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土壤中馬鈴薯粉痂病菌的簡(jiǎn)易檢測(cè)方法

2012-02-23 06:17:38惠娜娜李繼平馬永強(qiáng)李建軍周天旺李青青
中國(guó)蔬菜 2012年10期
關(guān)鍵詞:誘餌病菌番茄

惠娜娜 李繼平 王 立 馬永強(qiáng) 李建軍 周天旺 李青青

(甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所,甘肅蘭州 730070)

馬鈴薯粉痂病是由馬鈴薯粉痂菌(Spongospora subterranean)引起的真菌性病害,世界上許多地區(qū)都有發(fā)生。我國(guó)內(nèi)蒙古、廣東、貴州、江西、浙江、云南等地均有報(bào)道,20世紀(jì)60年代甘肅省隴南市也發(fā)現(xiàn)了馬鈴薯粉痂病。筆者2008~2011年在渭源縣會(huì)川試驗(yàn)田收獲期馬鈴薯塊莖調(diào)查中發(fā)現(xiàn),一般田塊馬鈴薯粉痂病病薯率在5%~20%,重病田病薯率在90%以上。由于馬鈴薯粉痂病主要是土壤帶菌,土壤中病菌的檢測(cè)和定量成為解決這一病害的首要問(wèn)題。國(guó)外對(duì)馬鈴薯粉痂病菌的檢測(cè)研究較多,F(xiàn)lett(1983)提出了以番茄幼苗作為誘餌檢測(cè)土壤中的馬鈴薯粉痂病菌,隨后Merz(1989)、Wale 等(1993)也報(bào)道了番茄誘餌法,這種方法非常靈敏,微量的土壤就可檢出。國(guó)內(nèi)對(duì)馬鈴薯粉痂病菌檢測(cè)研究較少,本試驗(yàn)利用番茄幼苗對(duì)土壤中馬鈴薯粉痂病菌情況進(jìn)行了檢測(cè),以期為該病害的防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試番茄(Lycopersicon esculentumMill.)品種為陽(yáng)光908,市售。乳酚油:苯酚結(jié)晶(加熱融化)20 mL、乳酸20 mL、甘油40 mL、水20 mL。酸性品紅:高級(jí)純70%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)在甘肅省定西市渭源縣會(huì)川鎮(zhèn)進(jìn)行,位于甘肅省中部,海拔2 300 m 左右,氣候陰濕,晝夜溫差大,年平均氣溫4.7 ℃,年降水量650 mm,無(wú)霜期130 d 左右。試驗(yàn)地為半陰坡地,土壤為黑麻壚土,肥力中等。

試驗(yàn)共設(shè)4 個(gè)處理(表1),每處理3 次重復(fù)。

表1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3 土壤樣品的采集

采用五點(diǎn)采樣法,于2011年4月上旬在每個(gè)試驗(yàn)小區(qū)采集0~10 cm 越冬土壤,裝入布袋子,編號(hào),將土樣帶回實(shí)驗(yàn)室混勻備用。將采集的土壤倒入鋼盤,壓平,挑出石子,篩平劃對(duì)角線,取對(duì)角的兩部分土,繼續(xù)篩平,再取對(duì)角線的兩部分土,重復(fù)多次后,混勻篩平稱取1 g 干土,其余的土壤裝起來(lái)放入冰箱備用。

1.4 番茄幼苗誘餌法

1 g 土壤加入到1 000 mL 0.3%的水瓊脂中配成土壤液。將培育50 d 的健康番茄幼苗移栽到裝有滅菌蛭石的育苗缽中,每株番茄幼苗加10 mL 土壤液,每個(gè)處理20 株,室溫下培育,7 d澆1 次營(yíng)養(yǎng)液,30 d 左右檢查番茄根系,鏡檢(Flett,1983)。

