張 雷，易村犍

(長江大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院 荊州市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 荊州 434000)

卵巢癌原位移植模型建立的研究進展

張 雷，易村犍

(長江大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院 荊州市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 荊州 434000)

卵巢癌是目前臨床的難題之一，隨著實驗動物學(xué)的發(fā)展，原位移植模型因其能客觀真實反映人類卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程而成為研究熱點，同時順鉑耐藥也是目前化療的一個難題。綜述了卵巢癌模型的分類、原位移植瘤模型的建立及影響成功率的因素等。在實驗方法上，通過將人卵巢癌細胞株和順鉑耐藥細胞株先進行體外培養(yǎng)，然后再分別接種于裸鼠體內(nèi)。這種方法建立裸鼠卵巢癌原位移植模型具有成瘤率高的特點,并能保持順鉑耐藥特征。

卵巢癌；原位移植模型；實驗動物學(xué)

卵巢癌是婦科常見的腫瘤之一，它的發(fā)病率居第三，次于子宮頸癌和子宮體癌。卵巢癌早期即可發(fā)生盆腔、腹腔內(nèi)種植轉(zhuǎn)移或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，由于臨床癥狀不明顯，發(fā)現(xiàn)時多為晚期，而且卵巢癌耐藥性較高，故卵巢癌死亡率居婦科腫瘤首位，嚴重威脅婦女的生命健康[1]。卵巢癌的發(fā)病機制及治療方法一直以來是臨床和基礎(chǔ)研究的重點內(nèi)容。通過建立動物模型來模擬人體內(nèi)環(huán)境，進而研究其機制并探索治療方法，為臨床應(yīng)用提供保障。

1 卵巢癌模型分類

卵巢癌模型的分類有多種方法，按動物種類：大鼠模型、小鼠模型、其它動物模型；按腫瘤來源：誘發(fā)型、自發(fā)型、移植型、轉(zhuǎn)基因型；按接種部位：腹腔、皮下和常位 (卵巢內(nèi))；按移植供體與受體關(guān)系：異種移植和同種移植；按轉(zhuǎn)移率：高轉(zhuǎn)移性和低轉(zhuǎn)移性[2]。

2 主要的卵巢癌模型

小鼠因其飼養(yǎng)方便，繁殖率高及與人類基因相似性高成為應(yīng)用最廣的實驗動物，尤其在人類腫瘤成功移植于裸鼠后，惡性腫瘤學(xué)的研究便進入一個全新的階段。

2.1化學(xué)誘導(dǎo)型模型

用化學(xué)致癌劑(如亞硝胺類、多環(huán)芳香烴類、烷化劑等)通過口服、涂抹、埋藏、注入等方式誘導(dǎo)成瘤。Silva等[3]證實雌激素可誘導(dǎo)卵巢腫瘤，尤其己烯雌酚和雌二醇。己烯雌酚可引起卵巢表面乳頭狀瘤，而雌二醇引起的是卵巢漿液性囊腺瘤。

2.2皮下移植瘤模型

在小鼠肩胛區(qū)皮下注射癌細胞成瘤。許沈華等[4]用人卵巢癌細胞系移植于裸鼠皮下，建立了人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。皮下移植模型雖然成瘤率高，操作簡單，但很少向遠處發(fā)生轉(zhuǎn)移。

2.3腹水移植瘤模型

在小鼠腹腔內(nèi)注射癌細胞成瘤。腹腔接種較易顯示癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。Kyriazis等將人細胞系移植到裸鼠腹腔或皮下均成瘤，皮下移植瘤可見到包膜和淋巴管侵襲，但只有極少數(shù)動物發(fā)生了局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。腹水移植瘤顯示不同臟器浸潤并且有60%的動物發(fā)生肺廣泛轉(zhuǎn)移和縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[5]。

2.4原位移植瘤模型

皮下移植瘤模型和腹水瘤模型雖然較為常用，但由于與人卵巢癌生物學(xué)特征存在差距，在實際的應(yīng)用中受到一定的限制。原位移植模型近年來備受關(guān)注，原位移植不僅成功率高，而且移植瘤容易發(fā)生類似于病人的轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率較高。取穩(wěn)定傳代若干代后的小鼠皮下移植瘤的瘤塊，切下一定量的瘤組織縫入小鼠的卵巢內(nèi)，即可建立原位移植瘤模型[6-10]。

3 順鉑耐藥卵巢癌原位移植瘤模型的建立

在腫瘤的化療中，順鉑的耐藥性是個棘手的問題。建立耐藥的腫瘤動物模型有助于研究其耐藥機理及逆轉(zhuǎn)方法。首先將體外培養(yǎng)活性較好的人卵巢癌細胞株配制成一定濃度的細胞懸液，然后采用順鉑低劑量誘導(dǎo)方式篩選出耐藥細胞株系，抽取一定劑量接種于實驗動物的皮下，待其形成所需的卵巢癌瘤塊后，再切下一定量的瘤組織植入實驗動物的卵巢中。這種方法能有效的刺激卵巢癌細胞，組織塊能夠更好的適應(yīng)卵巢局部的微環(huán)境[11-12]。

