張彥霞，續(xù)雪紅，喬海霞，張玉妥

（1．河北北方學(xué)院微生物研究所，河北 張家口075000；2．天津市河?xùn)|區(qū)向陽(yáng)樓街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，天津300000）

景天三七又名土三七，為景天科植物景天三七 （Sedum aizoon L．）的全草。是一種藥食兩用的植物，味甘、微酸、性平、無(wú)毒，有涼血止血、散瘀、消炎、安神、鎮(zhèn)痛等作用［1－2］。土三七的營(yíng)養(yǎng)及藥用價(jià)值較為廣泛，應(yīng)用于衄血、咳血、吐血、尿血、子宮出血及外傷和內(nèi)臟出血、血小板減少性紫癜、白血病等癥［1］。該藥含有沒(méi)食子酸 （gallic acid）和谷甾醇等成分。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［2］沒(méi)食子酸具有抗菌、抗病毒和抗腫瘤作用。

隨著廣譜抗菌藥物的大量應(yīng)用，銅綠假單胞菌的感染和耐藥性日趨嚴(yán)重，特別是多重耐藥銅綠假單胞菌在臨床上引起的感染，治療非常棘手且死亡率高，因此迫切需要研制一種能夠抑制多重耐藥銅綠假單胞菌的新型制劑。前期的實(shí)驗(yàn)及有關(guān)報(bào)道均表明景天三七對(duì)銅綠假單胞菌有抑制作用且抑菌作用較強(qiáng)［3］，進(jìn)一步研究了景天三七醇提物和水提物對(duì)多重耐藥銅綠假單胞菌的體外抑菌作用，為開(kāi)發(fā)中草藥抗菌制劑提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 一般資料

1．1．1 儀器 721分光光度計(jì)；培養(yǎng)箱；無(wú)菌超凈工作臺(tái)；高壓蒸汽滅菌器；分析天平。

1．1．2 試藥 景天三七：由河北北方學(xué)院中醫(yī)系鑒定。

1．1．3 菌種 銅綠假單胞菌標(biāo)準(zhǔn)菌株購(gòu)自北京生物制品檢定所；臨床菌株來(lái)自河北北方學(xué)院第一附屬醫(yī)院微生物科。

1．1．4 培養(yǎng)基

1．1．4．1 液體培養(yǎng)基：Mueller－Hinton （MH）肉湯。

1．1．4．2 固體培養(yǎng)基：Mueller－Hinton （MH）瓊脂。

1．2 方法

1．2．1 景天三七水煎劑及醇提物的制備 參照陳奇的方法［4］進(jìn)行，景天三七水煎劑及醇提物均濃縮成含生藥1 g·m L－1的藥液，滅菌后備用。

1．2．2 菌液的制備

1．2．2．1 0．5麥?zhǔn)媳葷峁芘渲?操作參考醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)［5］。

1．2．2．2 菌液制備 將實(shí)驗(yàn)所用20株菌的培養(yǎng)物 （菌落）用無(wú)菌生理鹽水制成菌液，濃度相當(dāng)于0．5麥?zhǔn)媳葷?，比濁液相?dāng)于5× （107～108CFU·m L－1）。

1．2．3 抑菌實(shí)驗(yàn)方法 稀釋法：取無(wú)菌小試管5支作為一組，第一管加無(wú)菌肉湯0．4 m L其余各管加肉湯0．5 m L，再依次加藥液，第一管和第二管加藥液0．5 m L，從第二管開(kāi)始倍比稀釋。然后第二至第五支試管各加肉湯0．4 m L，同樣方法制備20組試管。每組試管土三七醇提物和水煎劑的最終稀釋度依次為：0．5 g·m L－1、0．25 g·m L－1、0．125 g·m L－1、0．0625 g·m L－1、0．03125 g·m L－1。實(shí)驗(yàn)時(shí)將20株實(shí)驗(yàn)菌液分別加入20組含藥液培養(yǎng)基的試管中，每管0．1 m L菌液，同時(shí)設(shè)培養(yǎng)基、藥液和菌液對(duì)照管。所有試管放置溫箱內(nèi)37℃，培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果，在對(duì)照管符合要求的情況下，將各實(shí)驗(yàn)管的培養(yǎng)物接種至相應(yīng)培養(yǎng)基的瓊脂平板上，確定是否有細(xì)菌生長(zhǎng)。37℃，24 h觀察結(jié)果，以瓊脂平板上完全無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的藥物最高稀釋度為最低抑菌濃度 （MIC）。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2．1 景天三七水煎劑對(duì)20株多重耐藥銅綠假單胞菌的最低抑菌濃度 （MIC）見(jiàn)表1。

