種質(zhì)特性、訓(xùn)練使用、犬病防治和犯罪育種等方面已開展了深入研究，但有關(guān)昆明犬人工授精及精液品質(zhì)分析的研究相關(guān)報(bào)道很少。為了更好地開發(fā)利用昆明犬這一“國(guó)寶級(jí)”犬種，本文對(duì)昆明犬核心種犬群的昆明犬精液進(jìn)行了系統(tǒng)分析，以期為昆明犬種質(zhì)特性深入研究積累基礎(chǔ)資料，為犬的人工授精及產(chǎn)業(yè)化發(fā)展研究提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 時(shí)間和地點(diǎn)

試驗(yàn)于2009年7月至2010年5月，在云南昆明公安部昆明警犬基地進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)材料

1.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)犬為公安部昆明警犬基地昆明犬核心群，2 ～11 歲，繁殖機(jī)能正常，體質(zhì)健康的種公犬。飼養(yǎng)管理嚴(yán)格按警犬飼養(yǎng)管理操作規(guī)程進(jìn)行。

1.2.2 試驗(yàn)動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)和管理

采用全價(jià)顆粒飼料進(jìn)行定時(shí)、定量飼喂。保持犬舍內(nèi)衛(wèi)生清潔，做到定期消毒，定期用藥驅(qū)蟲與接種疫苗等嚴(yán)格的防疫制度，堅(jiān)持每天梳理犬體被毛，散放運(yùn)動(dòng)不少于2 h等日常管理。

1.2.3 試驗(yàn)器材

犬精子質(zhì)量檢測(cè)系統(tǒng)為北京偉力WLJY9000 型; 低溫溫度儀為北京市宇時(shí)技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn); 恒溫水浴鍋、高壓蒸汽滅菌器、定時(shí)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)器為上海醫(yī)療器械廠生產(chǎn); 超凈臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備公司生產(chǎn);移液器、超速離心機(jī) 為Eppendor; 混勻器，姜堰市新康醫(yī)療器械公司生產(chǎn); 電子天平為美國(guó)雙杰公司生產(chǎn)。

1.3 試驗(yàn)方法與設(shè)計(jì)

1.3.1 采精場(chǎng)地的選擇

采精應(yīng)在良好的環(huán)境條件下進(jìn)行，且采精場(chǎng)所要固定，以利于公犬形成穩(wěn)定的性條件反射，并能避免精液污染。室外采精場(chǎng)地要求寬敞、平坦、安靜、清潔、避風(fēng)，室內(nèi)采精場(chǎng)地要求寬敞明亮、地面平坦防滑。

1.3.2 采精前的準(zhǔn)備

采精員先以溫和的語調(diào)呼喚犬名，并撫拍犬體以消除由于和人不熟悉而產(chǎn)生的恐懼。對(duì)于兇猛性較強(qiáng)且有攻擊欲望的犬，應(yīng)讓飼養(yǎng)員先用口籠或者繃帶纏好犬嘴，以防止事故發(fā)生。為了減少精液液污染，采精前，用溫水及0.1%高錳酸鉀液擦洗公犬的陰部及其周圍，用無菌生理鹽水清洗包皮腔內(nèi)積尿及其它污物，并擦干，以避免皮屑及毛等污物對(duì)精液的污染。同時(shí)，對(duì)公犬陰莖部刺激，也是給種公犬采精提前的預(yù)示。對(duì)采精場(chǎng)地、采精器械等嚴(yán)格消毒。

1.3.3 精液采集方法

精液采集均采用手握按摩采精法。采精時(shí)手戴醫(yī)用乳膠手套，在有發(fā)情母犬直接誘導(dǎo)的情況下，公犬的陰莖在無需按摩的情況下就會(huì)充分勃起。待公犬爬跨在母犬背部時(shí)，用右手拇指和食指握住公犬陰莖球狀膨大體的后端，約1 ～5 min，公犬開始射精，左手持離心管進(jìn)行收集，結(jié)束后要用紗布蓋好離心管口，以防止雜質(zhì)進(jìn)入。調(diào)教好的公犬，不需要進(jìn)行誘導(dǎo)，采精員蹲于公犬左側(cè)，左手握集精杯，用右手戴滅菌乳膠手套握住公犬的陰莖，同時(shí)模仿母犬交配時(shí)陰道收縮對(duì)公犬陰莖球體的擠壓力，給陰莖球體適當(dāng)施加一松一緊呈節(jié)奏性垂直向內(nèi)的壓力，并做前后按摩。當(dāng)陰莖充分勃起，尤其是球體部膨大后，將陰莖引向側(cè)面或后腹兩腿間朝下，經(jīng)10 s左右公犬即產(chǎn)生抽動(dòng)，開始射精，這時(shí)采精員另一只手持集精杯收集精液。公犬開始射精后，采精員給陰莖球體的壓力稍加大些，節(jié)奏放慢些，且此時(shí)不必做前后按摩。

