(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧 530021)

精漿中的鋅由前列腺分泌，其作為精漿中的一種微量元素，對(duì)精子的發(fā)生、成熟和獲能具有一定的作用。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)精漿鋅與精液質(zhì)量關(guān)系的研究結(jié)果尚不一致。2011年7～11月，我們采用5-Br-PAPS顯色法對(duì)81例不育男性患者進(jìn)行精漿鋅含量檢測(cè)，并分析精漿鋅含量與精液常規(guī)參數(shù)、不成熟精子率及體外受精(IVF)結(jié)局的相關(guān)性?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取因輸卵管因素致不孕在我院接受IVF-ET診療的81對(duì)夫婦，男(31.73±3.52)歲，(29.31 ±3.31)歲;原發(fā)性不育30 例，繼發(fā)性不育51例。納入標(biāo)準(zhǔn):所有夫婦均為初次接受常規(guī)IVF助孕，女方年齡≤35歲，除單純輸卵管梗阻外，所有入選女性經(jīng)體檢、婦科超聲及內(nèi)分泌、血生化等檢查未發(fā)現(xiàn)其他可能影響生育的疾病。入選女性取卵子均不少于5枚，男性均能夠提供新鮮精液。術(shù)前精液常規(guī)檢查按照WHO《人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》(2011年，第五版)標(biāo)準(zhǔn)［1］，排除嚴(yán)重少弱精癥。

1.2 精液檢查 男性禁欲(5.49±1.37)d，留取0.5 ～1 mL 精液，3 000 g離心10 min，留取精漿置于－20℃冰箱儲(chǔ)存。參照文獻(xiàn)［2］處理方法行精液檢查。按照WHO《人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》標(biāo)準(zhǔn)［3］，測(cè)定以下參數(shù)判斷精液質(zhì)量:①精漿鋅含量:采用5-Br-PAPS顯色法，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作，在配有560 nm波長(zhǎng)濾光片的酶標(biāo)比色儀上進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)比較吸光度值，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取標(biāo)本中鋅的濃度。精漿鋅總量(μmol)=鋅濃度×精液總體積(mL)。②精液常規(guī)參數(shù):包括精液量、精子密度，精子活率、精子正常形態(tài)率(依照WHO實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)，采用Diff-Quik快速染色法染色，在光學(xué)顯微鏡油鏡(×1 000)下，每片讀取200個(gè)精子，用Krüger's嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)法進(jìn)行判別，計(jì)數(shù)正常形態(tài)精子所占比率。③不成熟精子率:采用經(jīng)密度梯度離心法檢測(cè)精子核成熟度。高倍顯微鏡下觀察，至少計(jì)數(shù)200個(gè)精子。核蛋白不成熟的精子染紫藍(lán)色或紫色，核蛋白成熟的精子染紅色。計(jì)數(shù)頭部染紫藍(lán)色和紫色的精子(不成熟精子)。不成熟精子率=［(精子頭部染紫藍(lán)色精子+染紫色精子)/200］×100%。

1.3 IVF及結(jié)局判斷 女性黃體中期應(yīng)用促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑(GnRH-a)達(dá)菲林降調(diào)節(jié)，達(dá)降調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)后常規(guī)應(yīng)用促性腺激素啟動(dòng)劑量，用Gn 4～5 d后根據(jù)陰道超聲監(jiān)測(cè)卵泡數(shù)目、大小，行血清激素測(cè)定，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果調(diào)整Gn用量。超聲監(jiān)測(cè)到3個(gè)以上優(yōu)勢(shì)卵泡直徑≥18 mm時(shí)當(dāng)晚即肌注絨促性素10 000 U，34～36 h于陰道超聲引導(dǎo)下行穿刺取卵術(shù)。參照文獻(xiàn)［2］分析胚胎質(zhì)量，IVF受精率=受精胚胎數(shù)/獲卵數(shù)×100%，卵裂率=卵裂數(shù)/受精數(shù)×100%，優(yōu)胚率=優(yōu)胚數(shù)/卵裂數(shù)×100%。

1.4 相關(guān)性分析 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，采用Spearman相關(guān)性分析法分析精漿鋅含量與精液密度、活率、正常形態(tài)率、成熟精子率和IVF結(jié)局的相關(guān)性。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 精液指標(biāo) 精漿鋅含量(2.13±1.01)μmol。精液量(4.15 ±1.48)mL，精液密度(92.52 ±55.18)106/mL，精子活率(62.64 ±14.88)%，正常形態(tài)率(7.39 ±3.48)%;不成熟精子率 (35.16 ±10.87)%。