4 影響模型成功建立的因素

盡管從皮下移植瘤模型、腹水瘤模型到原位移植瘤模型在不斷完善，但由文獻報道可知，卵巢癌模型建立的成功率不等[13]，這可能與下列因素有關(guān)。

4.1動物的選擇

常用的建立卵巢癌模型的動物為大鼠和小鼠，其中小鼠最為常用。免疫治療現(xiàn)已成為卵巢癌重要的治療方法之一，故免疫治療動物實驗在一定程度上受到限制。有學(xué)者提出，在卵巢局部環(huán)境中生長的腫瘤細胞由于經(jīng)歷了惡性細胞選擇，惡性程度更高的腫瘤細胞會繼續(xù)生長，所以以往一般常用免疫正常小鼠來建立腫瘤移植模型，這也對之后卵巢癌的研究有極其重要的意義[11]。

4.2動物生存環(huán)境

SPF(無特殊病原菌環(huán)境)和GF(無菌環(huán)境)兩種飼養(yǎng)環(huán)境下的裸鼠更有利于腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移，這種環(huán)境污染少，減少了抗原刺激，更有利于提高移植瘤的成活率和轉(zhuǎn)移率。

4.3動物性別和年齡

移植在新生或幼年的裸鼠體內(nèi)的腫瘤相比于成年鼠更容易生長和轉(zhuǎn)移。有學(xué)者報道，3周齡的幼年裸鼠體內(nèi)表現(xiàn)有明顯侵襲及高度自發(fā)性或轉(zhuǎn)移的腫瘤，6～8周齡的成年裸鼠體內(nèi)呈現(xiàn)局限性生長或者低轉(zhuǎn)移。建議用4～5周齡幼鼠。卵巢癌為激素依賴性腫瘤模型，造模時應(yīng)注意裸鼠的雌雄，裸鼠的激素水平很大程度上影響裸鼠移植瘤的成功率。

4.4裸鼠免疫功能

腫瘤細胞能否發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移，主要是由本身的生物學(xué)特性決定。裸鼠并非沒有免疫能力，其體內(nèi)NK細胞、B細胞活性較高，在抵抗移植腫瘤中它們可能起作用。

4.5移植方法

目前推薦使用高轉(zhuǎn)移性、高侵襲性的卵巢癌細胞株建立模型。具體方法有兩種：一是將一定濃度的卵巢癌細胞懸液直接接種于動物的卵巢中；二是首先將一定濃度的卵巢癌細胞懸液接種于動物的皮下，皮下移植成瘤后取一定量的卵巢癌組織塊植入小鼠的卵巢中。從理論上說，后者能更有效的刺激卵巢癌細胞，組織塊能夠更好地適應(yīng)卵巢局部的環(huán)境，而且前者要求的技術(shù)水平高，實驗條件比較苛刻，很容易人為造成腫瘤細胞腹腔擴散[11-12]。

4.6腫瘤來源

移植瘤組織可來源于人腫瘤手術(shù)標本，也可來源于腫瘤細胞系。目前比較傾向于前者。一方面由于單個細胞懸液較分散，受到機體免疫狀態(tài)影響，容易被機體免疫系統(tǒng)清除，另一方面移植所用細胞經(jīng)過了多次酶處理，腫瘤原有的細胞結(jié)構(gòu)遭到破壞，可能會引起腫瘤自然屬性和生物學(xué)特性的改變，從而影響腫瘤細胞移植及轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)用細胞懸液進行的原位移植在轉(zhuǎn)移能力方面不如完整組織塊的移植。

4.7組織特異性

因為腫瘤組織異質(zhì)性的存在，移植部位取材和數(shù)量有限，植入到裸鼠體內(nèi)的瘤組織形成的結(jié)構(gòu)，僅僅反映取材部位瘤組織的形態(tài)特點，并且植入的瘤組織需要適應(yīng)裸鼠的體內(nèi)環(huán)境，生長力較強的細胞株會優(yōu)勢生長，生長力較弱的細胞群在傳代過程中可能會丟失，導(dǎo)致移植瘤和原人瘤組織存在著一定差異性，從而就有移植瘤成功率和轉(zhuǎn)移率的差別[14-15]。