1.3.4 測(cè)定指標(biāo)

用高精度離心管測(cè)量射精量，使用偉力WLJY9000 型彩色精液質(zhì)量檢測(cè)系統(tǒng)觀察精子的云霧狀，檢測(cè)精子密度、活率、活力和精子的動(dòng)態(tài)參數(shù)(a 級(jí)精子、b 級(jí)精子、c 級(jí)精子和d 級(jí)精子) 。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Excel-2003 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，運(yùn)用SAS 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)(x2) 作顯著性分析和多重比較。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 分段精液品質(zhì)測(cè)定

采用手握按摩采精法采集2 ～8 歲的狼青4 頭、草黃4 頭、黑背4 頭共12 頭昆明犬種公犬(已適應(yīng)手握按摩采精法的種公犬) 的精液，分別測(cè)得分段精液和混合精液射精量、活力和精子密度。從表1 看出，犬的射精量第2 段與第3 段基本接近，且均高于第1 段。

表1 昆明犬分段及混合精液品質(zhì)檢查(n=12)

2.2 昆明犬采精適應(yīng)程度

對(duì)經(jīng)歷過發(fā)情母犬誘導(dǎo)采精的40 頭昆明犬種公犬直接使用手握法進(jìn)行采精。犬的適應(yīng)情況見表2。

表2 應(yīng)用手握按摩采精法采集昆明犬精液適應(yīng)情況

由表2 可以看出，40 頭公犬在經(jīng)過一次采精調(diào)教后，有36 頭采集到了精液，占總數(shù)的90%(36/40) ，其中僅有5 頭采集到精液量少，占總數(shù)的12.5%(5/40) ; 未采集到精液犬?dāng)?shù)為4 頭，占總數(shù)的10%(4/40) 。

2.3 昆明犬精液品質(zhì)

采用手握按摩采精法采集24 頭昆明犬種公犬精液，收集第2 段精液和少量第3 段精液，進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表3。

表3 昆明犬精液品質(zhì)特性

通過觀測(cè)昆明犬公犬精液呈乳白色，個(gè)別淡紅色。由于昆明犬精液密度大，精子活力高，大部分具有明顯的云霧狀。據(jù)表3，昆明犬公犬平均每次采精量5.51 ±2.24 mL，變異系數(shù)為40.65%; 平均精子密度為3.71± 2.82/mL，平均精子活力為83.78 ±13.29%。由此可以看出，精子密度在每次采精中變化很大，采精量次之，精子活力變化較小。

2.4 昆明犬品系間精液品質(zhì)比較

從表4 可知，昆明犬品系間，每次的采精量狼青品系(6.28 ±3.53) mL和草黃品系(5.81 ±2.24) mL采精量顯著高于黑背品系(3.48 ±2.71) mL采精量; a +b 級(jí)精子含量狼青品系為(92.26 ±6.01) %顯著高于草黃品系 的(85.77 ± 5.56) % 和黑背品系的(80.19 ±8.64) %; 而精子密度、精子活力和精子活率3 個(gè)品系間差異均不顯著。

表4 昆明犬品系間精液品質(zhì)特性比較

3 討論

3.1 采精方法

本試驗(yàn)應(yīng)用手握按摩法對(duì)40 頭昆明犬采精，采精的成功率達(dá)到90.0%，表明昆明犬公犬精液容易采集，且適宜用手握按摩采精法。

3.2 采精量

昆明犬公犬的平均采精量(5.51 ±2.24)mL，平均精子密度為(3.71 ±2.82) ×108個(gè)/mL，平均精子活力為(83.78 ±13.29) %，同有關(guān)資料報(bào)道犬的平均采精量(2.05 ～7.52) mL 相當(dāng)［1～3］。昆明犬平均精子活力高于德國(guó)牧羊犬(60 ± 22) % 和藏獒(70 ±5) %［3］，說明昆明犬在精液生產(chǎn)能力上較好。

3.3 其他因素

在試驗(yàn)過程中，我們發(fā)現(xiàn)采精人員、采精環(huán)境、氣候、不同的采精時(shí)段等因素都對(duì)犬的精液質(zhì)量有一定的影響，這些因素的影響程度有待于作進(jìn)一步研究。本次試驗(yàn)時(shí)間倉(cāng)促、試驗(yàn)量大，還有一些相關(guān)的試驗(yàn)未能完成，比如昆明犬精液的pH 值測(cè)定。

4 結(jié)論

本研究表明，昆明犬精液各項(xiàng)指標(biāo)均符合精液冷凍保存、人工授精等的使用要求。說明昆明犬具有較好的繁殖能力，開展人工授精和產(chǎn)業(yè)化發(fā)展研究是可行的。同時(shí)，本研究結(jié)果，可用于指導(dǎo)昆明犬精液冷凍、保存及人工授精中精液的選擇，可為昆明犬后備種犬選留、淘汰、繁殖性能和飼養(yǎng)管理的相關(guān)研究提供可靠依據(jù)。

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