金成日，金 彬，玄云澤

(延邊大學(xué)附屬醫(yī)院口腔科，吉林延吉 133000)

隨著口腔癌的發(fā)病率增加，口腔癌已成為威脅人類健康的一大疾病。目前研究證實(shí)[1-3],口腔癌的發(fā)生涉及眾多基因表達(dá)的改變，導(dǎo)致細(xì)胞正常生理過程及大分子代謝紊亂、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)受阻、細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變及免疫調(diào)節(jié)紊亂等，從而導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖，最終形成癌。本研究通過Ki-67和Bcl-2在口腔鱗癌中表達(dá)，分析Ki-67和Bcl-2的表達(dá)與口腔鱗狀細(xì)胞癌分化程度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇延邊地區(qū)1999～2009年術(shù)前均未接受過任何抗腫瘤治療的本院病理科口腔鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后完整包埋的石蠟標(biāo)本50例，其中35例帶有癌旁黏膜和正常組織，行4 μm厚的連續(xù)切片。其中男37例，女13例;年齡29～80歲，平均61.67歲；朝鮮族23例，漢族27例；舌癌20例，口底癌17例，頰黏膜癌10例，腭癌2例，牙齦癌1例，高分化鱗癌32例，中、低分化鱗癌18例。按2002年UICC制定的TNM分類標(biāo)準(zhǔn)分期，Ⅰ、Ⅱ期34例，Ⅲ、Ⅳ期16例；T122例，T2、T328例；N038例，N1、N212例；均無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

1.2實(shí)驗(yàn)方法 采用免疫組化PV-6000-G法進(jìn)行染色,鼠抗人Ki-67單克隆抗體、鼠抗人Bcl-2蛋白單克隆抗體和PV-6000-G二步法免疫組化檢測(cè)試劑，均由北京中杉金橋生物有限公司提供。

1.3判斷標(biāo)準(zhǔn) Ki-67的陽性在癌細(xì)胞的胞核上著色，呈棕黃色顆粒狀，Bcl-2的陽性主要為癌細(xì)胞的胞漿染色為主，均在400倍顯微鏡下觀察，每張切片隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)1 000個(gè)腫瘤細(xì)胞，平均計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)所占比例，染色強(qiáng)度分為3種，即黃色、棕黃色、黃褐色。染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)所占比例進(jìn)行半定量處理。(1)染色強(qiáng)度:不著色為0分，黃色1分，棕黃色2分，黃褐色3分；(2)陽性細(xì)胞所占比例評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞數(shù)小于10％者為0分，10％～40％者1分，41％～<70％者2分，≥70％者3分。0～1分為陰性(-)，2分為弱陽性(+)，3～4分為中度陽性(++),5～6分為強(qiáng)陽性(+++)。最后按評(píng)分進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1高分化鱗癌和中、低分化鱗癌中Ki-67和Bcl-2的表達(dá) 高分化鱗癌和中、低分化鱗癌中Ki-67和Bcl-2的表達(dá)見封4圖1、2。Bcl-2蛋白在口腔鱗狀細(xì)胞癌的陽性表達(dá)率為94％，32例高分化鱗癌中3例-，5例+，24例++；在18例中、低分化鱗癌中10例++，8例+++，Bcl-2蛋白表達(dá)在高分化鱗癌與中、低分化鱗癌間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。32例高分化鱗癌Ki-67增殖指數(shù)為(178.09±52.88)，18例中、低分化鱗癌Ki-67增殖指數(shù)為(413.06±73.22)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；32例高分化鱗癌和18例中、低分化鱗癌中Bcl-2評(píng)分指數(shù)分別為(2.81±1.12 )和(4.06±0.87)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.2Ki-67、Bcl-2與腫瘤大小 T1期22例和T2、T3期28例Ki-67增殖指數(shù)分別為(235.32±117.04)和(305.14±122.17)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；T1期22例和T2、T3期28例Bcl-2評(píng)分指數(shù)分別為(2.95±1.16)和(3.61±1.03)，兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。腫瘤大小不同Ki-67陽性表達(dá)率有差異，Bcl-2陽性表達(dá)率無差異。