表1 景天三七水煎劑對(duì)20株多重耐藥銅綠假單胞菌的最低抑菌濃度 （MIC）

表2 景天三七醇提物對(duì)20株多重耐藥銅綠假單胞菌的最低抑菌濃度 （MIC）

2．2 景天三七醇提物對(duì)20株多重耐藥銅綠假單胞菌的最低抑菌濃度 （MIC）見(jiàn)表2。

2．3 景天三七醇提物對(duì)20株多重耐藥銅綠假單胞菌的抑菌作用MIC（g·m L－1）見(jiàn)表3。

表3 景天三七醇提物對(duì)20株多重耐藥銅綠假單胞菌的抑菌作用MIC（g·mL－1）

2．4 景天三七醇提物對(duì)20株多重耐藥銅綠假單胞菌的累積抑菌率 （%）見(jiàn)表4。

表4 景天三七醇提物對(duì)20株多重耐藥銅綠假單胞菌的累積抑菌率 （%）

抑菌結(jié)果顯示景天三七水煎劑對(duì)20株多重耐藥銅綠假單胞菌的MIC50大于0．5 g·m L－1，而醇提物的MIC50為0．125 g·m L－1，由此可見(jiàn)景天三七醇提物對(duì)20株多重耐藥銅綠假單胞菌的抑菌作用強(qiáng)于水煎劑。

3 討 論

景天三七醇提物和水提物對(duì)20株臨床分離的多重耐藥銅綠假單胞菌有不同程度的體外抗菌作用。醇提物對(duì)銅綠假單胞菌的MIC50為0．125 g·m L－1，MIC90為0．25 g·m L－1。結(jié)果表明景天三七醇提物對(duì)多重耐藥銅綠假單胞菌有較強(qiáng)的抑制作用。

銅綠假單胞菌是最常見(jiàn)的醫(yī)院內(nèi)感染致病菌，位居非發(fā)酵細(xì)菌感染之首。隨著抗生素尤其是廣譜抗生素的廣泛使用，銅綠假單胞菌耐藥情況越來(lái)越嚴(yán)重，已出現(xiàn)了多重耐藥甚至全耐藥的菌株，因此迫切需要研制出能夠抑制多重耐藥銅綠假單胞菌的新型制劑。本實(shí)驗(yàn)提示景天三七醇提物對(duì)控制銅綠假單胞菌的感染可能有一定的應(yīng)用價(jià)值。

目前對(duì)于景天三七抑菌作用的報(bào)道較少，有臨床報(bào)道顯示景天三七有一些不良反應(yīng)，最為嚴(yán)重的不良反應(yīng)是導(dǎo)致的肝小靜脈閉塞?。?－7］。所以，關(guān)于景天三七的更多有效抑菌成分分析和藥理藥效等方面的工作，有待進(jìn)一步研究，為景天三七應(yīng)用于臨床抗菌治療提供充足的科學(xué)依據(jù)。

［1］ 國(guó)家中醫(yī)藥管理局 《中華草本》編委會(huì)．中華草本，第3冊(cè) ［M］．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：765．

［2］ 韓敏，趙莉．景天屬植物研究進(jìn)展 ［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，33（11）：2129－2141．

［3］ 張彥霞，喬海霞，單永強(qiáng)，等．景天三七醇提物體外抗菌作用的研究．河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2011，27（5）：78－80．

［4］ 陳奇主編．中藥藥理研究方法學(xué) ［M］．北京：人民衛(wèi)生出版社，1993，67－261．

［5］ 張玉妥，季建軍．醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) ［M］．北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：42．

［6］ 徐海波．土三七致肝小靜脈閉塞病14例臨床分析 ［J］．中國(guó)鄉(xiāng)村醫(yī)藥，2010，17（9）：45．

［7］ 黃煥軍，劉瑤，林菊生，等．土三七致肝小靜脈閉塞病診斷及治療體會(huì) ［J］．臨床消化病雜志，2008，20（1）：28．