2.2 IVF 結(jié)局 IVF 受精數(shù)(9.68 ±4.40)枚，卵裂數(shù)(9.40 ±4.35)枚，優(yōu)胚數(shù)(5.83 ±3.73)枚。

2.3 相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析示精漿鋅含量與精液密度、精子活率、IVF受精數(shù)呈顯著正相關(guān)(r=0.49、0.305、0.289，P 均 ＜0.05)，與不成熟精子率呈負(fù)相關(guān)(r= －0.278，P ＜0.05)，與精子正常形態(tài)率及IVF卵裂率、優(yōu)胚率無(wú)相關(guān)性(P均＞0.05)。

3 討論

近年來(lái)隨著男性不育患者逐年增多，精漿鋅含量與男性不育的關(guān)系逐漸成為研究的熱點(diǎn)之一。精液中的鋅主要來(lái)源于前列腺，在精子發(fā)生、成熟、獲能、頂體反應(yīng)和受精過(guò)程中起重要作用。

本文結(jié)果顯示，精漿鋅含量與精子密度、活率呈正相關(guān)，說(shuō)明適量增加精漿鋅含量可以提高精子的密度和活率。其可能原因?yàn)?①精漿中的鋅通過(guò)干擾垂體分泌促性腺激素降低性腺功能從而使精子生成減少［3］。②鋅參與生殖系統(tǒng)多種酶的合成，這些酶可延緩精子細(xì)胞膜的脂質(zhì)過(guò)氧化，維持細(xì)胞膜的通透性，使精子具有良好的活力，故缺鋅可降低相關(guān)酶的活性，進(jìn)而影響精子發(fā)生過(guò)程［4］。但羅勝萍等［5］發(fā)現(xiàn)，精液中鋅含量過(guò)高對(duì)精子也有明顯的毒性作用，過(guò)量的鋅及其氧化物可抑制精子的酵解及氧化過(guò)程，致使精子活力下降和死精。因此，在男性進(jìn)行補(bǔ)鋅治療的同時(shí)應(yīng)監(jiān)測(cè)精漿鋅含量變化。本研究結(jié)果顯示，精漿鋅與精子正常形態(tài)率無(wú)相關(guān)性，說(shuō)明精漿鋅含量并不影響精子的正常形態(tài)，這與馮播等［6］研究結(jié)果相同。

精子核蛋白的主要成分為魚精蛋白，魚精蛋白富含精氨酸和半胱氨酸，一般不含賴氨酸，人類精子發(fā)生和成熟過(guò)程中，經(jīng)歷核蛋白組型轉(zhuǎn)換過(guò)程，即富含精氨酸和半胱氨酸的魚精蛋白取代富含賴氨酸的組蛋白，苯胺藍(lán)可與富含賴氨酸的組蛋白結(jié)合而使不成熟的精子染成藍(lán)色，因此，用苯胺藍(lán)染色可檢測(cè)精子的核成熟度。本研究發(fā)現(xiàn)，精漿鋅含量與不成熟精子率呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明精漿鋅能促進(jìn)精子核的成熟?？赡苁且?yàn)榫釉诟讲G中成熟時(shí)，魚精蛋白的巰基間形成二硫鍵，使精子核染色質(zhì)趨于穩(wěn)定，同時(shí)在前列腺液鋅離子的作用下，余下的游離巰基間形成共價(jià)鍵，促進(jìn)使精子核成熟［7］。

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)精漿鋅與IVF結(jié)局的關(guān)系報(bào)道相對(duì)較少。本文結(jié)果顯示，精漿鋅含量與IVF受精數(shù)呈正相關(guān)，說(shuō)明適量增加精漿中的鋅含量會(huì)提高受精數(shù)，可能是因?yàn)橐欢舛鹊匿\使精液密度和活率相應(yīng)的增加，同時(shí)在排精過(guò)程中，精子吸收精漿中的鋅與細(xì)胞核染色質(zhì)的巰基結(jié)合，從而有利于受精。但本研究還發(fā)現(xiàn)，精漿鋅含量與卵裂率、優(yōu)胚率并無(wú)相關(guān)性，說(shuō)明精漿鋅對(duì)受精后的胚胎質(zhì)量并無(wú)影響。

綜上所述，精漿鋅含量與男性不育密切相關(guān)，適量的精漿鋅能夠促進(jìn)精子核成熟，其含量降低將影響精子的發(fā)生、發(fā)育和成熟，引起精液密度和活率下降，從而使受精數(shù)降低。精漿鋅含量檢測(cè)對(duì)促進(jìn)男性不育的診斷及治療有一定指導(dǎo)作用。

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