2.3Ki-67、Bcl-2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 N0期38例和N1、N2期12例Ki-67增殖指數(shù)分別為(258.08±129.65)和(277.25±130.90)，Bcl-2評(píng)分指數(shù)分別為(3.26±1.31)和(3.58±1.51)，兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.4Ki-67、Bcl-2與臨床分期 Ⅰ、Ⅱ期34例和Ⅲ、Ⅳ期16例Ki-67增殖指數(shù)分別為(237.65±107.75)和(315.69±129.45)，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Bcl-2評(píng)分指數(shù)分別為(3.12±1.25)和(3.69±1.45)，比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討 論

在中國(guó)，口腔頜面部的惡性腫瘤中鱗狀細(xì)胞癌為最多見，占80％以上，目前認(rèn)為口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病與多種因素有關(guān)。惡性腫瘤細(xì)胞最明顯的生物學(xué)特征是指細(xì)胞不受機(jī)體調(diào)控，能夠無限制地增長(zhǎng)，因而腫瘤細(xì)胞的增殖活性即成為判斷預(yù)后的重要因素之一[4]。在正常生理情況下，細(xì)胞的增殖和凋亡是相互制約，相互維持動(dòng)態(tài)平衡的，一旦這種平衡失調(diào)，就會(huì)有可能形成腫瘤。

Ki-67抗體可以和人的所有增殖細(xì)胞上的Ki-67核抗體發(fā)生反應(yīng)，它可以識(shí)別除G0期以外處于其他細(xì)胞周期的細(xì)胞，故能較準(zhǔn)確地反應(yīng)細(xì)胞的增殖程度。所以，Ki-67高表達(dá)是細(xì)胞增殖活躍的重要標(biāo)志，對(duì)腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后產(chǎn)生影響。高分化鱗癌中可以看到Ki-67蛋白染色于角化珠周圍，呈線形排列，而中、低分化鱗癌中Ki-67蛋白的染色則不規(guī)則散在排列的，且染色強(qiáng)度明顯強(qiáng)于高分化鱗癌。本實(shí)驗(yàn)中，隨著口腔鱗狀細(xì)胞癌的病理分化程度降低，Ki-67蛋白的表達(dá)呈顯著性上升趨勢(shì)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。本實(shí)驗(yàn)中，高分化鱗癌和中、低分化鱗癌中均可看出離原發(fā)灶中心越近Ki-67蛋白的表達(dá)強(qiáng)度越強(qiáng)，也就是其浸潤(rùn)性越強(qiáng)，反之隨著癌旁黏膜與原發(fā)灶中心的距離增加，Ki-67蛋白的表達(dá)變?nèi)?，直至消失。還有，Ki-67在中、低分化鱗癌癌旁黏膜中的表達(dá)遠(yuǎn)強(qiáng)于高分化鱗癌癌旁黏膜，但在正常黏膜中不表達(dá)或微表達(dá),與文獻(xiàn)報(bào)道一致[5]。在T0和T1、T2，Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期、Ⅳ期比較，Ki-67的表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但其表達(dá)強(qiáng)度與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05),與Carlos等[6]、王宇等[7]報(bào)道結(jié)果相似。

凋亡是一種具有特定形態(tài)改變的細(xì)胞死亡，是在一系列基因作用下所引起的生理性過程。Bcl-2癌基因是在t(14；18)染色體易位斷點(diǎn)處發(fā)現(xiàn)的一種癌基因，過表達(dá)可保護(hù)腫瘤細(xì)胞免于凋亡[8-9]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，Bcl-2表達(dá)與口腔鱗狀細(xì)胞癌的病理分化程度有關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相似[10-11]。在鱗狀細(xì)胞癌中Bcl-2表達(dá)也越明顯，也就是說越能抑制癌細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)中，口腔鱗狀細(xì)胞癌的腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期與Bcl-2蛋白的表達(dá)強(qiáng)度無相關(guān)性(P>0.05)，與文獻(xiàn)報(bào)道相似[12]。所以，Bcl-2可作為判斷口腔鱗狀細(xì)胞癌惡性程度的重要生物學(xué)指標(biāo),但不能作為判斷口腔鱗狀細(xì)胞癌的有無淋巴轉(zhuǎn)移的指標(biāo)。

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