4.8其他因素

此外還有一些其他因素也影響著造模的成功率。如人腫瘤細胞的生物學(xué)特性、狀態(tài)，數(shù)量等；裸鼠品系；病人的腫瘤和裸鼠體內(nèi)腫瘤對細胞毒性的反應(yīng)性缺乏等等都會造成成瘤率的不等性[16-19]。隨著動物實驗技術(shù)的發(fā)展和各種新型實驗動物的開發(fā)，以裸鼠為載體的人卵巢癌動物模型，是研究卵巢癌病因?qū)W和治療學(xué)的重要工具，利用動物模型對卵巢癌進行各種基礎(chǔ)和臨床研究，探索其發(fā)生發(fā)展規(guī)律，開發(fā)新的治療方法和藥物，將對卵巢惡性腫瘤防治水平的提高起到重要的推動作用，同時為腫瘤轉(zhuǎn)移基礎(chǔ)理論的探索和逆轉(zhuǎn)方法的研究提供良好的基礎(chǔ)。

[1]鄧姍,郎景和. 協(xié)和婦產(chǎn)科臨床備忘錄[M] . 2版.北京：人民軍醫(yī)出版社，2008：211-212.

[2]李大鵬. 卵巢腫瘤動物模型建立及應(yīng)用研究進展[J].中國腫瘤，2003(4)12：226-227.

[3]Silva E G，Tornos C，Deavers M，et al. Induction of epithe-lial neoplasms in the ovaries of guinea pigs by estrogenic stimulation[J]. Gynecol Onco1，1998，71(2)：240-246.

[4]許沈華，牟瀚舟，錢麗娟，等.高轉(zhuǎn)移人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立及其生物學(xué)特性[J].中華病理學(xué)雜志，1996，25(1)：33-35.

[5]Adelman D C，Erickson K L，Gershwin M E.Macrophage-mediated inhibition of melanoma cell growth in nude mice[J]. Exp Cell Biol，1983，51(3)：165-171.

[6]任美萍，劉明華，曹陽，等.人卵巢癌順鉑耐藥細胞株的建立及耐藥機制研究[J].瀘州醫(yī)學(xué)院院報，2009，5(32) ：474.

[7]Cunjian Y，Li L，Ding M. Expression of C-Kit&PDGFRa and correlation with chemotherapy resistance in ovarian serous carcinomas：a clinical study[J]. Chinese-German Journal of Clinical Oncology，2009，4(8)：229-230.

[8]張殊，林其德，狄文. 卵巢癌原位移植-轉(zhuǎn)移動物模型的建立[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2004，39(12) ：835-837.

[9]Xiao C，Qiu L，Zen Q.Construction of s6RNA targeted to the rat aniotensin type receptors and its RNAi in cytophtsma [J]. Huangzhong Univ Sci Technolog Med Sci，2006，26 (1)：4-8.

[10]Hoffman R M.Orthotopic metastatic mouse models for anti-cancer drug discovery and evaluation：A bridge to the clinic[J]. Invest New Drugs，1999，17：343-359.

[11]Condeelis J，Pollard J W. Macrophages：obligate partners for migra-tion，invesion，and metastasis[J]. Cell，2006，124：263-266.

[12]尹愛蘭，鐘梅. 綠色熒光蛋白標記的人卵巢癌裸鼠原位移植模型的建立 [J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2008，28(3)：484-490.

[13]Elkas J C，Baldwin R L，Pegram M，et al. Human ovarian carcinoma murine xenograft model useful for preclinical trials[J].Gynecologic Oncology，2002，87：200-206.

[14]Taillandier L，Antunes L，Angioi-Duprez K S. Models for neuro-oncological preclinical studies：solid orthotopic and heterotopic grafts of human gliomas into nude mice[J]. Neurosci Methods，2003，125(1/2)：147-157.

[15]Euhus D M，Cler L，Shivapurkar N，et al. Loss of heterozygosity in benign breast epithelium in relation to breast cancer risk[J]. Natl Cancer Inst，2002，94(11)：858-860.

[16]Phillips R M，Bibby M C，Double J A. Experimental correlations of in vitro drug sensitivity with in vivo responses to ThioTEPA in a panel of murine colon tumours[J]. Cancer Chemother Pharmacol，1988，21：168-172.

[17]Phillips R M，Bibby M C，Double J A，et al. Therelationship between the in vitro chemosensitivity of tumor cells and tumor response in vivo in an experimental tumor model[J]. Cell Cloning，1991，9：144-154.

[18]Jhingook Kim，Eun Sung Hwang，Jong Sik Kim .Intraperitoneal gene therapy with adenoviral-mediated p53 tumor suppressor gene for ovarian cancer model in nude mouse[J]. Cancer Gene Therapy，1999，6( 2)：172-178.

[19]Tamada Y，Aoki D，Nozawa S，et al. Model for paraaortic lymph node metastasis produced by orthotopic implantation of ovarian carcinoma cells in athymic nude mice[J]. Cancer，2004，40(1)：158-163.

[編輯] 一 凡

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2012.06.032

R737.31

A

1673-1409(2012)06-R070-03

2012-04-02

張雷(1983-)，女，湖北松滋人，醫(yī)師，主要從事婦科腫瘤臨床與研究工作；通訊作者：易村犍，E-mail：cunjiany@yahoo.com.cn