2 結(jié)果與分析

2.1 馬鈴薯重茬土壤中的粉痂病菌

利用番茄幼苗檢查馬鈴薯一年茬及空茬(蠶豆茬)0~10 cm 土壤中馬鈴薯粉痂病菌,結(jié)果發(fā)現(xiàn):蠶豆茬土壤培育的番茄苗植株生長(zhǎng)正常,根系未見瘤狀物,顯微鏡鏡檢未發(fā)現(xiàn)粉痂病菌休眠孢子囊;一年茬土壤培育的番茄苗植株生長(zhǎng)不整齊,植株矮化,根系腫大(圖1-a),顯微鏡下鏡檢發(fā)現(xiàn)粉痂病菌休眠孢子囊(圖1-b)。

圖1 粉痂病菌侵染番茄根系癥狀及根系組織中粉痂病菌休眠孢子囊

2.2 馬鈴薯重茬土壤中的番茄粉痂病病株率

馬鈴薯一年茬、兩年茬、三年茬土壤培育的番茄苗,植株有不同程度的矮化,根系腫大、有瘤狀物,番茄粉痂病病株率分別為82.35%、100.00%、100.00%(表2)。

表2 馬鈴薯重茬土壤中番茄粉痂病病株率

3 結(jié)論與討論

國(guó)外對(duì)粉痂病菌的研究較多,土壤帶菌量的檢測(cè)方法已經(jīng)從20世紀(jì)90年代的誘餌法到ELISA 法(Harrison et al.,1994;Wallace et al.,1995),到現(xiàn)在的PCR 技術(shù)(Bell,1998;Qu et al.,2000;van de Graaf et al.,2003),定量檢測(cè)土壤中粉痂病菌既快速又精確。國(guó)內(nèi)對(duì)馬鈴薯粉痂病菌的研究較少,主要集中在病害的發(fā)生與防治方面(楊艷麗 等,2007;余光海 等,2008)?;菽饶鹊龋?009)對(duì)馬鈴薯粉痂病病原菌及其在甘肅省會(huì)川的發(fā)生情況作了報(bào)道。本試驗(yàn)以番茄幼苗作為誘餌,檢測(cè)馬鈴薯重茬土壤中的粉痂病菌,結(jié)果發(fā)現(xiàn)土壤中粉痂病菌繁殖體與連作年限有關(guān)。但由于番茄幼苗誘餌法只能檢測(cè)到土壤中粉痂病菌活的游動(dòng)孢子,對(duì)休眠孢子無(wú)法檢測(cè)到,所以還不能完全代表土壤中粉痂病菌繁殖體的數(shù)量,對(duì)于連作土壤中粉痂病菌的定量檢測(cè)和總體數(shù)量變化有待進(jìn)一步研究。

惠娜娜,李繼平,李建軍,王立,李青青.2009.甘肅省馬鈴薯窖藏期粉痂病的初步調(diào)查.中國(guó)蔬菜,(21):24-25.

楊艷麗,王利亞,羅文富,孫茂林,劉霞.2007.馬鈴薯粉痂病綜合防治技術(shù)初探.植物保護(hù),33(3):118-121.

余光海,黃吉會(huì),付照聰,朱大權(quán),王蓮存,葛林欽,龍坤元.2008.云南省會(huì)澤縣馬鈴薯粉痂病發(fā)生情況調(diào)查分析初報(bào).中國(guó)植保導(dǎo)刊,(11):21-22.

Bell K.1998.Detection and quantification ofSpongospora subterraneaf.sp.subterranea by specific DNA amplification.ICPP98:www.bspp.org.uk/icpp98/abstracts/6/57.html.

Flett S P.1983.A technique for detection ofSpongospora subterraneanin soil.Transactions of the British Mycological Society,81:424-425.

Harrison J G,Lowe R,Wallace A,Williams N A.1994.Detection ofSpongospora subterraneaby ELISA using monoclonal antibodies//Schots A,Dewey F M,Oliver R.Modern assays for plant pathogenic fungi:identification,detection and quantification.Wallingford:CAB International:23-27.

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Wallace A,Williams N A,Lowe R,Harrison J G.1995.Detection ofSpongospora subterraneausing monoclonal antibodies in ELISA.Plant Pathology,44:355-365.

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